多肽抗生素（polypeptide antibiotics，PPTs）是从芽孢杆菌、链霉菌或放线菌的培养液中提取的具有多肽结构特征的抗生素[1]，主要包括万古霉素、黏杆菌素、杆菌肽、维吉尼亚霉素等[2]。PPTs可有效对抗革兰氏菌、真菌等病原体，常作为兽药添加到动物饲料中，以预防和治疗动物的传染病，并改善饲料转化率[3]。然而，PPTs的不合理使用使多重耐药菌和超级耐药基因MCR-1的产生与传播的问题愈发严重[4]，这无疑加剧了致病菌的耐药性问题[5]。为了应对这一挑战，我国于2018年开始在全国实施兽用抗菌药使用减量化行动[6]，以保障动物源性食品安全和公共卫生安全。自2020年起，我国废止了仅有促生长作用的药物饲料添加剂等品种的质量标准，其中包含杆菌肽、恩拉霉素、维吉尼亚霉素等[7]。随着PPTs使用准则愈加严苛，建立准确、高效且可同时测定多种PPTs的检测方法具有重要的实际应用价值。目前，用于检测PPTs的方法主要包括微生物法[8]、免疫分析法[9]、毛细管电泳法[10]、毛细管电色谱法[11]、液相色谱法[12]和液质联用法[13]等。微生物法和免疫分析法特异性较低，容易出现假阳性结果。毛细管电泳法和电色谱法重现性较差。虽然液相色谱法和液质联用法是饲料中维吉尼亚霉素、杆菌肽、黏杆菌素、万古霉素等物质的标准检测方法[3]，但仍存在方法灵敏度低、检测项目类别单一以及不利于批量化样品分析等问题。本研究利用UPLC-MS/MS技术，结合分散固相萃取净化技术，建立了一种同时测定16种PPTs的检测方法，为确保动物源性食品安全提供可靠的技术支持和保障。1材料与方法1.1试剂与材料短杆菌肽S三氟乙酸盐（纯度99.2%）、硫酸黏杆菌素（纯度96.0%）、多黏菌素B硫酸盐（纯度90.3%）、杆菌肽（纯度92.2%）、维吉尼亚霉素M1（纯度93.6%）、维吉尼亚霉素S1（100 mg/L）、替考拉宁（纯度98.0%）、恩拉霉素（1 000 mg/L）、雷莫拉宁（100 mg/L）、达托霉素（100 mg/L）、万古霉素盐酸盐（纯度99.0%）、盐酸去甲万古霉素（纯度87.7%），均购自天津阿尔塔科技有限公司。甲醇、乙腈、甲酸（色谱纯，Merck公司），三氯乙酸（国药集团化学试剂有限公司），分散固相萃取材料：粒径100~200目GCB、粒径40~60 μm十八烷基硅胶（C18）、粒径50~75 μm PSA（深圳逗点生物技术有限公司），ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm × 100 mm，1.7 μm，Waters公司），ChromCore AQ C18色谱柱（2.1 mm × 100 mm，1.8 μm，NanoChrom公司）。1.2仪器设备LC-30AD超高效液相色谱、Shimadzu 8050三重四极杆-串联质谱仪（日本岛津公司），Auto EVA 60位全自动平行浓缩仪（Reeko公司），DTC-27J超声波清洗机（鼎泰生化科技设备制造有限公司），Heraeus Multifug X3R台式高速冷冻离心机、HandyStep ELECTRONIC全自动电子移液器［赛默飞世尔科技（中国）有限公司］，Milli-Q超纯水纯化系统（Millipore公司），电子分析天平（感量分别为0.000 1 g和0.000 01 g，瑞士梅特勒-托利多公司），MS 3 basic旋涡混均器（IKA公司）。1.3试验方法1.3.1质谱条件电喷雾正离子扫描模式（ESI+），MRM多反应监测模式。雾化器流量3 L/min，加热器流量10 L/min，干燥器流量6 L/min，脱溶剂温度450 ℃，加热块温度400 ℃，DL温度250 ℃，接口温度250 ℃，定性离子对、定量离子对及其他质谱扫描参数见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.T001表1质谱扫描参数项目离子前体离子质荷比产物离子质荷比Q1 Pre偏差/V碰撞能量（CE）/VQ3 Pre偏差/V短杆菌肽S［M+2H］2+571.5169.2*-26-41-17197.1-26-36-13杆菌肽A［M+3H］3+475.286.1*-11-22-16199.1-11-30-13杆菌肽B［M+3H］3+470.4199.1*-10-29-2186.1-13-24-16黏杆菌素A［M+3H］3+390.8385.0*-11-13-13101.1-11-19-18黏杆菌素B［M+3H］3+386.1380.3*-11-11-24101.2-10-22-19多黏菌素B1［M+3H］3+402.1101.1*-11-22-10120.1-11-33-12多黏菌素B2［M+3H］3+397.5101.1*-11-22-19120.1-11-32-23维吉尼亚霉素M1［M+H］+526.3355.2*-24-20-17337.1-24-23-23维吉尼亚霉素S1［M+H］+824.3205.1*-22-52-14290.1-22-35-20万古霉素［M+2H］2+725.0144.1*-20-16-14100.2-20-37-10去甲万古霉素［M+2H］2+718.3144.1*-20-17-14100.2-20-26-18短杆菌肽S［M+2H］2+571.5169.2*-26-41-17197.1-26-36-13续表1　质谱扫描参数10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.T002项目离子前体离子质荷比产物离子质荷比Q1 Pre偏差/V碰撞能量（CE）/VQ3 Pre偏差/V杆菌肽A［M+3H］3+475.286.1*-11-22-16199.1-11-30-13杆菌肽B［M+3H］3+470.4199.1*-10-29-2186.1-13-24-16黏杆菌素A［M+3H］3+390.8385.0*-11-13-13101.1-11-19-18黏杆菌素B［M+3H］3+386.1380.3*-11-11-24101.2-10-22-19多黏菌素B1［M+3H］3+402.1101.1*-11-22-10120.1-11-33-12多黏菌素B2［M+3H］3+397.5101.1*-11-22-19120.1-11-32-23维吉尼亚霉素M1［M+H］+526.3355.2*-24-20-17337.1-24-23-23维吉尼亚霉素S1［M+H］+824.3205.1*-22-52-14290.1-22-35-20万古霉素［M+2H］2+725.0144.1*-20-16-14100.2-20-37-10去甲万古霉素［M+2H］2+718.3144.1*-20-17-14100.2-20-26-18替考拉宁［M+2H］2+940.6315.9*-24-17-25204.1-28-23-23恩拉霉素A［M+3H］3+785.8122.2*-20-63-2695.1-26-38-18恩拉霉素B［M+3H］3+790.695.1*-22-38-19122.1-24-65-21雷莫拉宁［M+2H］2+1 277.6137.1*-34-40-321 115.5-36-55-24达托霉素［M+2H］2+811.1159.1*-24-48-28341.2-15-24-15注：“*”为定量离子对。1.3.2色谱条件色谱柱：Waters BEH C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）。柱温：40 ℃，进样量：5.0 μL，流动相：0.2%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脱条件见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.T003表2梯度洗脱条件时间/min总流速/（mL/min）流动相体积分数/%0.2%甲酸水（A）乙腈（B）1.00.3009553.00.30020804.40.30020804.50.3009556.50.3009551.3.3标准溶液及标准工作曲线的配制PPTs的固体标准品依据纯度以及带盐情况折算后，精确称取适量，用0.2%甲酸水溶解，甲醇定容，配制成100 mg/L的标准储备液。以0.2%甲酸水溶液-乙腈（9∶1）为定容液配制成10 mg/L和1 mg/L的混合标准中间液（维吉尼亚霉素M1浓度分别为1 mg/L和0.1 mg/L），0~4 ℃下避光保存。移取适量的混合标准中间液，以经过前处理的空白基质样品溶液作为定容液，配制系列标准工作曲线，该曲线现用现配。1.3.4样品制备及前处理参照GB/T 20195—2006制备饲料样品[14]，每份饲料样品不低于200 g。称取待测样品1.0 g，用5 mL 1%三氯乙酸（aq）-甲醇（3∶7）提取。涡旋振荡3 min，超声10 min，10 000 r/min离心，转移上清液至10 mL刻度管。残渣用5 mL提取液重复提取一次。离心后，合并两次提取液，用甲醇定容至10.0 mL。涡旋混匀后分取5.00 mL提取液，加入200 mg C18粉末，涡旋振荡3 min，离心后，上清液40 ℃氮气浓缩至低于1 mL，0.2%甲酸水溶液-乙腈（9∶1）定容至1.00 mL；离心，取上清液上机分析测试，并同步采用完全相同的步骤进行空白试验。1.3.5基质效应的评价本研究参照文献[15]考察基质效应（matrix effect，ME）的影响，通过测定配合饲料、浓缩饲料的基质匹配混合标准溶液和试剂混合标准溶液的各组分峰面积，按照式（1）进行计算。ME%=(AmatrixAsolvent-1)×100%(1)式中：Amatrix为基质匹配标准工作溶液的峰面积，Asolvent为溶剂标准工作溶液的峰面积。2结果与分析2.1仪器条件的优化2.1.1质谱条件的优化PPTs是一类由4～16个氨基酸缩合而成的多肽类物质，分子量为525~2 369 Da[16]。在电喷雾离子化时，容易与H+结合而形成带正电的单电荷、双电荷或三电荷的特征母离子[17]。试验结果显示，维吉尼亚霉素M1和S1易与1个H+结合形成稳定的准分子离子峰[M+H]+。短杆菌肽S、万古霉素类、替考拉宁、雷莫拉宁、达托霉素则易形成双电荷离子[M+2H]2+。恩拉霉素、杆菌肽、黏杆菌素、多黏菌素B可以形成不同丰度的双电荷母离子[M+2H]2+和三电荷母离子[M+3H]3+。为获得较高的灵敏度，选择响应更高的三电荷离子[M+3H]3+作为特征母离子。通过一级质谱选定特征母离子后，经过碰撞室，母离子获得能量后将断裂或重排形成特征的碎片离子。每种待测物选取响应较高的特征离子作为定量和定性离子。通过岛津质谱自带的优化软件进一步优化碰撞电压CE、Q1 Pre偏差、Q3 Pre偏差等参数，最终得到PPTs的母离子、定量离子和定性离子等主要质谱分析参数，见表1。2.1.2液相条件的优化（1）色谱柱的选择。文献较多采用反相C18色谱分离柱[16-18]对PPTs进行分析。本研究对比考察亚乙基桥杂化颗粒技术的ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm×100 mm）、单分散高纯硅胶基质的ChromCore AQ C18色谱柱（2.1 mm×100 mm）两种不同类型的反相色谱柱对PPTs分离的影响。以0.2%甲酸水/乙腈作为流动相进行梯度洗脱优化，结果见图1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.F001图1黏杆菌素和多黏菌素B的色谱图由图1可知，AQ C18色谱柱分离黏杆菌素和多黏菌素B存在明显的峰展宽现象，而经过封端的BEH C18色谱柱峰形更对称，更适合作为分离柱。可能是因为AQ C18色谱柱的游离的硅羟基比BEH C18色谱柱多，与碱性的黏杆菌素和多黏菌素B产生了二级作用，导致目标化合物不能顺利地洗脱，从而产生展宽现象。通过设定的梯度洗脱条件（详见1.3.2），BEH C18色谱柱在6.5 min即可分析完毕（见图2）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.F002图2PPTs总流离子色谱图（2）流动相的选择。因PPTs含有多个氨基和羧基，流动相的组成及pH值将影响其色谱保留行为和离子化效率[19]。试验对比甲醇、乙腈作为有机相时PPTs的出峰情况，发现黏杆菌素和多黏菌素B在乙腈中的峰型更对称、峰高更高，与参考文献[20]一致，故选用乙腈作为有机相。根据文献报道，流动相中加入铵盐和甲酸可以改善峰形和响应强度[21-22]。本次试验考察对比了5 mmol/L乙酸铵、5 mmol/L乙酸铵-0.2%甲酸水、0.2%甲酸水等3种流动相对PPTs离子化效率的影响，结果见图3。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.F003图3PPTs使用不同流动相的对比注：维吉尼亚霉素M1浓度为50.0 μg/L，其他PPTs浓度为500 μg/L由图3可知，当流动相中加入乙酸铵时，维吉尼亚霉素M1和S1的质谱响应有所增强，但多种PPTs的质谱信号受到了明显抑制。综合各PPTs响应强度和峰形，最终确定0.2%甲酸水-乙腈为流动相。2.2前处理条件的优化2.2.1提取溶剂的优化PPTs溶解性能差异较大[23]，其中杆菌肽、黏杆菌素、多黏菌素B、万古霉素、去甲万古霉素易溶于水，微溶于甲醇、乙醇、二甲亚砜等有机溶剂；其余PPTs易溶于甲醇和乙醇等强极性有机溶剂[24]。结合黏杆菌素和多黏菌素B在酸性环境中稳定、碱性条件下容易降解的特点[25]，试验以甲醇+三氯乙酸水溶液（aq）为提取液，采用振荡提取结合超声提取，并提取两次。同时，试验发现滤膜对短杆菌肽S具有较强的吸附作用，因此样液不用过滤膜，经高速离心后，即可取上清液上机。选择空白配合饲料样品进行加标回收试验（加标水平为200 μg/kg，n=3），考察对比0.5%、1.0%、2.0%、5.0%三氯乙酸（aq）-甲醇（3∶7）对PPTs提取效果的影响，结果见图4。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.F004图4不同浓度的三氯乙酸水溶液对多肽类抗生素提取回收率的影响（n=3）由图4可知，随着三氯乙酸（aq）浓度的升高，杆菌肽、黏杆菌素、多黏菌素B、维吉尼亚霉素回收率有所下降，万古霉素、去甲万古霉素回收稍有增长。三氯乙酸（aq）浓度为0.5%时，万古霉素、去甲万古霉素回收率低于50%；三氯乙酸浓度为5.0%时，短杆菌肽S、杆菌肽回收率低于50%；三氯乙酸（aq）浓度为1.0%时，多肽类化合物回收率均高于75%，优于2.0%三氯乙酸（aq），因此考虑1.0%三氯乙酸（aq）+甲醇（3∶7）为提取溶剂。试验进一步考察对比不同体积比的1.0%三氯乙酸（aq）∶甲醇（1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、7∶3、8∶2）对PPTs提取效率的影响，结果见图5。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.F005图5不同比例的1.0%三氯乙酸水（aq）∶甲醇对PPTs提取回收率的影响（n=3）由图5可知，随着1.0%三氯乙酸（aq）比例的提高，水溶性强的万古霉素、去甲万古霉素的提取效率显著提高。在1.0%三氯乙酸（aq）∶甲醇的比例高于5∶5时，提取液逐渐变得浑浊，即使经过后续净化，其基质抑制仍然较为严重，导致一半以上的目标物回收率低于80%；1.0%三氯乙酸（aq）∶甲醇的比例为3∶7时，PPTs回收率均高于75%。因此，最终选择1.0%三氯乙酸（aq）∶甲醇的比例为3∶7。2.2.2净化条件的优化对于质谱分析法而言，饲料基质中的脂类物质、蛋白质、金属离子等物质将干扰待测物的有效分析[26]，通常需要净化步骤以降低样品基质对仪器性能和定量结果准确性的影响。目前针对PPTs的净化方法主要有固相萃取（SPE）[13,20]、加速溶剂萃取（ASE）[23]等。试验采用选择性强、灵活性高的分散固相萃取（DSPE），以获得操作简便、耗时短、重现性好的净化方法。DSPE常用的吸附剂PSA、C18、GCB等[27]。PSA是键合N-丙基乙二胺的改性吸附剂，依据氢键和阴离子交换机理吸附样品基质中脂肪酸、有机酸、糖和极性色素等杂质[28]。C18依据非极性碳键作用机制吸附磷脂类、糖类、油脂类等杂质，以达到高效净化的目的[29]。GCB吸附叶绿素、叶黄素、胡萝卜素等色素以及固醇类化合物，但对平面结构的待测物也会造成吸附。试验按1.3.4的方法，考察对比PSA、C18、GCB等3种典型吸附剂对空白饲料基质的净化效果（加标水平为200 μg/kg，吸附剂含量均为200 mg，n=3），结果见图6。由图6可知，GCB对替考拉宁、恩拉霉素、万古霉素、去甲万古霉素等具有多个苯环平面结构的化合物吸附严重，回收率为25%左右；对于短杆菌肽S、杆菌肽、黏杆菌素、多黏菌素、达托霉素具有较大环状脂肽类结构的化合物也具有一定的影响，回收率为50%左右，仅维吉尼亚霉素M1和维吉尼亚霉素S1回收率高于90%。PSA对杆菌肽、万古霉素、去甲万古霉素回收率为62.7%~65.2%，其余待测物回收率为75.6%~105.8%。C18对待测物的回收率为82.7%~112.5%，优于PSA和GCB，成为最终选用的净化吸附剂。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.F006图6不同吸附剂对PPTs回收率的影响（n=3）试验进一步评估吸附剂C18用量对饲料中PPTs的净化效果的影响，按照1.3.4考察100、200、300、400 mg C18用量时回收率的情况。结果表明，较低含量的C18（100 mg）对基质样液的净化不足，各化合物回收率不理想。较高含量的C18（≥300 mg）对短杆菌肽S、替考拉宁的吸附增强，从而导致回收率降低。最终确定C18的使用量为200 mg。2.2.3基质效应基质效应是指对实际样品基质中除待测物以外的内源性或外源性物质对试验分析结果的影响[30]。试验按照1.3.5的方法评估基质效应，结果见图7。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.F007图7PPTs的基质效应通常情况下，ME0表明存在基质增强，ME0表明存在基质抑制，|ME|20%表明基质效应不明显[20]。由图7可知，黏杆菌素、多黏菌素、维吉尼亚霉素、达托霉素等存在基质增强；短杆菌肽S、杆菌肽、万古霉类、替考拉宁、恩拉霉素、雷莫拉宁等存在基质抑制。配合饲料和浓缩饲料中PPTs的|ME|20%，基质效应较小，表明C18净化效果较好。但考虑到复合饲料和浓缩饲料基质效应存在差异，为更大限度地消除基质效应，最终采用基质匹配标准曲线进行校正。2.3方法学考察2.3.1选择性按照1.3.4获得空白饲料和空白饲料加标（维吉尼亚霉素M1加标水平为10.0 μg/kg，其余PPTs加标水平为100 μg/kg）中PPTs的色谱图见图8。由图8可知，PPTs在保留时间2.5%范围内的未观察到干扰峰，表明该方法具有良好的选择性，可应用于饲料中PPTs的常规监测。图8空白饲料基质以及加标饲料中PPTs的色谱图10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.F8a1（a）空白饲料基质10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.F8a2（b）加标饲料2.3.2线性范围、检出限、定量限以PPTs基质匹配校准工作曲线溶液的峰面积为Y轴，浓度为X轴计算线性回归方程，线性范围、线性回归方程、检出限及定量限见表3。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.T004表3PPTs的线性关系、检出限、定量限化合物线性范围/(μg/L)回归方程相关系数（R2）检出限/(μg/kg)定量限/(μg/kg)短杆菌肽S25.0~500y=54 659.1x+10 307.40.996 41.34.4杆菌肽A25.0~500y=2 161.24x+2 872.030.999 210.033.2杆菌肽B25.0~500y=2 655.91x+9 648.970.999 111.839.4黏杆菌素A25.0~500y=3 540.45x-3 265.830.998 63.712.2黏杆菌素B25.0~500y=5 430.53x+19 767.60.997 91.13.6多黏菌素B125.0~500y=3 497.96x+21 089.40.998 21.65.2多黏菌素B225.0~500y=2 302.10x+11 539.50.993 010.735.7维吉尼亚霉素M12.50~50.0y=9 473.61x+6 212.310.994 60.62.1维吉尼亚霉素S125.0~500y=42 240.8x-14 917.50.999 21.86.0万古霉素25.0~500y=2 347.09x+738.2190.999 50.41.4续表3　PPTs的线性关系、检出限、定量限10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.T005化合物线性范围/(μg/L)回归方程相关系数（R2）检出限/(μg/kg)定量限/(μg/kg)去甲万古霉素25.0~500y=2 510.21x-10 216.00.999 30.61.9替考拉宁25.0~500y=5 801.74x+3 700.420.998 62.68.8恩拉霉素A25.0~500y=6 222.80x+72 791.10.995 65.317.8恩拉霉素B25.0~500y=1 541.83x+1 231.770.997 312.140.4雷莫拉宁25.0~500y=2 128.34x-1 827.010.997 48.929.6达托霉素25.0~500y=6 966.32x-24 342.90.999 81.54.9由表3可知，线性范围内，各PPTs相关系数（R2）均大于0.99，表明线性关系较好。通过空白饲料基质加标试验（加标水平100 μg/kg），结合检出限（S/N=3）、定量限（S/N=10），计算得到各化合物的检出限在0.4~12.1 μg/kg之间，定量限在1.4~40.4 μg/kg之间。由试验结果可知，该方法具有较高的灵敏度，可以满足基本的分析需求。2.3.3准确度与精密度分别以空白配合饲料和浓缩饲料为考察基质，进行添加水平为100、200、500 μg/kg（维吉尼亚霉素M1为10.0、20.0、50.0 μg/kg）的低、中、高等3个水平的加标回收试验，平行试验次数为6次。结果见表4。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2024.05.021.T006表4PPTs的准确度、精密度和回收率（n=6）化合物加标水平/（μg/kg）配合饲料/%浓缩饲料/%化合物加标水平/(μg/kg)配合饲料/%浓缩饲料/%回收率RSD回收率RSD回收率RSD回收率RSD短杆菌肽S100113.44.7280.33.15维吉尼亚霉素S1100105.96.0794.13.96200110.23.3489.97.06200107.68.3286.63.21500106.95.2487.65.16500101.22.3392.73.39杆菌肽A10094.93.9685.33.56万古霉素10098.65.4392.37.2820089.13.0284.85.2420093.23.6495.56.0750092.56.8990.32.7550094.37.6495.95.18杆菌肽B10092.26.2791.94.14去甲万古霉素10091.54.5282.33.1120089.14.0185.45.3920088.75.45109.05.7550084.53.2994.53.4950091.23.9192.13.26黏杆菌素A10089.94.8282.63.28替考拉宁10084.88.6184.96.7520085.26.2193.24.9220086.16.42107.43.9350084.73.85100.43.8850087.13.3296.53.21黏杆菌素B10096.94.9383.43.58恩拉霉素A10091.98.2983.83.9420093.23.88102.74.7320093.76.6392.15.3650083.12.8797.76.0550095.22.35106.73.09多黏菌素B110097.13.1691.16.51恩拉霉素B10080.74.6594.34.7820085.34.69102.68.9720082.79.46106.34.5650087.42.8692.94.7750087.26.1185.23.16多黏菌素B210090.46.5984.36.44雷莫拉宁10085.55.9786.59.5120081.85.0388.34.5720096.64.19111.64.2750080.04.2687.13.16500102.64.4195.93.37维吉尼亚霉素M110.0107.73.19104.17.51达托霉素10090.39.0793.36.9320.0112.97.41109.49.31200107.94.21107.43.9550.0105.62.73114.44.5350081.76.46106.95.26%由表4可知，PPTs平均回收率在80.0%~114.4%之间，相对标准偏差RSD在2.33%~9.51%之间，表明该方法准确可靠，精密度好。2.4实际样品的测定基于本研究建立的方法，对随机抽取的40批次饲料样品中的16种PPTs进行检测，饲料种类包括配合猪饲料、配合鸡饲料、配合鱼饲料、浓缩饲料等。其中1份配合猪饲料中检出杆菌肽A，含量为92.1 μg/kg，其余样品均未检出。3结论本研究通过优化UPLC-MS/MS参数、提取和净化关键步骤，建立了一种针对饲料中16种PPTs的定量分析方法。经过了严格的方法学验证，该方法已成功应用于40批次饲料的检测分析。与现有文献报道的前处理方法相比，本研究省去了烦琐的过柱步骤，提高了检测效率并有效降低了成本。所建方法不仅操作简单，而且具有高度的准确性和可靠性，同时灵敏度较高，可满足批量样品快速净化和准确测定的要求。此外，该方法还拓展了饲料中替考拉宁、达托霉素、雷莫拉宁等PPTs的液质检测方法。