在动物养殖业中，大量使用抗生素、激素等药物会严重破坏动物肠道内的菌群结构，造成肠道菌群紊乱，影响动物的消化吸收和免疫屏障保护功能[1]。因此，新型绿色饲料添加剂的开发逐渐成为研究热点。丁酸梭菌又名酪酸菌，能够与大肠杆菌、沙门氏菌等有害菌竞争肠道内的定植位点，从而降低其在肠道内的黏附能力。丁酸梭菌也能增强肠道内的酸性环境，抑制有害菌的生长，促进有益菌繁殖。丁酸梭菌还能为肠道上皮细胞提供能量，促进其生长，改善和修复肠道组织，促进动物的消化吸收能力和饲料转化率，从而提高动物的生产性能和免疫机能。试验研究日粮中添加丁酸梭菌对肉仔鸡生长性能、免疫机能和血液生理生化指标的影响，为丁酸梭菌作为饲料添加剂在生产中应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料丁酸梭菌制剂为粉末状，含30亿活菌/g，购自山东大益生物科技集团有限公司。1.2试验设计选用1 600只1日龄肉仔鸡（购自购自四平强大牧业孵化场），随机分为4组，每组4个重复，每个重复100只鸡。对照组饲喂基础日粮，试验组分别饲喂基础日粮+丁酸梭菌（500、1 000、2 000 mg/kg），基础日粮组成及营养水平见表1。各处理组肉仔鸡在试验期间自由采食、饮水，温度、光照等饲养管理条件保持一致。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.013.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米52.00代谢能/(MJ/kg)11.52豆粕32.00粗蛋白质/%21.40小麦麸7.20蛋氨酸/%0.46鱼粉3.20赖氨酸/%1.24植物油1.60蛋氨酸+胱氨酸/%0.72石粉1.49钙/%1.02碳酸氢钙1.05有效磷/%0.46食盐0.28蛋氨酸0.10赖氨酸0.08预混料1.00注：预混料为每千克日粮提供：VA 400 mg、VD3 1.80 mg、VE 1.1 mg、VK3 0.08 mg、VB1 0.05 mg、VB2 0.40 mg、VB6 0.15 mg、Fe 40 mg、Zn 50 mg、Cu 3 mg、Mn 50 mg、I 0.5 mg、胆碱300 mg。1.3样本的采集试验第21 d对所有肉仔鸡禁食处理，称重并记录。将肉仔鸡颈部放血处死，采集血液样本。将离心管倾斜放置，室温下静置30 min，使用离心机4 000 r/min离心5 min，分离血清备用。剖取脾脏、法氏囊、胸腺等免疫器官，称取重量并记录。1.4试验指标及测定1.4.1生长性能在试验开始前和试验结束后，对不同处理组的肉仔鸡称重记为初重和末重。记录不同处理组每天的饲料添加剂量和剩余量，试验结束后分别统计每个处理组肉仔鸡的总采食量。记录各试验组肉仔鸡死亡数。计算平均日采食量、平均日增重、料重比和死淘率。平均日采食量＝总采食量/试验天数(1)平均日增重=(末重-初重)/试验天数(2)料重比=消耗饲料总重/增重总量(3)死淘率=试验期间死亡和淘汰肉仔鸡只数/试验肉仔鸡只数×100％(4)1.4.2血清中细胞因子的含量测定按照ELISA试剂盒（购自上海酶联生物科技有限公司）的操作方法测定不同处理组肉仔鸡血清中补体C3（C3）、补体C4（C4）、皮质醇及免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）的含量。1.4.3免疫器官指数的测定根据不同免疫器官的重量与肉鸡活体重，计算肉仔鸡的免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官重(mg)/活鸡体重(g)(5)1.4.4血液生化指标的测定将采集的血液使用全自动生化仪（SMT-120V，成都斯马特科技有限公司）检测血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的浓度，红细胞（RBC）、白细胞（WBC）、血红蛋白（Hb）浓度。1.5数据统计与分析运用Excel 2007软件整理原始数据，使用SPSS 20.0软件统计分析，试验结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1丁酸梭菌对肉仔鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，日粮中添加1 000、2 000 mg/kg的丁酸梭菌均可极显著提高21日龄肉仔鸡的末重（P0.01），显著降低肉仔鸡的平均日采食量（P0.05）。与对照组相比，日粮中添加1 000 mg/kg的丁酸梭菌显著提高肉仔鸡的平均日增重（P0.05）。相比对照组，日粮中添加不同比例的丁酸梭菌均可以显著降低肉仔鸡的料重比（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.013.T002表2丁酸梭菌对肉仔鸡生长性能的影响项目Ⅰ组（对照组）Ⅱ组（500 mg/kg）Ⅲ组（1 000 mg/kg）Ⅳ组（2 000 mg/kg）初重/g45.06±0.0344.88±0.1245.13±0.0645.38±0.16末重/g634.32±24.58A701.13±20.13A771.10±28.46B730.82±21.37B平均日增重/(g/d)28.06±0.92a31.25±1.01a34.57±1.26b32.64±1.13a平均日采食量/(g/d)48.21±1.91b47.42±1.74b42.21±1.69a43.46±1.83a料重比1.71±0.02b1.51±0.01a1.22±0.01a1.32±0.02a死淘率/%4.67±0.694.42±0.414.49±0.344.35±0.23注：同行数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05），大写字母不同表示差异极显著（P0.01），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2丁酸梭菌对肉仔鸡免疫器官指数的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，日粮中添加1 000、2 000 mg/kg的丁酸梭菌均可以显著提高肉仔鸡的胸腺指数（P0.05）。与对照组相比，日粮中添加2 000 mg/kg丁酸梭菌可以显著提高肉仔鸡脾脏指数（P0.05）。与对照组相比，日粮中添加不同剂量的丁酸梭菌均能显著提高肉仔鸡法氏囊指数（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.013.T003表3丁酸梭菌对肉仔鸡免疫器官指数的影响项目Ⅰ组（对照组）Ⅱ组（500 mg/kg）Ⅲ组（1 000 mg/kg）Ⅳ组（2 000 mg/kg）胸腺指数2.16±0.04a2.32±0.07a2.53±0.05b2.62±0.03b脾脏指数0.51±0.05a0.58±0.04a0.57±0.06a0.65±0.02b法氏囊指数1.61±0.03a1.85±0.05b1.91±0.02b1.89±0.04bmg/g2.3丁酸梭菌对肉仔鸡血清补体及皮质醇含量的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，日粮中添加1 000、2 000 mg/kg丁酸梭菌均可以显著提高肉仔鸡血清中补体C3含量（P0.05）。与对照组相比，日粮中添加不同剂量丁酸梭菌均可显著提高仔鸡血清补体C4含量（P0.05）。与对照组相比，日粮中添加1 000、2 000 mg/kg丁酸梭菌均可显著降低肉仔鸡血清中皮质醇含量（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.013.T004表4丁酸梭菌对肉仔鸡血清补体及皮质醇含量的影响项目Ⅰ组（对照组）Ⅱ组（500 mg/kg）Ⅲ组（1 000 mg/kg）Ⅳ组（2 000 mg/kg）补体C3323.43±20.47a342.19±25.32a457.31±36.43b385.19±26.53b补体C420.37±2.63a28.21±1.05b27.33±1.68b31.42±4.96b皮质醇149.53±5.48b136.16±6.95b124.15±4.73a125.21±6.32amg/L2.4丁酸梭菌对肉仔鸡血清中免疫球蛋白含量的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，日粮中添加500、1 000 mg/kg丁酸梭菌均显著提高肉仔鸡血清中免疫球蛋白M含量（P0.05），日粮中添加不同比例的丁酸梭菌均能显著提高肉仔鸡血清中免疫球蛋白G的含量（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.013.T005表5丁酸梭菌对肉仔鸡血清中免疫球蛋白含量的影响项目Ⅰ组（对照组）Ⅱ组（500 mg/kg）Ⅲ组（1 000 mg/kg）Ⅳ组（2 000 mg/kg）免疫球蛋白A59.13±2.4563.52±3.7665.41±4.4364.78±3.63免疫球蛋白M58.21±2.60a67.64±3.67b66.72±4.35b63.92±4.86a免疫球蛋白G49.80±3.31a62.42±4.78b61.35±3.36b63.50±6.27bng/L2.5丁酸梭菌对肉仔鸡血液生理生化指标的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，日粮中添加丁酸梭菌显著提高肉仔鸡血清中血糖浓度（P0.05），显著降低低密度脂蛋白胆固醇浓度（P0.05）。与对照组相比，日粮中添加500、2 000 mg/kg丁酸梭菌显著降低肉仔鸡血清中总胆固醇的浓度（P0.05），日粮中添加1 000、2 000 mg/kg丁酸梭菌显著提高肉仔鸡血清中高密度脂蛋白胆固醇的浓度（P0.05），日粮添加500、1 000 mg/kg丁酸梭菌显著降低肉仔鸡血清中甘油三酯的浓度（P0.05）。相比对照组，添加不同比例的丁酸梭菌均显著提高肉仔鸡的红细胞数量和血红蛋白含量（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.013.T006表6丁酸梭菌对肉仔鸡血液生理生化指标的影响项目Ⅰ组（对照组）Ⅱ组（500 mg/kg）Ⅲ组（1 000mg/kg）Ⅳ组（2 000mg/kg）血糖/（mmol/L）9.97±0.42a12.36±0.76b13.66±0.25b12.22±0.48b总胆固醇/（mmol/L）3.81±0.16b2.66±0.13a3.26±0.09b2.74±0.18a低密度脂蛋白胆固醇/（mmol/L）1.03±0.04b0.76±0.03a0.77±0.05a0.73±0.03a高密度脂蛋白胆固醇/（mmol/L）1.77±0.05a1.83±0.07a2.41±0.05b2.16±0.03b甘油三酯/（mmol/L）0.81±0.03b0.63±0.06b0.47±0.14a0.76±0.08b红细胞/（×1012/L）2.35±0.04a3.21±0.17b2.98±0.12b3.11±0.28b白细胞/（×109/L）211.34±17.04236.67±14.03229.84±11.05247.37±20.34血红蛋白/（g/L）102.46±8.25a131.38±6.47b144.18±13.37b142.63±10.33b3讨论近年来，各种酸化剂、酶制剂、微生态制剂等饲料添加剂层出不穷，选择符合标准适合动物生长需求的饲料添加剂对提高动物的生产性能和获得可观的经济收益具有非常关键的作用。丁酸梭菌具有提高动物生产性能，调节肠道菌群结构平衡，增强免疫等多种生物学功能[2-3]，可用作禽类饲料添加剂。3.1丁酸梭菌对肉仔鸡生长性能的影响汪成飞等[4]研究复合丁酸梭菌替代抗生素的应用效果，发现与抗生素试验组相比，在肉鸡日粮中添加0.2%的复合丁酸梭菌可以显著降低1~42日龄肉鸡的平均日采食量和料重比，降低不同阶段肉鸡的死淘率，表明日粮中添加复合丁酸梭菌可以提高肉鸡的生产性能，替代抗生素应用。本研究发现，日粮中添加1 000、2 000 mg/kg的丁酸梭菌可以降低肉仔鸡的平均日采食量和料重比，对提高平均日增重和降低死淘率也具有较好的效果。杜云平等[5]研究发现，日粮中添加丁酸梭菌能显著提高肉鸡的生产性能，肉鸡日增重比对照组提高4.61%。张娟[6]研究发现，与对照组相比，添加丁酸梭菌各试验组1~21日龄肉仔鸡的平均日增重增加4.01%。3.2丁酸梭菌对肉仔鸡免疫器官指数的影响免疫器官是动物机体抵御外界病原微生物侵入机体的重要屏障，主要包括胸腺、脾脏等，在禽类中还包括法氏囊。免疫器官指数反映机体的免疫功能。何菊等[7]研究发现，相比对照组和抗生素试验组，日粮中添加丁酸梭菌可以极显著提高42日龄肉鸡的法氏囊指数，肉鸡脾脏指数相对于抗生素试验组也有显著提高，表明丁酸梭菌能有效促进肉鸡法氏囊和脾脏的生长发育。范磊[8]研究发现，与对照组相比，富硒酵母和丁酸梭菌制剂联合应用可以极显著提高肉鸡的脾脏指数，显著提高肉鸡法氏囊指数，分别提高25.02%和10.84%。本研究结果表明，在肉仔鸡日粮中添加不同比例的丁酸梭菌可以显著提高肉仔鸡法氏囊指数，对胸腺指数和脾脏指数均有不同程度的提高。3.3丁酸梭菌对肉仔鸡血清补体及皮质醇含量的影响补体是一类血清蛋白质，血清中的补体分子主要是补体C3和补体C4，二者在补体系统的生物学功能中具有非常重要的作用。补体C3和补体C4不仅具有辅助抗体的功能而且还可以作为生物体防御物质之一，在免疫过程中具有非常重要的作用。皮质醇作为一种非常重要的糖皮质激素，可以参与免疫应激条件下动物免疫系统的调节，血清中皮质醇的含量是机体免疫力的一种表现。免疫球蛋白由淋巴B细胞产生，广泛存在于血液和组织液中，是机体体液免疫的重要组成部分，对动物机体的免疫功能具有重要作用。刘婷婷[9]研究在日粮中添加不同剂量的丁酸梭菌对其对肉鸡免疫功能的影响，发现与对照组相比，42 d时各丁酸梭菌添加组肉鸡血清中补体C3和补体C4的含量均有提高，以添加剂量150 mg/kg效果较为显著。杨彩梅等[10]研究发现，丁酸梭菌对大肠杆菌K88感染肉鸡的免疫功能也有增强作用，日粮中添加丁酸梭菌有助于提高肉鸡血清中补体C3、补体C4的含量，增强肉鸡血清免疫球蛋白A、疫球蛋白G、疫球蛋白M的含量。3.4丁酸梭菌对肉仔鸡血清中免疫球蛋白含量的影响贾聪慧等[11]研究发现，与对照组相比，不同日龄阶段丁酸梭菌试验组肉鸡血清中疫球蛋白G含量和疫球蛋白M含量均有显著提高，有效增强肉鸡的免疫功能。本研究结果发现，日粮中添加丁酸梭菌可以不同程度地提高肉仔鸡血清中补体C3、补体C4以及疫球蛋白G和疫球蛋白M的含量，降低肉鸡血清皮质醇含量。李严[12]研究发现，与对照组相比，日粮中添加0.2%的丁酸梭菌可以显著降低14日龄仔猪血清中的皮质醇水平，添加0.2%和0.4%丁酸梭菌能极显著降低21日龄仔猪血清中皮质醇水平，虽然与本研究的试验对象不同，但也说明本研究结果具有较高的可信度。3.5丁酸梭菌对肉仔鸡血液生理生化指标的影响血液是动物机体的重要组成部分，其成分的变化可以反映动物机体的代谢情况和健康状况。血液中的葡萄糖是动物机体生命活动的直接能量来源，对维持动物机体正常的生理功能和组织、脏器的正常运作具有重要的生理意义。红细胞及血红蛋白是运输氧气和二氧化碳的重要载体，也可以参与机体的免疫反应。白细胞作为机体中重要的非特异性免疫细胞，对抵御病原体侵入，参与机体的防御反应和维持免疫功能具有重要作用。甘油三酯作为脂肪沉积的主要形式，其主要来源是脂肪酸的合成，甘油三酯脂化和分解的相对速度决定脂肪的分解或沉积。血液中胆固醇的含量增加会促使其在血管壁沉积，使血管变窄从而引发一系列疾病，导致肉鸡的死亡率增加。高密度脂蛋白胆固醇可以把肝脏外部组织的胆固醇转运回肝脏进行代谢，由胆汁排泄出体外。低密度脂蛋白胆固醇可以将肝脏组织中的胆固醇运输到肝外组织，其含量与一些疾病的发病率呈正相关。上述指标的变化可以直接反映机体脂类代谢功能与生理机能是否正常。付大波[13]研究表明，日粮中添加400 g/t的丁酸梭菌可以显著增加42日龄肉鸡血清中的血糖含量。何菊[14]研究发现，日粮中添加丁酸梭菌对肉鸡的血糖含量有明显的促进作用，而且能够降低血清中甘油三酯和胆固醇的含量。本研究发现，日粮中添加丁酸梭菌可以提高肉仔鸡血糖浓度和高密度脂蛋白胆固醇含量，降低低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯的含量，以添加剂量为1 000mg /kg效果较好。然而，李文茜等[15]在丁酸梭菌对断奶犊牛血清生化指标影响的研究中发现，日粮中添加丁酸梭菌能显著降低犊牛血清中胆固醇、高密度脂蛋白含量，低密度脂蛋白含量也有降低趋势，这可能是由于添加剂量或试验对象不同所导致。韦云路等[16]给予高脂饮食大鼠灌胃益生菌，发现益生菌可以降低大鼠血清中甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇含量，增加高密度脂蛋白胆固醇含量，对大鼠的血脂具有调节作用。田和平[17]使用含丁酸梭菌的益生菌发酵日粮饲喂妊娠母猪，结果发现妊娠母猪的红细胞数、白细胞数量有所提高，与本研究结果基本一致。4结论肉仔鸡日粮中添加丁酸梭菌有助于提高肉仔鸡的平均日增重，降低料重比，提高生产性能。添加丁酸梭菌可以提高肉仔鸡的免疫器官指数及血清补体和免疫球蛋白含量，减少皮质醇含量，对增强肉仔鸡的免疫功能具有较好的效果。同时，添加丁酸梭菌能够提高血糖浓度和高密度脂蛋白胆固醇的含量，降低总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯的含量，调节肉仔鸡的血脂水平，减少炎症反应的发生，增加红细胞和血红蛋白含量，增强肉鸡的气体运输和免疫功能。综合分析，本试验条件下，丁酸梭菌的添加剂量为1000 mg/ kg时效果最佳。