蛋鸡进入产蛋后期，机体功能减弱，易发生氧化应激[1-2]。蛋鸡处于应激状态时，机体的抗病力逐渐降低，生产性能也随之降低，进而影响养殖的生产效益[3-4]。因此，在蛋鸡产蛋后期改善蛋鸡机体健康、提高产蛋性能对养殖生产具有重要意义。葡萄糖氧化酶是一种功能性饲料添加剂，具有无耐药性、无残留、安全绿色等特点[5-6]。研究发现，葡萄糖氧化酶可以调节机体免疫力，增强抗氧化能力，降低肠道pH值，改善肠道健康，促进机体对饲料养分的消化吸收，进而改善生产性能及畜产品品质[7-9]。目前，葡萄糖氧化酶在蛋鸡生产中的研究主要集中在蛋鸡产蛋性能及抗氧化功能方面[10-13]，但对蛋鸡机体免疫力方面的研究较少。因此，本试验研究葡萄糖氧化酶对海兰褐蛋鸡产蛋性能、免疫力及抗氧化功能的影响，为葡萄糖氧化酶在蛋鸡生产中应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料葡萄糖氧化酶由北京挑战生物技术有限公司提供，酶活为2 000 U/g。试验蛋鸡为海兰褐蛋鸡，60周龄，产蛋率约为80%。1.2试验设计选择健康的海兰褐蛋鸡1 000只，随机分成5组，每组10个重复，每个重复20只蛋鸡。对照组、试验1组、试验2组、试验3组和试验4组海兰褐蛋鸡分别饲喂含有0、100、200、400、800 mg/kg的葡萄糖氧化酶的试验饲粮。预试期7 d，正式试验期56 d。产蛋后期海兰褐蛋鸡的基础饲粮参考NRC（1994）配制。基础饲粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.009.T001表1基础饲粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米62.14代谢能/(MJ/kg)11.68豆粕18.00粗蛋白/%16.84花生粕6.00钙/%3.73豆油1.50磷/%0.62磷酸氢钙1.40有效磷/%0.33氯化胆碱0.13蛋氨酸/%0.42石粉8.50赖氨酸/%0.77食盐0.33预混料2.00注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 7 700 IU、VD3 2 800 IU、VE 10 IU、VK 3 mg、VB 0.60 mg、烟酸20 mg、叶酸0.35 mg、Mn 53 mg、Fe 65 mg、Cu 4.80 mg、Zn 64 mg、I 1.20 mg、Se 0.22 mg。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理试验开始前，对养殖鸡舍消毒。预试期内所有蛋鸡饲喂基础饲粮。蛋鸡自由采食、饮水。每日观察蛋鸡的健康状态，免疫程序按照日常管理规定进行。1.4测定指标及方法1.4.1产蛋性能每日按照重复记录蛋鸡采食量，准确记录产蛋数量，用于分析产蛋率、料蛋比、平均日产蛋重等数据。料蛋比=平均日采食量/平均日产蛋重(1)平均日采食量=总采食量/(试验天数×蛋鸡数量)(2)平均日产蛋重=平均蛋重×产蛋率(3)产蛋率=总产蛋数量/试验蛋鸡数量(4)1.4.2蛋品质试验结束，每个重复采集2枚鸡蛋用于检测蛋形指数、蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋黄颜色、哈夫单位。采用多功能蛋品质测定仪EA-01（北京天翔飞域仪器设备有限公司）测定上述指标。1.4.3免疫指标试验最后1 d，蛋鸡饲喂前，每组挑选10只蛋鸡，翅下静脉采血5~6 mL，静置3~4 h，离心收集血清，-20 ℃保存。检测血清中的免疫球蛋白（免疫球蛋白A、免疫球蛋白M、免疫球蛋白G）及细胞因子水平（白细胞介素-2、白细胞介素-10、干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α），检测方法参考试剂盒说明书，试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供。1.4.4抗氧化指标采用ELASE方法检测蛋鸡血清总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶及丙二醛等抗氧化相关指标。试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。1.5数据统计与分析试验数据采用SPSS 20进行单因素方差分析，LSD法进行组间数据多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1葡萄糖氧化酶对蛋鸡产蛋性能的影响（见表2）由表2可知，试验2组、试验3组和试验4组海兰褐蛋鸡的产蛋率和平均日产蛋重均显著高于对照组（P0.05），料蛋比均显著低于对照组和试验1组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.009.T002表2葡萄糖氧化酶对蛋鸡产蛋性能的影响项目产蛋率/%平均蛋重/(g/枚)平均日产蛋重/[g/(只·d)]平均日采食量/[g/(只·d)]料蛋比P值0.0410.3190.0460.6910.044对照组80.54±3.05b62.84±2.0850.61±4.11b115.42±5.282.28±0.16a试验1组81.22±2.96ab63.05±3.1751.21±3.17ab115.34±6.212.25±0.12a试验2组82.48±4.18a63.44±4.0752.33±2.95a115.02±3.102.20±0.17b试验3组83.03±4.39a63.57±3.7252.78±3.64a115.03±6.042.18±0.11b试验4组82.39±3.84a63.48±4.4852.30±4.16a115.14±6.192.20±0.23b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2葡萄糖氧化酶对蛋品质的影响（见表3）由表3可知，葡萄糖氧化酶对鸡蛋的蛋形指数、蛋黄颜色、蛋壳质量无显著影响（P0.05）；试验3组和试验4组鸡蛋哈夫单位显著高于对照组和试验1组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.009.T003表3葡萄糖氧化酶对蛋品质的影响项目蛋形指数蛋黄颜色哈夫单位蛋壳厚度/mm蛋壳强度/NP值0.4840.5190.0180.6280.821对照组1.35±0.096.83±0.2681.29±3.19b0.36±0.0238.26±1.83试验1组1.34±0.066.86±0.2182.63±3.10b0.37±0.0338.55±1.38试验2组1.37±0.056.92±0.4583.17±2.08ab0.37±0.0138.71±1.63试验3组1.36±0.036.95±0.3984.22±3.94a0.38±0.0639.04±1.74试验4组1.36±0.046.88±0.5184.63±4.16a0.37±0.0438.95±1.482.3葡萄糖氧化酶对海兰褐蛋鸡血清免疫性能的影响（见表4）由表4可知，试验3组和试验4组蛋鸡血清中免疫球蛋白A和免疫球蛋白M水平显著高于对照组和试验1组（P0.05），试验2组、试验3组和试验4组蛋鸡血清中免疫球蛋白G水平显著高于对照组（P0.05）。试验2组、试验3组和试验4组蛋鸡血清中干扰素-γ、白细胞介素-2及白细胞介素-10水平显著高于对照组（P0.05），而肿瘤坏死因子-α水平显著低于对照组和试验1组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.009.T004表4葡萄糖氧化酶对海兰褐蛋鸡血清免疫性能的影响项目免疫球蛋白A/(g/L)免疫球蛋白M/(g/L)免疫球蛋白G/(g/L)干扰素-γ/(ng/L)白细胞介素-2/(ng/L)肿瘤坏死因子-α/(ng/L)白细胞介素-10/(ng/L)P值0.0450.0420.0290.0280.0360.0330.029对照组0.25±0.03b0.64±0.05b1.82±0.21c65.29±3.18b218.32±12.39b274.18±20.37a73.19±3.19c试验1组0.28±0.03b0.66±0.06b1.97±0.32bc67.36±4.03ab227.47±16.28ab264.84±18.36a76.29±4.17bc试验2组0.34±0.04ab0.72±0.05ab2.34±0.27b70.18±5.03a248.26±17.30a241.49±23.17b81.38±4.04b试验3组0.41±0.05a0.77±0.06a2.85±0.31a73.16±4.29a252.39±18.20a225.27±21.29b84.29±5.18a试验4组0.38±0.03a0.79±0.05a2.42±0.27b72.19±6.28a249.30±16.39a236.25±19.04b82.19±5.27ab2.4葡萄糖氧化酶对海兰褐蛋鸡血清抗氧化性能的影响（见表5）由表5可知，试验2组、试验3组和试验4组蛋鸡血清中总抗氧化能力以及谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活力显著高于对照组（P0.05），且试验3组和试验4组血清超氧化物歧化酶活力显著高于试验1组（P0.05）；所有葡萄糖氧化酶组血清丙二醛水平显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.009.T005表5葡萄糖氧化酶对海兰褐蛋鸡血清抗氧化性能的影响项目总抗氧化能力/(U/mL)谷胱甘肽过氧化物酶/(U/mL)超氧化物歧化酶/(U/mL)过氧化氢酶/(U/mL)谷胱甘肽/(μmol/L)谷胱甘肽巯基转移酶/(U/mL)丙二醛/(μmol/L)P值0.0410.0370.0220.4820.2910.0920.016对照组6.54±0.16b1 831.29±35.20b286.74±16.07c3.64±0.318.03±0.6253.19±3.085.21±0.28a试验1组7.88±0.20ab2 183.07±41.28ab296.47±17.55bc3.77±0.438.25±0.7154.28±4.164.52±0.36b试验2组8.53±0.22a2 531.29±46.05a325.05±19.20b3.84±0.378.48±0.4854.74±3.944.06±0.41b试验3组8.89±0.31a2 631.04±38.29a351.9±21.69a3.82±0.298.55±0.5155.42±0.583.24±0.24c试验4组8.84±0.26a2 712.31±41.39a364.85±31.07a3.92±0.388.62±0.6656.37±0.493.29±0.26c3讨论3.1葡萄糖氧化酶对蛋鸡产蛋性能的影响蛋鸡进入产蛋后期，卵巢功能衰弱，生殖激素分泌减少，从而导致产蛋率逐渐降低，影响养殖的经济效益[14-15]。此阶段的蛋鸡机体极易受到外界各种不利因素的应激，影响机体健康，在饲粮中添加适量的功能性饲料添加剂可以缓解应激，维持产蛋率[16-17]。本试验中，200、400、800mg/kg葡萄糖氧化酶组海兰褐蛋鸡的产蛋率和平均日产蛋重显著高于对照组，而料蛋比显著低于对照组和100 mg/kg葡萄糖氧化酶组，表明适量的葡萄糖氧化酶改善了海兰褐蛋鸡的产蛋性能。曲浩杰等[18]研究了葡萄糖氧化酶与博落回提取物的混合物对产蛋后期蛋鸡生产性能及经济效益的影响，发现在蛋鸡生产中添加0.25 g/kg的混合物可以显著提高蛋鸡的产蛋率及产蛋量，获得较高的养殖利润。朱晓萍等[19]发现，在鹌鹑饲粮中添加200 mg/kg的葡萄糖氧化酶可以使产蛋率提高1.75%，哈夫单位提高4.03%，蛋黄颜色提高14.8%。葡萄糖氧化酶改善蛋鸡产蛋性能的原因主要是其改善了机体的健康状态及生理代谢机能，进而提高产蛋率[20]。3.2葡萄糖氧化酶对蛋品质的影响蛋壳强度和蛋壳厚度可以反映蛋壳质量，蛋形指数可以反映鸡蛋的孵化性能，蛋黄颜色主要是饲料中叶黄素在蛋内的沉积情况，哈夫单位可以反映鸡蛋的新鲜程度[19]。本研究中，蛋鸡采食一定量的葡萄糖氧化酶对蛋壳质量、蛋黄颜色、蛋形指数等蛋品质指标未产生显著影响，但提高了哈夫单位，表明葡萄糖氧化酶可以改善鸡蛋的新鲜度。李嘉辉等[21]研究了葡萄糖氧化酶对产蛋后期蛋种鸡蛋品质的影响，发现高于350 mg/kg的葡萄糖氧化酶可以显著提高蛋壳厚度及哈夫单位，与本研究结果类似。目前，葡萄糖氧化酶在改善蛋品质方面的研究结果较少。未来需要增加葡萄糖氧化酶对蛋品质影响的研究，并进一步探究葡萄糖氧化酶改善蛋品质的作用机理。葡萄糖氧化酶提高哈夫单位的原因可能是葡萄糖氧化酶的抗氧化功能可以改善鸡蛋的抗氧化性能，延长鸡蛋的保质期，保持鸡蛋的新鲜度[10]。3.3葡萄糖氧化酶对蛋鸡血清免疫功能的影响家禽免疫器官的发育、特异性和非特异性免疫均可以反映家禽机体免疫功能[22-23]。机体免疫能力较强，可以使机体抵抗外界不利因素对机体的危害，提高抗病能力，维持机体健康[24]。本研究中，400、800 mg/kg葡萄糖氧化酶组蛋鸡血清中免疫球蛋白A和免疫球蛋白M水平显著高于100 mg/kg葡萄糖氧化酶组和对照组，200、400、800 mg/kg葡萄糖氧化酶组蛋鸡血清中免疫球蛋白G水平显著高于对照组，200、400和800 mg/kg葡萄糖氧化酶组蛋鸡血清中干扰素-γ、白细胞介素-2及白细胞介素-10水平显著高于对照组，而肿瘤坏死因子-α水平显著低于100 mg/kg葡萄糖氧化酶组和对照组，表明适量的葡萄糖氧化酶可以有效改善海兰褐蛋鸡机体的体液免疫和细胞免疫能力，增强机体的抗炎反应。研究发现，添加400、1 000 mg/kg的葡萄糖氧化酶可以改善肉鸡免疫器官指数[25]。刘公言等[26]研究了含有葡萄糖氧化酶的复合添加剂对肉兔生长、屠宰、肠道免疫及微生物群落的影响，发现添加含有100 g/t的葡萄糖氧化酶可以有效改善肉兔肠道黏膜免疫功能及肠道形态。在肉鸡生产中添加200 mg/kg的葡萄糖氧化酶可以使肉鸡血清中免疫球蛋白A水平提高20.17%，免疫球蛋白M水平提高15.42%，添加100 mg/kg的葡萄糖氧化酶可以使干扰素-γ含量提高52.47%，白细胞介素-2含量提高43.33%，肿瘤坏死因子-α水平降低11.04%[20]，与本研究结果类似。葡萄糖氧化酶提高动物机体免疫力主要是由于葡萄糖氧化酶可以调节机体炎症相关因子的分泌，促进抗炎因子的分泌，抑制促炎因子的分泌，通过抑制炎症反应提高机体的免疫力[27-28]。3.4葡萄糖氧化酶对蛋鸡血清抗氧化功能的影响动物机体内的抗氧化酶可以反映机体的抗氧化能力。超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶是机体抗氧化系统的第一道防线，在清除体内多余的自由基方面具有重要作用[29]。丙二醛是体内脂质氧化的终产物，可以反映机体的氧化程度[30]。本研究结果表明，200、400、800 mg/kg葡萄糖氧化酶组蛋鸡血清中总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活力显著高于对照组，且400、800 mg/kg葡萄糖氧化酶组血清超氧化物歧化酶活力显著高于20 0mg/kg葡萄糖氧化酶组；所有葡萄糖氧化酶组血清丙二醛水平显著低于对照组，且400、800 mg/kg葡萄糖氧化酶组显著低于100、200 mg/kg葡萄糖氧化酶组，表明适量的葡萄糖氧化酶提高了蛋鸡体内抗氧化酶活力，抑制了脂质氧化产物丙二醛的生成，降低了自由基对机体细胞的损伤。李嘉辉等[21]研究发现，蛋鸡生产中添加适量的葡萄糖氧化酶可以显著提高血清和肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶、总抗氧化能力及超氧化物歧化酶水平，显著降低丙二醛水平，且葡萄糖氧化酶的最适添加水平为500 mg/kg。王前光等[31]在1~6周龄的临武鸭生产中添加30 g/t的葡萄糖氧化酶可以显著降低血清丙二醛水平，添加40 g/t的葡萄糖氧化酶可以显著提高血清谷胱甘肽过氧化物酶活力。原因是葡萄糖氧化酶通过抑制脂质氧化提高了氧化酶活力，改善了蛋鸡的抗应激能力[32]。4结论本研究结果表明，海兰褐蛋鸡饲喂葡萄糖氧化酶可以提高产蛋性能、蛋品质、机体免疫力及抗氧化功能，适宜添加水平为400 mg/kg。