我国大豆70%依赖进口，大部分用作动物饲料[1]。饲料原料匮乏严重制约畜牧业发展。寻找和开发新型高蛋白质饲料原料已成为当前亟待解决的问题。构树（Broussonetia papyrifera）属于桑科构属，主要分布于亚洲东部及太平洋岛屿[2-3]。构树适应性强、耐干旱、盐碱，是一种综合性树种，被广泛用于饲料、造纸、医药、生态修复等领域[4]。构树营养价值丰富，富含蛋白质、维生素、氨基酸、矿物质微量元素，是动物优质饲料原料。构树蛋白分子大、结构复杂、纤维素含量高、含有单宁等抗营养因子，导致动物很难消化吸收构树饲料。构树饲料利用率低，动物生长缓慢。添加青贮发酵菌剂对构树进行青贮能够提高青贮饲料的发酵品质[5-6]。微生物发酵技术可以降解构树中大分子蛋白质、粗纤维和单宁含量，改善构树发酵饲料品质，提高构树的利用率。试验研究单独或混合添加微生物添加剂对全株构树青贮饲料发酵品质的影响，为优质全株构树青贮饲料的生产提供参考。1材料与方法1.1试验材料全株构树由河南省科学院杂交构树种植科研示范基地提供，株高120 cm。植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、产朊假丝酵母菌（Candida production）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）均由河南省科学院生物研究所有限公司提供；糖蜜购自市场。1.2试验方法1.2.1试验设计将全株构树切短至2~3 cm，自然晾晒至水分约65%，添加10%糖蜜搅拌均匀备用。设置5个试验组，分别为对照组（无添加）、添加8%植物乳杆菌组（Ⅰ组）、混合添加8%植物乳杆菌＋产朊假丝酵母菌组（1∶1，Ⅱ组）、混合添加8%植物乳杆菌＋枯草芽孢杆菌组（1∶1，Ⅲ组）及混合添加8%植物乳杆菌＋产朊假丝酵母菌＋枯草芽孢杆菌组（1∶1∶1，Ⅳ组）。将全株构树装入带有单向放气阀的聚乙烯袋内，每袋300 g，每组3个重复，室温发酵50 d后取样测定分析。1.2.2样品处理打开青贮袋，将青贮饲料混合均匀，取10 g青贮饲料放入盛有90 mL蒸馏水的三角瓶内，放入4 ℃冰箱浸提24 h，4层纱布过滤，滤液-20 ℃冷藏备用。滤液用来测定pH值、氨态氮（ammonia nitrogen，AN）、乳酸（lactic acid，LA）、乙酸（acetic acid，AA）、丙酸（propionic acid，PA）和丁酸（butyric acid，BA）。1.3测定指标及方法1.3.1感官评定采用德国农业协会（DLG）标准[7]对青贮饲料质量进行感官评定，根据其气味、质地、色泽等各感官进行综合评分，分为优、良、中、下4个等级。1.3.2发酵品质测定pH值采用雷磁E-201F测定；氨态氮采用苯酚-次氯酸钠比色法[8]，计算氨态氮与总氮的比值（ammonia nitrogen/total nitrogen，AN/TN）；有机酸用高效液相色谱仪测定（日本岛津，LC-20A）。1.3.3营养成分取适量样品置于65 ℃烘箱中烘60 h，测定干物质（dry matte，DM）含量。中性洗涤纤维（neutral detergent fiber，NDF）、酸性洗涤纤维（acid detergent fiber，ADF）和酸性洗涤木质素（acid detergent lignin，ADL）的含量采用范氏纤维（van Soest）法[9]测定。粗蛋白（crud protein，CP）、酸溶蛋白(acid soluble protein)和总氮（total nitrogen，TN）含量采用凯氏定氮仪测定。1.4数据统计与分析采用Excel 2019对数据进行整理，采用SPSS 22.0进行单因素方差分析，采用Duncan氏法进行组间数据多重比较，结果以“平均数±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同菌制剂发酵全株构树青贮饲料的感官评定（见表1）由表1可知，对照组全株构树青贮饲料质地柔软、略黏、暗绿色、酸味较淡，评分为14，等级为良。各试验组青贮饲料的质地相同均为柔软、松散，Ⅱ和Ⅲ组青贮饲料的色泽为墨绿色优于Ⅰ和Ⅳ组。气味以Ⅱ组青贮饲料最优为酸香味，评分为19，等级最高为优；Ⅳ组青贮饲料有酸味，评分为18，等级为优。Ⅰ和Ⅲ组青贮饲料酸味淡，评价等级为良。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.06.025.T001表1不同菌制剂发酵全株构树青贮饲料的感官评定项目对照组Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组质地柔软、略黏柔软、松散柔软、松散柔软、松散柔软、松散色泽暗绿色暗绿色墨绿色墨绿色暗绿色气味酸味较淡酸味淡酸香味酸味淡，且有怪味酸味总评分1415191418等级良良优良优2.2不同菌制剂对全株构树青贮饲料发酵品质的影响（见表2）由表2可知，Ⅱ组青贮饲料氨态氮/总氮显著低于对照组和Ⅳ组（P0.05）。Ⅱ组青贮饲料乳酸含量显著高于其他各处理组（P0.05），且Ⅲ和Ⅳ组青贮饲料乳酸含量显著低于Ⅰ组和对照组（P0.05）。Ⅱ和Ⅲ组青贮饲料丙酸含量均显著低于对照组（P0.05），且Ⅱ组青贮饲料丙酸含量显著低于Ⅲ组（P0.05）。各处理组青贮饲料中均未检测到丁酸。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.06.025.T002表2不同菌制剂对全株构树青贮饲料发酵品质的影响（DM）项目对照组Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组pH值4.25±0.014.17±0.014.16±0.014.15±0.014.25±0.04酸溶蛋白/%8.50±0.558.23±0.729.23±0.339.38±0.089.20±0.03氨态氮/总氮/%3.57±0.01a3.30±0.14ab2.61±0.47b3.20±0.44ab3.48±0.06a乳酸/%9.94±0.35b10.01±0.01b11.72±0.30a8.32±0.25c8.80±0.15c乙酸/%4.42±0.034.80±0.184.86±0.274.40±0.644.25±0.16丙酸/%2.90±0.07a2.77±0.10ab2.37±0.01c2.59±0.11b2.72±0.05ab注：同行数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05），小写字母相同或无字母表示差异不显著(P0.05)；下表同。2.3不同菌制剂对全株构树青贮饲料营养成分的影响（见表3）由表3可知，Ⅲ组青贮饲料干物质含量显著高于其他各处理组（P0.05）。Ⅳ组青贮饲料粗蛋白含量显著高于对照组和Ⅰ组（P0.05）。Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组青贮饲料中性洗涤纤维含量显著低于对照组（P0.05），且三者间差异性显著（P0.05），Ⅱ组青贮饲料中性洗涤纤维含量最低。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组青贮饲料酸性洗涤纤维含量显著低于对照组（P0.05）。Ⅱ组酸性洗涤木质素含量最低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.06.025.T003表3不同菌制剂对全株构树青贮饲料营养成分的影响（DM）项目对照组Ⅰ组Ⅱ组Ⅲ组Ⅳ组干物质34.26±0.25b34.63±0.21b34.25±0.01b35.90±0.24a34.78±0.62b粗蛋白17.87±0.11b18.02±0.33b18.74±0.33ab18.75±0.59ab19.17±0.32a中性洗涤纤维31.83±0.09a31.60±0.05ab28.69±0.03d29.32±0.11c31.33±0.19b酸性洗涤纤维20.70±0.33a19.16±0.35b17.57±0.55c17.43±0.27c19.99±0.17ab酸性洗涤木质素2.30±0.022.29±0.021.87±0.082.17±0.022.16±0.20%3讨论3.1不同菌制剂对全株构树青贮饲料的感官评定感官评定是评价青贮饲料品质的常用方法，其操作简单、快捷，且应用范围较广[10]。感官评定依靠感官对青贮饲料的质地、色泽和气味进行综合评分，分为4个等级，即优、良、一般、差[11-12]。本试验中，除对照组外，其他各处理组青贮饲料质地均为柔软、松散，色泽和气味以添加植物乳杆菌和产朊假丝酵母菌较优。综合评分以添加植物乳杆菌和产朊假丝酵母菌较高，等级为优。3.2不同菌制剂对全株构树青贮饲料发酵品质的影响pH值是衡量青贮饲料发酵品质优劣的重要指标[13]，pH值越低说明青贮饲料发酵品质越好。本试验中，各处理组青贮饲料pH值与对照组无显著差异，可能因为各组均添加糖蜜提供了充足的发酵底物，且全株构树本身乳酸菌数量足够保证发酵顺利进行，故产酸较佳。酸溶蛋白含量是衡量饲料粗蛋白质品质的重要指标[14]。本试验中，各处理组青贮饲料间的酸溶蛋白含量无明显差异，表明仅添加糖蜜即可保证全株构树青贮饲料粗蛋白的质量。氨态氮含量反映青贮饲料发酵过程粗蛋白和氨基酸的分解程度，氨态氮含量越高表明粗蛋白分解越多，发酵品质越差。丁酸是梭酸发酵产物。优质的青贮饲料应含较低的氨态氮和丁酸[15-16]。乳酸也是衡量青贮饲料品质的重要指标。乳酸含量越高表明青贮饲料发酵品质越好[17]。董志浩等[18]研究表明，青贮桑叶中添加乳酸菌和发酵底物可以降低氨态氮/总氮，提高青贮饲料干物质含量。本试验中，添加植物乳杆菌和产朊假丝酵母菌处理组青贮饲料乳酸含量显著高于其他处理组，乙酸各处理组间无明显变化，丙酸含量以添加植物乳杆菌和产朊假丝酵母菌处理组青贮饲料较低，且各处理组青贮饲料中均未检测到丁酸，可能因为添加植物乳杆菌加速乳酸产出。氨态氮与总氮比值以添加植物乳杆菌和产朊假丝酵母菌处理组最低，可能是因为添加植物乳杆菌迅速产生大量的乳酸，使pH值降低，抑制有害微生物的繁殖，阻止蛋白质的分解。3.3不同菌制剂对全株构树青贮饲料营养成分的影响干物质是衡量青贮饲料发酵品质的指标[19]。本试验中，添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌处理组青贮饲料干物质含量显著高于其他处理组，且以添加植物乳杆菌和产朊假丝酵母菌处理组最低，可能是发酵开始时，酵母菌利用底物发酵产生乙醇从而导致青贮饲料干物质含量降低。粗蛋白是饲料中主要的营养物质，是衡量青贮饲料发酵品质的重要指标[20]。本试验中，以添加植物乳杆菌、产朊假丝酵母菌和枯草芽孢杆菌处理组青贮饲料粗蛋白含量较高，可能因为菌剂在发酵过程中大量繁殖，产生大量菌体蛋白导致粗蛋白含量增加。中性洗涤纤维是青贮饲料的主要成分，其含量与动物干物质采食量呈负相关。中性洗涤纤维含量越低，饲料利用率越高，动物采食量越高。酸性洗涤纤维是评估青贮饲料能量高低的重要指标。酸性洗涤纤维含量越低，动物消化利用越高，饲料价值越高[21]。酸性洗涤木质素反映植物木质化程度。酸性洗涤木质素含量越高，木质化越严重，饲料利用率越低。本试验中，添加植物乳杆菌和产朊假丝酵母菌处理组青贮饲料中性洗涤纤维和酸性洗涤木质素含量最低，添加产朊假丝酵母菌和枯草芽孢杆菌分别与植物乳杆菌组合添加处理组的酸性洗涤纤维含量无显著差异，均较低，可能因为2种菌剂组合添加有促进彼此发酵的作用，更利于菌体生长，而2种菌剂混合时会有拮抗作用。4结论单独或组合添加不同青贮菌剂均可以一定程度上改善全株构树青贮饲料的品质，降低蛋白质的分解，提高饲料利用。综合分析，添加植物乳杆菌和产朊假丝酵母菌效果较佳。