产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens，CP）是引起蛋鸡坏死性肠炎的主要致病菌型。CP会分泌20余种致病外毒素和酶[1]。在这些致病外毒素中，毒素A-α[2]和毒素G-NetB[3]对禽类的致病性最强。梭菌感染也会引发蛋鸡的其他疾病，侵害机体肠道健康[4]。CP属于条件性致病菌，受养殖环境影响较大。宿主免疫力下降出现应激反应时，肠内CP会迅速繁殖增长，并产生大量外毒素，毒素会附着于机体肠道黏膜上皮，阻碍饲料中营养元素在肠道毛细血管上的吸收和运输，进而引发一系列的肠道疾病[5]。抗菌类药物可以抑制梭菌的生长繁殖，但对肠道发育会造成一定的负面影响[6]。植物精油（essential oil，EO）对肠道梭菌具有很好的抑制作用，能够显著提高肠道内消化酶活性和饲料消化率，有效降低蛋鸡腹泻率和死淘率[7]。一些细菌病毒可以在不同宿主之间与机体共噬营养物质影响其生存繁殖[8]。植物精油能够破坏细菌之间的群体感应，降低细菌中致病因子的活性，从而减少致病菌对动物体的毒性[9]。本试验研究植物精油对蛋鸡生产性能、血清生化指标、肠道发育及肠道菌群的影响，为植物精油在蛋鸡养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料植物精油选自某饲料公司，植物精油中DL-α-生育酚乙酸酯≥450 IU/kg，烟酰胺≥900 mg/kg，单月桂酸甘油酯≥10%，水分≤10%。1.2试验设计试验在贵州某蛋鸡场进行。采用单因素完全随机试验设计。选取430日龄体重相近的金粉一号蛋鸡16万只，随机分为EO组和CO组，每组5个重复，每个重复1.6万只鸡。CO组饲喂基础饲粮，EO组在基础饲粮中添加200 g/t植物精油。试验期40 d。试验基础饲粮选用玉米-豆粕型饲粮，配方参考GB/T 5916—2020中的蛋鸡饲养标准配制[10]。基础饲粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.04.010.T001表1基础饲粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米61.00代谢能/(MJ/kg)11.39豆粕（43%）24.00粗蛋白/%15.78豆油1.00钙/%4.08石粉7.00总磷/%0.49预混料2.00蛋氨酸/%0.31麸皮4.70赖氨酸/%0.62食盐0.30苏氨酸/%0.63注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 8 000 IU、VD 1 800 IU、VE 12.50 mg、VK3 1.00 mg、VB1 1.50 mg、VB2 3.10 mg、VB6 1.90 mg、VB12 0.06 mg、烟酸20.00 mg、泛酸5.60 mg、叶酸1 mg、Fe 46 mg、Cu 6 mg、Mn 50 mg、Zn 30 mg、I 0.35 mg、Se 0.30 mg2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理两组试验蛋鸡统一饲养管理，每日光照15~17 h，采用6层阶梯笼养。每日早晚捡蛋各1次。蛋鸡自由采食、饮水，水质保持清洁，每天清粪1次。试验期间，记录采食量、每日产蛋率、发病情况等。1.4测定指标及方法1.4.1生产性能每天记录每个重复蛋鸡的采食量、蛋重、产蛋数和合格蛋数，计算料蛋比、产蛋率和蛋合格率。平均日采食量=总采食量/试验天数(1)料蛋比=平均日采食量/平均蛋重(2)产蛋率=日产蛋数/日存栏数(3)蛋合格率=日合格蛋数/日产蛋数(4)1.4.2血清生化及免疫指标试验第40 d，蛋鸡禁食12 h，每组随机取10只蛋鸡，颈静脉采血5~6 mL，3 000 r/min离心15 min，分离血清，血清分装于EP管中，-20 ℃冰箱保存。血清生化指标由北京华英生物技术研究所检测，检测方法为比色法（试剂盒：中生北控生物科技股份有限公司），检测仪器采用迈瑞BS-420全自动生化仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）。检测的血清生化及免疫指标包括总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、葡萄糖（GLU）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）等。1.4.3肠道发育形态结构取2~3 cm十二指肠、回肠肠段组织样品，利用生理盐水冲洗，存放于装有固定液的玻璃瓶中。制作各肠段组织切片，进行石蜡切片的观察、测量、取图、拍照。将固定的肠段组织进行脱水、石蜡包埋和切片处理，在显微镜下观察，测量肠道绒毛发育形态结构并分析数据。1.4.4肠道微生物区系取盲肠内容物，-80 ℃冰箱保存。准备MRS培养基、生理盐水（乳酸杆菌所需）、亚硫酸盐-多黏菌素-磺胺嘧啶琼脂培养基、TSC琼脂、0.1%蛋白胨水（产气荚膜梭菌所需）。培养后测定乳酸杆菌和产气荚膜梭菌数。乳酸菌测定方法参考GB 4789.35—2016，产气荚膜梭菌测定方法参考GB 4789.13-2012。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel软件处理，SPSS 19.0软件进行单因素方差分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1植物精油对蛋鸡生产性能的影响（见表2）由表2可知，与CO组相比，EO组平均日采食量降低了4.07%，料蛋比降低了3.26%，蛋合格率提高了1.6%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.04.010.T002表2植物精油对蛋鸡生产性能的影响项目平均日采食量/[g/(只·d)]平均蛋重/(g/枚)料蛋比平均日产蛋率/%蛋合格率/%P值0.7880.8800.5670.3250.079CO组119.08±1.0864.62±2.221.84±0.7686.24±1.2295.81±0.69EO组114.23±0.9964.38±1.881.78±0.9186.38±1.3097.34±0.812.2植物精油对蛋鸡血清生化和免疫指标的影响（见表3、表4）由表3可知，与CO组相比，EO组蛋鸡血清中TP、GLB、HDL含量分别提高了11.1%、16.2%、38.1%。EO组蛋鸡血清中TC、GLU和TG含量均高于CO组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.04.010.T003表3植物精油对蛋鸡血清生化指标的影响项目TP/(g/L)ALB/(g/L)GLB/(g/L)TC/(mmol/L)TG/(mmol/L)GLU/(mmol/L)HDL/(mmol/L)LDL/(mmol/L)P值0.0880.9990.0940.7170.3860.3980.1290.905CO组45.74±6.0114.45±1.5831.29±4.473.28±0.7315.87±2.189.72±1.430.97±0.390.80±0.48EO组50.82±3.7814.46±1.5936.36±2.293.60±0.4318.12±1.1211.17±0.771.34±0.280.83±0.25由表4可知，与CO组相比，EO组蛋鸡血清中IgA和IgG含量显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.04.010.T004表4植物精油对蛋鸡血清免疫指标的影响项目IgAIgGIgMP值0.0020.0060.068CO组1.62±0.16b4.00±0.19b1.33±0.24EO组2.05±0.15a4.48±0.22a1.55±0.17注：同列数据肩标无字母或字母相同表示差异不显著（P0.05），字母不同表示差异显著（P0.05）；下表同。g/L2.3植物精油对蛋鸡肠道形态发育结构和菌群的影响（见表5、表6、图1、图2）由表5、图1、图2可知，与CO组相比，EO组十二指肠的隐窝深度降低了22.9%（P0.05），绒腺比降低了15.1%（P0.05）；EO组回肠的绒毛长度与隐窝深度均增加，绒腺比降低了10.9%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.04.010.T005表5植物精油对蛋鸡肠道形态发育结构的影响项目十二指肠回肠绒毛长度/μmCO组1 311.90±0.591 279.70±0.71EO组793.60±0.241 445.90±0.10P值0.2290.708隐窝深度/μmCO组156.70±0.01122.10±0.03EO组120.80±0.04193.30±0.09P值0.1940.285绒腺比CO组8.41±3.3110.27±3.16EO组7.14±1.889.15±4.57P值0.5930.74310.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.04.010.F001图1十二指肠绒毛发育形态结构10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.04.010.F002图2回肠绒毛发育形态结构由表6可知，与CO组相比，EO组肠道乳酸杆菌数量提高了20.8%（P0.05）；EO组肠道产气荚膜梭菌数量显著降低了22.8%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.04.010.T006表6植物精油对蛋鸡肠道菌群的影响项目乳酸杆菌产气荚膜梭菌P值0.2180.048CO组2.98±0.753.91±0.23aEO组3.60±0.613.02±0.59blgCFU/g3讨论3.1植物精油对蛋鸡生产性能的影响植物精油可以有效提高蛋鸡的产蛋率、蛋重。秦晓庆等[11]研究表明，添加150 mg/kg的植物精油降低了蛋鸡的平均日采食量。本试验发现，添加200 g/t植物精油，蛋鸡的平均日采食量降低了4.07%，料蛋比降低，与上述试验结果相似。原因可能是植物精油本身稳定性较差、易挥发，散发刺激性气味，影响了蛋鸡的采食量[12]。在不影响蛋重和日产蛋率的情况下，料蛋比的减少、蛋合格率的提升意味着脏蛋、畸形蛋和破蛋的数量减少，对于降低饲养成本尤为重要。MOHITI-ASLI等[13]研究表明，饲喂植物精油降低了肉鸡平均日采食量，但平均日增重等指标与对照组无显著差异，这说明植物精油在降低采食量的情况下可以保证禽类的日常营养需求，与本试验结果相符。3.2植物精油对蛋鸡血清生化指标的影响饲喂植物精油对蛋鸡血清中蛋白质、胆固醇以及甘油三酯影响不大。有研究报道，饲粮中添加1 200 mg/kg植物精油对肉鸡血清总蛋白含量无显著影响[14]。程浩[15]研究表明，饲粮中添加复合型植物精油对蛋鸡血液中蛋白质、甘油三酯以及总胆固醇无显著影响，与本试验结果一致。血清生化指标可以判断动物营养吸收代谢能力、机体健康状态以及组织器官功能。动物体对蛋白质的吸收代谢能力与血清中的总蛋白含量有关。本试验中，饲喂植物精油的蛋鸡血清中总蛋白含量有所提高。原因是植物精油中含有烟酰胺（NAM），NAM是VB3的一种存在形式，通常以Na+的形态通过载体介导的方式与动物体中蛋白质产生反应，生成烟酰胺辅酶Ⅰ（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）[16]，产物参与机体微生物代谢和细胞合成等重要反应，从而增加了动物体中的蛋白质含量。研究表明，在饲粮中添加不同含量的NAM对泌乳奶牛血液中总蛋白含量具有积极作用[17]。植物精油对蛋鸡血清中的蛋白以及总胆固醇含量的影响还需要进一步验证。3.3植物精油对蛋鸡血清免疫功能的影响IgG占免疫球蛋白总含量的75%，是动物机体内抗病毒、抗细菌感染的主要抗体[18]，IgM、IgA可以判断机体免疫力水平。植物精油具有在细胞分子层面调控动物机体免疫功能的能力[19]，具有抗菌、抗炎和抗氧化等功能[20]。本试验发现，植物精油可以显著提高蛋鸡血清中IgG、IgA含量。原因是DL-α-生育酚乙酸酯生育酚可以通过体液免疫由B淋巴细胞分泌抗体，产生抗原抗体反应，增强蛋鸡免疫系统功能，防止淋巴细胞膜发生脂质过氧化反应，从而诱导B淋巴细胞产生大量抗体，促进T淋巴细胞的增殖分裂和免疫应答反应，增加血清中的免疫球蛋白含量[21]。并且植物精油具备抗炎能力，可通过下调TLR4介导的促炎细胞因子分泌，提高IgG和IgA含量[22]。3.4植物精油对蛋鸡肠道形态发育及菌群的影响肠道是动物机体吸收饲料中营养物质的主要器官之一，小肠绒毛和隐窝的发育状况是反映动物机体消化吸收的重要指标[23-24]。小肠上皮细胞的增殖主要发生在隐窝中，肠道吸收消化、分泌代谢功能越强，小肠隐窝深度越浅[25]。研究发现，饲粮中添加植物精油可以降低肉鸡小肠的隐窝深度[26]。本试验发现，添加200 g/t植物精油蛋鸡十二指肠的隐窝深度、十二指肠和回肠的绒腺比均降低，这与上述研究结果相似。单月桂酸甘油酯是一种碳链短、分子小的中链脂肪酸，具有良好的抗菌作用，可以有效改善动物肠道微环境[27]。肠道黏膜是动物机体的保护屏障，具有识别有害菌、发生免疫应答反应的功能[28]。梭菌属于条件性致病菌，主要附着于机体肠道黏膜上皮，影响肠道黏膜免疫反应，阻碍饲料中营养元素在肠道毛细血管上的吸收和运输，引起IL-1β、TNF-α等促炎细胞因子基因表达量升高，从而损害上皮细胞完整性[29]。单月桂酸甘油酯可以通过TLR/MyD88/NF-κB信号通路介导传递抑制IL-1β以及TNF-α的基因表达量，抑制梭菌在肠道黏膜上皮的生长繁殖，减轻促炎细胞因子对肠道上皮细胞的侵害程度，稳定细胞因子的平衡，调控蛋鸡机体炎症反应，提高机体健康状态[30]。本试验发现，饲喂含有单月桂酸甘油酯的植物精油可以显著降低肠道内产气荚膜梭菌的数量，且不影响乳酸菌在肠道的繁殖，与上述的作用机理基本一致。4结论本研究结果表明，添加200 g/t植物精油可以提高蛋鸡的生产性能，增强机体免疫力，促进肠道形态发育，降低了有害菌的数量。