我国是食用菌生产大国，食用菌产量呈现逐年上升的趋势[1-4]。研究表明，食用菌中的香菇多糖（LNT）具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化促进肠道健康等药物功效，具有调节动物机体免疫力、抑菌抗病毒、抗氧化、调节肠道微生态平衡、提高畜禽生产性能等作用，在动物养殖过程中具有广阔的应用前景[5-7]。香菇原料在深加工过程中会产生大量的下脚料，造成资源浪费[8-10]。微生物发酵技术可以利用单一或者多种益生菌对食物加工后副产品进行发酵，可以有效降解食物加工副产品的纤维素含量，提高蛋白质等多种营养物质的营养含量和饲用价值[11]。采用微生物发酵技术对香菇原料在深加工过程中产生的下脚料进行发酵。采用多种益生菌进行发酵可以对香菇下脚料进行二次开发与利用，提高其香菇下脚料的应用价值。试验以荷斯坦育肥肉牛为研究对象，在基础日粮中添加不同水平的微生物发酵香菇下脚料，进一步研究对荷斯坦育肥牛肉生产性能、养分表观消化率及消化道酶活性的影响。1材料与方法1.1试验材料香菇下脚料由济南市香菇加工场提供。乳酸菌、枯草芽孢杆菌、双歧杆菌、粪尿球菌购自中国食品药品检测所。胰蛋白酶、脂肪酶、糜蛋白酶活性试剂盒购自南京科前生物科技有限公司。1.2试验动物试验于2019年6~9月在夏邑县县规模化育肥牛养殖场进行，选择体重为200 kg左右健康荷斯坦育肥牛60头进行试验。1.3试验设计荷斯坦育肥牛饲养试验采用单因素随机设计。选择体重相近、健康的荷斯坦育肥肉牛60头，随机分成4组，每组15个重复，每个重复1头荷斯坦育肥肉牛。1组为空白对照组，1组肉牛饲喂基础日粮。试验2、3、4组分别在基础日粮中添加1.5%、2.0%、2.5%微生物发酵香菇下脚料。预试期10 d，正式试验期56 d。每1头荷斯坦育肥肉牛为一个重复组单独给料，自由饮水，饲喂方式按照精、粗饲料4∶6比例进行混合饲喂，早晚各饲喂1次，定期免疫、驱虫。参照NRC（2012）推荐肉牛的营养水平配制，基础日粮组成与营养水平见表1。香菇下脚料的营养成分见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.006.T001表1基础日粮组成与营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米52.66代谢能/(MJ/kg)12.45麦麸8.37干物质/%88.10豆粕22.00粗蛋白质/%15.26棉粕4.37中性洗涤纤维/%41.34骨粉2.17酸性洗涤纤维/%31.95食盐1.09钙/%1.12预混料6.08磷%0.74小苏打1.09酒糟2.17注：每千克预混料含有：VA 3 100 IU、VD 850 IU、VE 30 IU、铁50.00 mg、铜10.00 mg、锌35.00 mg、锰60.00 mg、碘0.30 mg、钴0.12 mg、硒0.16 mg。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.006.T002表2香菇下脚料的营养成分项目碳水化合物/%水分/%灰分/%蛋白质/%磷/(mg/kg)钙/(mg/kg)含量24.812.24.819.23 263.2188.61.4微生物发酵香菇下脚料制备将香菇下脚料制成长度为2~3 cm，将乳酸菌、枯草芽孢杆菌、双歧杆菌、粪尿球菌复苏扩大培养，其总菌量≥1×108 CFU／mL，水与香菇下脚料的比例为1∶2，按照1/10体积添加乳酸菌、枯草芽孢杆菌、双歧杆菌、粪尿球菌搅拌均匀加入发酵罐，在20~25 ℃条件下厌氧发酵21 ｄ。1.5测定指标及方法1.5.1生产性能对试验肉牛逐个空腹称重，记录试验初重、末重及试验期的采食量，计算生长性能指标。平均日增重=(末重-初重)/天数(1)平均日采食量=每头试验期内采食量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.5.2养分表观消化率参考刘燕[12]报道的方法，采集各个重复组样品并进行处理，将样品送中国农业科学院北京畜牧研究所饲料营养试验室检测其粪便中营养物质消化率，计算其表观消化率。养分表观消化率＝100%-(饲料中指示剂含量%)／(粪中指示剂含量%)×(粪中养分含量/饲料中养分含量%)(4)1.5.3消化道酶活性参考王娇等[13]研究方法，试验结束后每个组随机选择3只试验肉牛，禁食24 h不禁水，称重屠宰后打开腹腔，分别取十二指肠、空肠近端、中端、末端各5 cm，用生理盐水冲洗食糜后，载玻片刮取黏膜分装于1.5 mL离心管，放置液氮罐内保存。参照试剂盒说明书测定其十二指肠、空肠中段食糜的胰蛋白酶、脂肪酶、糜蛋白酶活性。1.6数据统计与分析试验结果采用统计学软件SPSS 18.0统计，以每个重复为单位进行单因素多重因素比较，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1微生物发酵香菇下脚料对肉牛生产性能的影响（见表3）由表3可知，试验3、4组试验荷斯坦育肥肉牛的平均日增重较对照组提高19.7%、15.8%（P＜0.05）。试验3、4组试验荷斯坦育肥肉牛的料重比较对照组降低13.4%、11.7%（P＜0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.006.T003表3微生物发酵香菇下脚料对肉牛生产性能的影响组别初重/kg末重/kg平均日增重/(kg/d)平均采食量/（kg/d）料重比1组200.00±3.60242.56±4.600.76±0.27b8.71±1.1310.12±0.11a2组200.00±3.40246.48±5.400.83±0.24ab8.83±1.249.28±0.24ab3组200.00±2.80250.96±8.600.91±0.42a9.93±1.248.76±0.24b4组200.00±3.30249.28±9.600.88±0.14a9.95±1.438.94±0.24b2.2微生物发酵香菇下脚料对肉牛养分表观消化率的影响（见表4）由表4可知，试验3、4组试验荷斯坦育肥肉牛的粗蛋白质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维表观消化率较对照组分别提高15.7%、11.4%，18.7%、17.0%，25.9%、22.5%（P＜0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.006.T004表4微生物发酵香菇下脚料对肉牛养分表观消化率的影响组别干物质粗蛋白质中性洗涤纤维酸性洗涤纤维钙磷1组62.22±2.1253.24±2.32b54.18±2.22 b35.43±2.55b39.22±3.1241.82±2.132组63.27±2.4354.15±2.13ab59.42±2.23ab38.28±2.13ab40.12±3.2342.18±2.233组65.42±2.2661.61±3.28a64.33±2.32a44.62±2.42a42.52±2.4244.12±2.344组66.12±2.1259.33±3.43a63.37±2.34a43.41±2.12a43.11±2.4545.43±2.31%2.3微生物发酵香菇下脚料对肉牛消化道酶活性的影响（见表5~表7）由表5可知，试验3、4组试验荷斯坦育肥肉牛的十二指肠、空肠中的食糜中胰白酶活性显著高于对照组（P＜0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.006.T005表5微生物发酵香菇下脚料对肉牛消化道胰白酶活性的影响组别十二指肠空肠近端空肠中端空肠末端1组5.12±0.12b8.24±0.32b9.68±1.22 b8.43±1.15b2组5.47±0.41ab9.05±0.13ab10.22±1.23ab9.48±1.33ab3组5.82±0.21a9.21±0.28a11.35±1.02a9.22±1.12a4组5.72±0.32a9.13±0.43a11.17±1.04a10.21±1.32aU/mL由表6可知，试验3、4组荷斯坦育肥肉牛的十二指肠、空肠中的食糜中蛋白酶活性显著高于对照组（P＜0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.006.T006表6微生物发酵香菇下脚料对肉牛消化道蛋白酶活性的影响组别十二指肠空肠近端空肠中端空肠末端1组4.62±0.42b6.24±0.12b8.08±0.22 b4.23±0.45b2组5.17±0.31ab6.05±0.13b8.22±0.33ab4.42±0.23ab3组5.72±0.51a7.21±0.21a9.35±1.02a5.12±0.12a4组5.82±0.32a7.13±3.43a9.17±1.04a5.22±0.22aU/mL由表7可知，试验2、3、4组试验荷斯坦育肥肉牛的十二指肠、空肠中的食糜中脂肪酶活性均高于对照组，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.006.T007表7微生物发酵香菇下脚料对肉牛消化道脂肪酶活性的影响组别十二指肠空肠近端空肠中端空肠末端1组574.42±31.12776.24±31.32958.08±43.22784.23±25.252组587.77±32.21796.05±42.53998.22±45.31749.42±26.133组597.76±42.51811.61±51.411 006.25±41.22829.12±32.134组615.62±43.12827.23±53.421 012.37±42.24845.52±35.32U/mL3讨论3.1微生物发酵香菇下脚料对肉牛生产性能的影响香菇下脚料中含多糖、多酚和黄酮等活性物质，利用率较高。但是，香菇下脚料含有大量的纤维素，纤维素结构致密导致香菇下脚料的动物利用率较低[14-15]。香菇下脚料经过微生物发酵后，可以有效降低纤维素含量，提高营养价值。本试验研究表明，2.0%、2.5%香菇下脚料组肉牛的平均日增重显著高于对照组，料重比显著低于对照组，香菇下脚料组肉牛的平均采食量均高于对照组，说明添加不同水平的微生物发酵香菇下脚料可以提高育肥牛的生长性能。原因可能是香菇下脚料通过发酵后可以促进肉牛瘤胃的发酵机能，提高其饲料中的营养物质的转化率，进而提高肉牛的生长性能。3.2微生物发酵香菇下脚料对肉牛养分表观消化率的影响饲料中营养物质表观消化率是评价营养物可消化性和可利用性。饲料中营养物质不平衡可严重影响饲料利用率，增加养殖成本[16-17]。本试验研究表明，微生物发酵香菇下脚料组肉牛的粗蛋白质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维的表观消化率显著高于对照组，其他营养物质的消化率均高于对照组，说明不同水平的微生物发酵香菇下脚料添加可以提高其营养物质表观消化率。香菇下脚料发酵后可以促进瘤胃内微生物蛋白质合成量，提高其粗纤维、粗蛋白质的利用率，同时调节体内营养物质的代谢，提高其营养物质养分表观消化率。3.3微生物发酵香菇下脚料对肉牛消化道酶活性的影响反刍动物的消化酶是由消化器官合成与分泌的。其中，淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶和脂肪酶是消化道中主要的酶类。消化道中各种酶的分泌与活性直接影响饲料在消化道内的消化。消化酶活性可以间接反映饲料中营养物质消化、吸收和利用的程度[18-20]。本试验研究表明，试验3、4组肉牛的十二指肠、空场中的食糜中胰白酶、蛋白酶的活性显著高于对照组，试验2、3、4组肉牛的十二指肠、空肠中的食糜中脂肪酶活性均高于对照组，说明不同水平的微生物发酵香菇下脚料添加可以提高肉牛十二指肠、空肠中食糜中胰白酶、蛋白酶、脂肪酶的活性。香菇下脚料通过发酵后可以刺激消化道内酶分泌，提高其胰白酶、蛋白酶、脂肪酶的活性，促进食物在消化道中消化与吸收，提高饲料利用率，因而提高其生长性能及养分表观消化率。4结论添加不同水平的微生物发酵香菇下脚料，可以提高育肥牛生长性能、养分表观消化率及消化道酶活性，以2.0%添加量为适宜。