葡萄籽是葡萄酿酒后产生的副产品。葡萄籽营养价值丰富，含有原花青素、儿茶素、槲皮苷及单宁。葡萄籽具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗糖尿病、抗癌等生物学功能[1-3]。葡萄籽提取物应用于家禽养殖中，可以改善氧化应激、提高免疫力、提高蛋鸡产蛋率、抑制肉鸡肠道球虫生长等[4-8]。在生猪养殖生产中的研究中，可以改善生猪的抗氧化功能，提高生长性能，降低腹泻率等[9-12]。试验研究21日断奶仔猪日粮中添加不同剂量的葡萄籽提取物对其生长性能、免疫功能、肠道形态及菌群结构的影响，以期为葡萄籽提取物在断奶仔猪的养殖生产中提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验所用葡萄籽提取物购自天津尖峰天然产物研发有限公司。1.2试验动物试验所用断奶仔猪为21日龄杜长大仔猪，体重为（7.45±0.38）kg、健康、胎次接近的仔猪，由试验养殖场提供。1.3试验设计选取21日龄的断奶仔猪150头，随机分为5个处理组，每组6个重复，每个重复5头猪。对照组仔猪饲喂基础日粮，试验1~4组分别在基础日粮中添加40、80、120、160 mg/kg的葡萄籽提取物，试验预饲期1周，正式试验7周。试验日期为2020年7月5日~2020年9月2日。试验基础日粮为玉米-豆粕型日粮，其原料组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.06.008.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米65.97消化能/（MJ/kg）13.95豆粕22.60粗蛋白/%18.87鱼粉4.50钙/%0.69豆油1.10总磷/%0.60食盐0.35有效磷/%0.37蛋氨酸0.28L-赖氨酸0.35磷酸氢钙1.17石粉0.68预混料3.00注：预混料购自河南大北农饲料有限公司。1.4饲养管理试验开始前将试验猪舍采用卫可进行全方位清洗消毒，通风晾干后进行试验。试验仔猪自由采食和饮水，免疫程序按照猪场日常管理进行。1.5测定指标及方法1.5.1生长性能对试验仔猪在试验开始第1 d和最后1 d 8：00进行空腹称重，称重前禁食12 h，计算平均日增重。试验期间准确记录各组试验仔猪的采食量，计算平均日采食量和料重比。并观察腹泻仔猪情况，计算腹泻率。平均日增重=(试验末重-试验初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)腹泻率=[总腹泻头数/(仔猪头数×试验天数)]×100%(4)1.5.2免疫指标试验结束时，每个重复选择2头与每组平均体重相近的仔猪，颈静脉采血10 mL，3 500 r/min离心10 min，用移液枪吸取上层血清于-20 ℃保存，用于检测免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，检测时按照试剂盒说明书进行。1.5.3肠道形态及菌群结构试验结束时，分别在各组挑选4头仔猪进行屠宰，采集十二指肠、空肠及回肠各4 cm，采用生理盐水清洗干净，用10%的中性甲醛溶液中固定，用于制作石蜡切片，采用苏木精-伊红（HE）溶液染色，测定十二指肠、空肠、回肠个肠段的绒毛高度（VH）和隐窝深度（CD）、绒隐比（VH/CD）等指标。肠道菌群结构的检测采用探针法，对样品拷贝数进行检测，仔猪结肠、盲肠肠道段中的大肠杆菌、乳酸杆菌、沙门氏菌和双歧杆菌的含量。1.6数据统计与分析试验数据采用Excel统计整理，使用SPPS 20.0单因素分析，采用Duncan氏法进行组间的多重比较，结果以平均值和标准误表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1不同剂量葡萄籽提取物对断奶仔猪生长性能的影响（见表2）由表2可知，试验2、3组断奶仔猪的末重和平均日增重显高于对照组（P0.05）。试验1~4组断奶仔猪的料重比显著低于对照组（P0.05）。试验1~3组断奶仔猪的腹泻率极显著低于对照组（P0.01）。各组断奶仔猪平均日采食量差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.06.008.T002表2不同剂量葡萄籽提取物对断奶仔猪生长性能的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组试验4组SEMP值初重/kg7.507.487.437.467.451.030.419末重/kg23.93b24.75ab25.63a25.72a24.71ab1.810.042平均日增重/(g/d)335.31b352.45ab371.43a372.65a352.24ab16.040.038平均日采食量/(g/d)638.52640.32642.82643.51640.5020.730.529料重比1.90a1.82b1.73c1.73c1.82b0.260.021腹泻率/%5.63A4.20B3.76C3.42C5.05AB0.950.007注：同行数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05），大写字母不同表示差异极显著（P0.01），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同剂量葡萄籽提取物对断奶仔猪免疫指标的影响（见表3）由表3可知，试验2~4组仔猪的IgA含量显著高于对照组（P0.05）。试验2组、3组的IgG含量显著高于对照组（P0.05）。试验1~4组仔猪的TNF-α水平极显著低于对照组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.06.008.T003表3不同剂量葡萄籽提取物对断奶仔猪免疫指标的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组试验4组SEMP值IgA/（g/L）1.23b1.33ab1.40a1.43a1.40a0.620.032IgM/（g/L）0.340.360.370.360.380.050.147IgG/（g/L）3.20b3.68ab3.92a3.88a3.76ab1.520.041IL-6/（ng/L）46.8240.2438.7137.2039.742.510.220IL-10/（ng/L）150.42153.02154.91153.04151.733.510.381TNF-α/（ng/L）273.04A165.31B120.41C118.63C142.91B4.010.0052.3不同剂量葡萄籽提取物对断奶仔猪肠道形态的影响（见表4）由表4可知，试验2组、3组仔猪十二指肠的绒毛高度显著高于对照组（P0.05）。试验2组、3组仔猪空肠的绒毛高度极显著高于对照组（P0.05），试验2组、3组仔猪空肠的隐窝深度显著低于对照组（P0.05），试验1~4组仔猪空肠的绒隐比极显著高于对照组（P0.01）。试验2组、3组仔猪回肠的绒毛高度极显著高于对照组（P0.01），试验2组、3组仔猪回肠的绒隐比显著高于其他各组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.06.008.T004表4不同剂量葡萄籽提取物对断奶仔猪肠道形态的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组试验4组SEMP值十二指肠绒毛高度/μm420.31b465.72ab487.41a490.86a470.25ab15.410.040隐窝深度/μm145.31143.62141.85142.63144.603.870.610绒毛高度/隐窝深度2.893.243.443.443.251.300.076空肠绒毛高度/μm439.05B476.32AB508.73A512.06A464.91AB15.050.006隐窝深度/μm167.94a143.84ab120.62b119.64b138.73ab3.620.041绒毛高度/隐窝深度2.61C3.31B4.22A4.28A3.35B0.560.009回肠绒毛高度/μm335.81B367.00AB420.14A414.91A389.04AB15.170.004隐窝深度/μm150.20141.43130.30133.04148.513.830.130绒毛高度/隐窝深度2.24b2.59b3.22a3.12a2.62b0.610.0362.4不同剂量葡萄籽提取物对断奶仔猪肠道菌群结构的影响（见表5）由表5可知，试验2~4组仔猪盲肠的大肠杆菌数量显著低于对照组（P0.05），试验1~4组仔猪盲肠的乳酸杆菌和双歧杆菌的数量显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.06.008.T005表5不同剂量葡萄籽提取物对断奶仔猪肠道菌群结构的影响项目对照组试验1组试验2组试验3组试验4组SEMP值盲肠大肠杆菌8.45a8.03ab7.21c7.30c7.88b1.050.039沙门氏菌4.604.484.374.304.470.710.103乳酸杆菌6.24c6.83b7.45a7.52a6.90ab0.930.018双歧杆菌7.28c7.45b8.07a8.16a7.85ab0.880.041结肠大肠杆菌8.318.198.048.128.200.930.101沙门氏菌4.204.124.043.993.930.450.203乳酸杆菌6.056.146.206.366.240.510.301双歧杆菌7.167.357.467.407.320.720.429lgCFU/g3讨论3.1不同剂量葡萄籽提取物对断奶仔猪生长性能的影响断奶仔猪在断奶时，仔猪肠道发育未完整易导致断奶仔猪腹泻，生长受阻，影响后期的出栏体重，对养殖者的经济效益造成一定的损失。在断奶仔猪日粮中添加250 mg/kg的葡萄籽提取物可以降低由断奶应激产生的腹泻，提高仔猪对营养物质的消化吸收，提高仔猪的日增重和饲料转化率[13]。解玲娜等[12]研究发现，在断奶仔猪日粮中添加一定量的葡萄籽原花青素对仔猪的采食量无显著影响，但可以显著提高仔猪的日增重，显著降低料重比，显著提高仔猪的抗病率，葡萄籽原花青素在日粮中的最适添加量为70 mg/kg。邱玉朗等[14]发现，在生长猪日粮中添加葡萄籽粉可以提高生长猪日增重，降低料重比。本试验结果表明，葡萄籽提取物对断奶仔猪的平均日采食量无显著影响，80 mg/kg、120 mg/kg葡萄籽提取物组仔猪的末重和平均日增重显著高于对照组，各葡萄籽提取物组仔猪的料重比均显著低于对照组，40、80、120 mg/kg组葡萄籽提取物仔猪腹泻率极显著低于对照组，与上述研究结果类似。该结果说明在断奶仔猪日粮中添加一定量葡萄籽提取物可以显著改善断奶仔猪的生长性能，降低腹泻率，但添加量不宜过高。葡萄籽提取物改善断奶仔猪的生长性能可能与其有效成分（原青花素、儿茶素、槲皮苷）有关。葡萄籽的有效成分具有抗菌、抗炎等功效，可以减缓断奶应激，提高断奶仔猪的抗病力，降低腹泻率，改善生长性能[15]。3.2不同剂量葡萄籽提取物对断奶仔猪免疫力的影响仔猪在断奶时离开母乳免疫的保护，自身免疫力降低，极易感染细菌产生各种疾病。研究表明，在肉鸡日粮中添加7.5~15.0 mg/kg的葡萄籽提取物可以通过促进淋巴细胞的增殖来调节机体的免疫功能[16]。在生长猪的研究中，日粮中添加100 mg/kg和150 mg/kg的葡萄籽提取物可以显著提高生长猪的免疫球蛋白G含量、降低炎症因子（IL-6、IL-10）及TNF-α水平[17]。本试验研究结果显示，葡萄籽提取物对仔猪的IgM、IL-6、IL-10含量未产生显著影响，但一定剂量的葡萄籽提取物可以显著提高IgA含量、IgG含量，极显著降低TNF-α水平。本试验结果与上述研究结果类似。葡萄籽提取物提高仔猪免疫力的主要原因可能是葡萄籽中富含氨基酸，有利于机体对蛋白的吸收，提高机体的总蛋白、白蛋白数量。总蛋白、白蛋白含量反映着机体的发育情况和免疫力。因此，葡萄籽提取物具有提高仔猪机体的免疫力的功能。3.3不同剂量葡萄籽提取物对断奶仔猪肠道形态的影响仔猪的小肠是吸收营养物质的主要场所，其结构形态的完整性对仔猪尤其重要，仔猪对营养物质的吸收程度影响小肠的形态生长和功能[18]。小肠绒毛高度和隐窝深度反映小肠对营养物质的吸收程度[19]。断奶导致仔猪肠道功能的紊乱，肠道组织受到破坏，进而造成仔猪的腹泻[20]。本试验研究表明，一定剂量的葡萄籽提取物可以提高仔猪十二指肠的绒毛高度，提高空肠的绒毛高度，降低隐窝深度，提高绒隐比，提高回肠的绒毛高度，降低绒隐比。由此可知，葡萄籽提取物可以改善断奶仔猪肠道形态的完整性，加强小肠对营养物质的消化吸收能力。闫慧诗[21]研究显示，葡萄籽原花青素可增加断奶仔猪小肠的绒毛高度、密度、绒隐比，降低隐窝深度，与本试验研究结果一致。因此，本试验的仔猪腹泻率降低可能是因为葡萄籽提取物改善了小肠的肠道结构形态。3.4不同剂量葡萄籽提取物对断奶仔猪肠道菌群结构的影响断奶时，仔猪肠道内菌群的结构组成会改变，使有益菌数量减少，有害菌大量繁殖，进而导致断奶仔猪出现严重的腹泻情况[22]。葡萄籽提取物中富含多酚。多酚具有抗炎、抗氧化功能，可以对动物肠道菌群的结构产生积极的影响，改善肠道健康[23-25]。闫慧诗[21]研究表明，葡萄籽提取物可以增加仔猪肠道中菌群的多样性，提高乳酸菌数量。本试验研究显示，一定量的葡萄籽提取物能够显著改变盲肠的菌群结构，显著降低大肠杆菌数量，显著提高乳酸杆菌和双歧杆菌的数量，有降低沙门氏菌数量的趋势，但未达到显著水平，与闫慧诗[21]研究结果类似。4结论本试验结果表明，葡萄籽提取物可以提高断奶仔猪的末重、平均日增重、免疫球蛋白含量、绒毛高度、绒隐比、乳酸杆菌数量、双歧杆菌数量，降低料重比、TNF-α水平、大肠杆菌数量。其中，日粮添加80~120 mg/kg的葡萄籽提取物对断奶仔猪的生长性能、免疫力、肠道形态及菌群结构较好。