中兽药除具有天然、安全、无残留、毒副作用小的特点，还具有防病、抗病、提高免疫力、促进生长等作用。中兽药常以原材料、提取物或组合配方的形式作为抗生素替代品进行应用[1]。复方中药饲料添加剂可以改善蛋种鸡的受精率、孵化率、健雏率和死淘率，提高蛋鸡生产性能、蛋品质、鸡蛋营养成分和鸡蛋储藏性能[2-3]。黄芪多糖、枸杞多糖和姬松茸多糖可以改善肉鸡的生长性能和健康水平[4]。坝上长尾鸡是河北北部坝上地区蛋肉两用鸡种，是我国优良的地方品质资源[5-6]。坝上地区也是河北省重要的中药材产地，选择坝上地区中药材用于坝上长尾鸡的养殖具有优势。本研究根据蛋鸡产蛋期的生理特点，筛选河北地区所产中药材并组合制成中草药复方添加剂，拟定不同剂量添加在产蛋后期坝上长尾鸡的饲粮中，研究其对坝上长尾鸡产蛋后期的生产性能、蛋品质和血清生化指标的影响，并确定其最佳添加剂量，为中草药添加剂在坝上长尾鸡生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料中草药复方添加剂原料购自河北省保定市安国中药材市场，成分为益母草、艾蒿、茵陈蒿、荆芥，按2∶2∶1∶1的比例粉碎，混合。试验在河北省张家口市崇礼区绿色田园禽业科技有限公司进行。1.2试验设计试验选取240羽470日龄的健康、体重相近的坝上长尾鸡，随机分为4组，每组6个重复，每个重复10羽鸡。预试期7 d，正式试验期56 d。对照组饲喂基础饲粮，试验组在基础饲粮中分别添加1.0%、1.5%和2.0%的中草药添加剂。基础饲粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.008.T001表1基础饲粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米62.00代谢能/(MJ/kg)11.10豆粕22.00粗蛋白/%15.80石粉8.00钙/%3.45预混料5.00有效磷/%0.39蛋白粉3.00赖氨酸/%0.73蛋氨酸＋胱氨酸/%0.58注：1.每千克预混料为饲粮提供：VA 120 000~200 000 IU、VD3 50 000~100 000 IU、VE 200 mg、VK3 10~100 mg、VB1 18 mg、VB2 60 mg、VB6 40 mg、D-泛酸钙200 mg、烟酰胺400 mg、生物素1 mg、叶酸10 mg、VB12 0.3 mg、Mn 1 000~3 000 mg、I 7~100 mg、Fe 60 mg、Cu 120~500 mg、Zn 1 100~2 400 mg、Se 3~10 mg。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理试验鸡采用3层阶梯笼养方式，常规免疫，舍内自然通风、自然＋人工光照，每日合计光照16 h。乳头式饮水器自由饮水，人工饲喂，自由采食，每日7：30和14：00各喂料1次，根据剩料情况调节给料量，每日8：00进行收蛋工作。1.4测定指标及方法1.4.1产蛋性能试验期间，每日定时收集鸡蛋，称量蛋重，记录产蛋数、不合格蛋数和试验动物死淘情况；每周进行采食量、料蛋比、产蛋率、平均蛋重、不合格蛋率（包括破蛋、软蛋和畸形蛋）的统计汇总。平均日采食量=总采食量/试验天数(1)料蛋比=每周耗料量/每周蛋重(2)产蛋率=每组产蛋数/(每组试验动物数×每周天数)×100%(3)平均蛋重=每组总蛋重/每组鸡蛋数(4)不合格蛋率=不合格蛋数/产蛋总数×100%(5)1.4.2蛋品质在试验末期，每组随机选取16枚鸡蛋，用于测定蛋品质。使用游标卡尺测量鸡蛋横径、纵径，计算蛋形指数，使用KQ-1A蛋壳强度测定仪测定蛋壳强度，使用ORKA鸡蛋全功能品质测试仪测定鸡蛋重量、哈夫单位、蛋白高度、蛋黄颜色，使用蛋清分离器分离蛋黄，称重，计算蛋黄相对重，使用游标卡尺分别测量鸡蛋尖端、中端和钝端的蛋壳厚度，计算平均值，获得蛋壳厚度。蛋形指数=鸡蛋纵径/鸡蛋横径(6)蛋黄相对重=蛋黄重/蛋重(7)蛋壳厚度=(尖端蛋壳厚度+中端蛋壳厚度+钝端蛋壳厚度)/3(8)1.4.3血清抗氧化、激素和免疫指标在饲喂试验结束后，每个重复随机选取2只鸡，每组共12只坝上长尾鸡，翅下静脉采血5 mL至离心管，3 000 r/min离心5 min，收集上层血清，-20 ℃条件下保存。血清抗氧化指标包括超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物歧化酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）以及总抗氧化能力（T-AOC），检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。生殖激素指标包括促卵泡激素（FSH）、促黄体激素（LH）、雌二醇（E2）和孕酮（Prog），检测试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司。血清免疫因子包括干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）和白细胞介素-10（IL-10），检测试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司。1.5数据统计与分析数据采用WPS Office软件进行记录和整理，SPSS 25.0软件进行单因素显著性差异检验分析，Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1中草药对产蛋后期坝上长尾鸡产蛋性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，1.0%、2.0%剂量组的平均蛋重显著升高（P0.05）；1.5%剂量组的产蛋率显著升高（P0.05）；1.5%、2.0%剂量组的不合格蛋率和料蛋比均有下降趋势（P0.05）。研究表明，该中草药组方对产蛋后期坝上长尾鸡的产蛋性能具有改善作用。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.008.T002表2中草药对产蛋后期坝上长尾鸡产蛋性能的影响组别平均蛋重/(g/枚)产蛋率/%不合格蛋率/%料蛋比平均日采食量/[kg/(组·d)]对照组55.23±0.94b37.88±5.05b0.22±0.304.23±0.805.10±0.231.0%剂量组57.03±1.45a39.90±6.63ab0.37±0.553.97±0.865.08±0.301.5%剂量组55.31±0.66b44.87±6.65a0.08±0.213.68±0.765.17±0.272.0%剂量组56.89±1.01a40.35±5.71ab0.20±0.283.96±0.845.11±0.27注：同列数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05），大写字母不同表示差异极显著（P0.01），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2中草药对产蛋后期坝上长尾鸡蛋品质的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，1.0%、1.5%剂量组鸡蛋的哈夫单位有升高趋势（P0.05），1.5%剂量组的蛋壳厚度显著升高（P0.05）。各组蛋形指数、蛋壳强度、蛋黄颜色差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.008.T003表3中草药对产蛋后期坝上长尾鸡蛋品质的影响组别蛋形指数蛋壳强度/N哈夫单位蛋白高度/mm蛋黄颜色蛋黄相对重/%蛋壳厚度/mm对照组1.32±0.0444.19±9.9286.81±10.14ab7.59±1.698.63±1.8230.75±3.180.34±0.03b1.0%剂量组1.32±0.0744.91±8.1390.48±7.83a8.40±1.459.13±1.1530.76±2.210.34±0.03b1.5%剂量组1.31±0.0444.22±9.3391.17±9.57a8.44±2.349.50±1.5131.60±2.580.38±0.06a2.0%剂量组1.31±0.0643.34±10.2681.49±16.43b7.18±2.229.06±1.2931.20±2.710.37±0.05ab2.3中草药对产蛋后期坝上长尾鸡血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，1.5%剂量组血清中GSH-Px活性显著升高（P0.05），各试验组血清中T-AOC有上升趋势（P0.05），1.5%、2.0%剂量组血清中MDA含量有下降趋势（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.008.T004表4中草药对产蛋后期坝上长尾鸡血清抗氧化指标的影响组别SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)GSH-Px/(U/mL)CAT/(U/mL)T-AOC/(mmol/L)对照组718.96±58.303.23±0.752 792.79±287.87b1.33±0.720.87±0.081.0%剂量组712.77±58.833.31±0.472 958.00±309.57ab1.33±0.340.90±0.151.5%剂量组757.13±56.103.10±0.903 207.21±512.34a1.36±0.350.91±0.082.0%剂量组758.69±77.023.09±1.042 954.39±518.17ab1.28±0.340.91±0.142.4中草药对产蛋后期坝上长尾鸡生殖激素的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，各试验组血清中LH、E2和Prog水平极显著升高（P0.01），1.5%、2.0%剂量组血清中FSH水平极显著升高（P0.01）。1.5%、2.0%剂量组血清中FSH、Prog水平差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.008.T005表5中草药对产蛋后期坝上长尾鸡生殖激素的影响组别FSH/(IU/L)LH/(IU/L)E2/(ng/L)Prog/(μg/L)对照组3.44±1.99B11.96±1.56C226.15±37.28D12.90±2.26C1.0%剂量组5.12±1.65AB15.17±2.46B292.86±40.37C15.54±2.09B1.5%剂量组6.77±1.91A16.58±2.00B345.89±55.21B18.70±2.24A2.0%剂量组6.77±1.91A18.87±1.87A395.73±42.65A20.40±2.25A2.5中草药对产蛋后期坝上长尾鸡免疫因子的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，1.5%、2.0%剂量组血清中IFN-γ水平极显著升高（P0.01），2.0%剂量组血清中IL-2水平极显著升高（P0.01），各试验组血清中IL-10水平均有所提高（P0.05）。研究表明，该中草药组方可以提高坝上长尾鸡产蛋后期的免疫水平，增强机体抗病力。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.008.T006表6中草药对产蛋后期坝上长尾鸡血清免疫因子的影响组别IFN-γIL-2IL-10对照组36.46±6.41B104.34±19.85B41.63±6.361.0%剂量组34.19±7.08B119.79±33.65B43.67±9.981.5%剂量组46.44±5.26A114.05±28.49B56.44±9.642.0%剂量组52.13±4.87A168.24±29.00A57.57±10.50ng/L3讨论3.1中草药对产蛋后期坝上长尾鸡产蛋性能的影响产蛋率、蛋重、料蛋比和不合格蛋率等指标可以综合评定家禽的产蛋性能。产蛋性能与家禽养殖的经济效益成正比。益母草和艾蒿对机体的生殖、消化、免疫机能具有良好的调节作用，能够促进机体对营养物质的吸收和利用，改善禽类的产蛋性能[7-8]。张宇逸等[9]研究发现，在老龄蛋鸡的饲粮中添加一定比例的复方益母草粉可以提高产蛋率、平均蛋重和鸡蛋中的总干物质，降低畸形蛋率。候天玉[10]研究发现，在饲粮中添加2%艾叶对蛋鸡产蛋率有显著的提高作用。艾蒿含有的有机酸类成分可以改善饲料成分的溶解度和机体对营养物质消化吸收，提高产蛋量和蛋白代谢率，改善饲料转化率和料蛋比[11]。本研究结果显示，添加适量的中草药对产蛋后期坝上长尾鸡的料蛋比、平均日采食量无显著影响，但能够显著提高产蛋率和蛋重，表明该中草药组方对产蛋后期坝上长尾鸡的产蛋性能具有一定的改善作用。3.2中草药对产蛋后期坝上长尾鸡蛋品质的影响哈夫单位和蛋白高度是测定鸡蛋新鲜度的重要指标。鸡蛋在储存流通过程中品质会发生不同程度的变化，延长鸡蛋的保鲜时长和流通期限，可以减少因鸡蛋变质造成的经济损失。在蛋鸡饲粮中添加一定剂量的益母草提取物，可以提高蛋壳强度、哈夫单位以及蛋壳厚度[12-13]。在饲粮中单独添加艾叶可以增加鸡蛋和蛋清的重量，加深蛋黄颜色，降低蛋壳厚度、胆固醇含量以及蛋清和蛋黄中多不饱和脂肪酸的含量[14-15]。周子晖等[16]研究表明，中药组方（益母草、当归等）可以显著降低破蛋率和砂壳蛋率，提高采食量、蛋壳强度、蛋黄重和蛋黄比例。本研究显示，中草药添加剂对鸡蛋的哈夫单位和蛋壳厚度具有显著影响，但高剂量组的哈夫单位低于对照组。哈夫单位的变化主要和蛋白高度有关，蛋白水解，浓厚蛋白变稀，蛋白高度随之下降，哈夫单位变小。本试验中，高剂量组的蛋白高度远低于对照组，这可能与添加物的剂量或药物之间的相互作用有关，影响因素较复杂，具体原因有待进一步研究。3.3中草药对产蛋后期坝上长尾鸡血清抗氧化性的影响血清抗氧化性指标代表机体内部抗氧化损伤作用的能力，可以反映机体的健康和抗病水平。抗氧化能力主要受机体内部和外部环境两方面的影响，包括衰老、疾病、运动、饮食以及紫外线辐射等因素[17]。在动物自身健康的条件下，机体内部的氧化反应也会随着动物日龄的增长逐渐增多，对正常细胞造成氧化损伤的活性氧成分逐渐增多，抗氧化物质逐渐减少，抗氧化能力随之下降，动物体内潜在的有害物质发挥作用，最终降低机体健康水平。张帅等[18]发现，以益母草、牛膝、丹参为君药自拟的中药复方增蛋散可以降低蛋鸡血清中MDA含量，提高血清、肝脏中谷胱甘肽（GSH）活性，提高输卵管壶腹部中总蛋白（TP）含量及卵巢中T-SOD活性，增强了蛋鸡机体的抗氧化能力。HU等[19]研究表明，艾叶黄酮对动物机体具有良好的抗氧化作用。茵陈提取物可以降低过氧化物酶体增殖物激活的受体水平，增强机体的抗氧化性能[20]。张乐乐等[21]研究表明，荆芥水相提取物在2, 2′-二氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）（ABTS法）体系下表现出极高的抗氧化活性，平均每克提取物的抗氧化活性相当于4.95 mmol的水溶性维生素E。本试验发现，中草药添加剂可以调控血清中SOD、GSH-Px和CAT活性，减少MDA含量，缓解氧化应激对机体的伤害，这可能与中草药中含有的多糖类、黄酮类等抗氧化物质有关。3.4中草药对产蛋后期坝上长尾鸡生殖激素的影响生殖激素水平是影响蛋鸡产蛋性能的重要因素之一，提高蛋鸡体内的激素水平可以在一定限度上促进更多卵泡的发育生长，从而增加产蛋数量。有研究表明，益母草碱可以促进下丘脑中促性腺激素释放激素的表达，进而刺激垂体对卵泡素和促黄体生成素的分泌，调节子宫组织中E2受体以及E2受体mRNA的表达[22]。曾佳佳等[23]通过植物乳杆菌发酵中药组方，以3.33 mL/(只·d)的剂量进行饮水给药试验，发现该复方制剂可以增加产蛋后期蛋鸡体内E2的含量，同比对照组提高了60.71%。韩坤良等[24]研究表明，复方中药超微粉（益母草、丹参、女贞子、蒲公英）可以提高蛋鸡输卵管子宫中碳酸酐酶2、钙黏蛋白6、钾离子通道1和溶质转运蛋白相关基因的表达。在蛋鸡饲粮中添加艾叶可以上调与繁殖性能相关基因PFXP1、ESR1、LHCGR在子宫中的表达量[8]。本研究显示，中草药试验组的生殖激素水平均高于对照组，这表明该组方中草药添加剂可以影响下丘脑-垂体-性腺调节轴，促进机体生殖激素分泌，改善卵泡发育，对坝上长尾鸡产蛋后期的产蛋性能具有正向调节作用。3.5中草药对产蛋后期坝上长尾鸡免疫功能的影响中草药中含有的多糖类、有机酸类等活性成分可以促进动物体内胸腺、脾脏等免疫器官的发育，提高机体免疫力[25]。彭凤强等[26]研究表明，基础饲粮中添加0.5%的复方中草药，可以提高和田黑鸡血清中免疫球蛋白的含量，提高胸腺、脾脏和法氏囊指数，提升新城疫和鸡传染性支气管炎的抗体滴度。茵陈蒿中含有咖啡酸、茵陈色原酮、植物蛋白等成分，咖啡酸可以促进白细胞分裂，增加机体中白细胞的数量；茵陈色原酮通过调控NF-κB通路，减少肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达；植物蛋白具有诱生干扰素作用，可以调节免疫水平[27-28]。在饲粮中添加益母草碱可以增强肉鸡的免疫功能和抗氧化水平[29-30]。YANG等[31]研究发现，艾蒿黄酮可通过调节免疫器官指数和免疫因子改善LPS肉鸡的免疫状况。归荣等[32]研究发现，蛋鸡食用含有2%艾草粉的饲粮可以提高肠道黏膜中IFN-γ和紧密连接蛋白含量，降低TNF-α含量。杨明慧等[33]对咳嗽模型小鼠进行荆芥汤灌胃试验，发现荆芥汤可以改善小鼠咳嗽症状，并提高脾脏中淋巴细胞亚群和血清中免疫因子的指数，提高小鼠的机体免疫水平。本研究发现，不同剂量中草药可以不同程度地上调产蛋后期坝上长尾鸡血清中免疫因子IFN-γ、IL-2和IL-10水平，提高机体免疫水平，增强抵抗力。4结论饲粮中添加由益母草、艾蒿、茵陈蒿和荆芥组成的中草药复方添加剂对产蛋后期坝上长尾鸡的产蛋性能、蛋品质、血清抗氧化性、生殖激素和免疫因子指标均具有正向调节作用，该中草药添加剂的添加量以1.5%为宜。