饲粮中纤维物质可以促进反刍动物瘤胃的发育，纤维物质的含量是影响瘤胃发酵的重要因素之一，纤维物质对于反刍动物的采食量、反刍时间、瘤胃挥发性脂肪酸（VFA）产量与比例和乳中营养成分含量均有重要影响[1]。酵母培养物（YC）是指在特定工艺条件下，由酵母菌在液态或固态培养基上经过充分的厌氧发酵后形成的微生态制品[2]。酵母培养物主要由残余酵母细胞、经发酵的变异培养基和细胞外代谢产物等组成。细胞外代谢产物主要包括氨基酸、活性肽、寡糖、B族维生素、脂类、矿物质及其他未知生长因子[3]。YC作为一种安全、无残留的微生态制剂，在反刍动物[4-5]、猪[6]、蛋鸡[7]等生产实践中表现出相应的营养功能或保健功效。Titi等[8]研究表明，在羔羊和山羊饲粮中添加YC能够提高机体全消化道有机物（OM）和酸性洗涤纤维（ADF）的消化率。Deaville等[9]发现，补饲YC可显著提高山羊干物质采食量和饲粮纤维物质表观消化率。试验探究在不同ADF水平饲粮中添加YC对山羊体外瘤胃发酵的影响，为YC在山羊生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验动物及饲粮试验选取3只（12±1）月龄、（30±2.5）kg、装有永久性瘤胃瘘管的健康公山羊。试验配制ADF含量分别为16%、18.5%、21%的日粮，在其基础上分别添加0、1.0%、1.5%的酵母培养物，试验日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.003.T001表1试验日粮组成及营养水平（干物质基础）项目16%ADF18.5%ADF21%ADF原料组成/%苜蓿0014羊草0010燕麦草41515玉米青贮27298玉米171525豆粕17138玉米酒精糟0910小麦麸10101玉米皮1540甜菜颗粒400预混料444合计100100100营养水平粗蛋白质/%15.4015.4015.40淀粉/%24.0024.0024.00糖/%5.765.765.76中性洗涤纤维/%35.0035.0035.00酸性洗涤纤维/%16.0018.5021.00粗脂肪/%3.923.923.92代谢能/（MJ/kg）11.3110.9110.75注：1.每千克预混料含有：CaCO3 15.53 g、Ca(H2PO4)2 27.26 g、NaCl 4.30 g、KCl 0.64 g、K2SO4 25.11 g、MgSO4·7H2O 4.46 g、MgO 2.51 g、CoSO4·7H2O 1 mg、CuSO4·5H2O 119 mg、KI 2.3 mg、FeSO4·7H2O 100 mg、MnSO4·H2O 81.4 mg、ZnSO4·7H2O 269.1 mg、Na2SeO3 0.8 mg、VA 10 600 IU、VD 1 950 IU、VE 336 IU。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.2试验设计试验采用2因素3水平全因子试验设计，以饲粮ADF水平与YC添加剂量作为2个试验因素，每个因素设置3个水平，试验共分为9组，每组3个重复。试验设计见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.003.T002表2试验设计项目0 YC1% YC1.5% YC16.0% ADFA1A2A318.5% ADFB1B2B321.0% ADFC1C2C31.3体外试验晨饲前1 h，采用硬质PVC取样管从上述3只安装永久性瘤胃瘘管的山羊的瘤胃内上下左右不同位点采集瘤胃液，采集瘤胃液完成后立即盖上瓶盖，迅速返回试验室。瘤胃液经4层纱布过滤到提前预热好的烧杯中，持续通CO2以保证厌氧环境，将3只山羊的瘤胃液滤液混合均匀，为瘤胃液的接种液备用。缓冲液采用Menke等[10]的方法配制，试验开始前1 h混合均匀并通入CO2至无色，置于39 ℃恒温水浴中预热。使用ANKOM RFS产气装置进行体外培养试验，将缓冲液与过滤后的瘤胃液按照2∶1混合，分装至培养瓶中，每个培养瓶中装入溶液120 mL（80 mL缓冲液、40 mL瘤胃液），持续通入CO2 30 s，立即盖上盖子放入气浴培养箱中培养，打开GPM软件监控记录产气量。体外消化试验使用ANKOM Daisy II型体外模拟培养箱，将缓冲液与过滤后的瘤胃液按照3∶1混合，分装至培养瓶中，每个培养瓶中装入溶液1 600 mL（1 200 mL缓冲液、400 mL瘤胃液），持续通入CO2 1 min，立即盖上盖子放入气浴培养箱中培养。1.4测定指标及方法干物质消化率参照董佳楠等[11]测定方法；pH值使用便携式pH计（上海三信仪表厂）测定，按照规定时间点取出的发酵液，将干净的探头插入，示数稳定后读数记录；参照冯宗慈等[12]改进的比色法测定发酵液中的NH3-N含量；使用Agilent Technologies 7890B气象色谱仪测定发酵液中的VFA，具体参照周雪飞[13]的方法。1.5数据统计与分析使用Excel进行数据整理，使用SPSS 19.0软件一般线性模型（General Linear Model，GLM）进行两因素方差分析。采用Duncan氏多重比较方法进行显著性分析，结果以平均值和标准误（SEM）表示。2结果与分析2.1不同ADF水平饲粮中添加酵母培养物对pH值及NH3-N的影响（见表3）由表3可知，随着饲粮ADF水平的升高，30 h发酵液中18.5%、21.0%ADF水平饲粮组pH值显著高于16.0%饲粮组（P＜0.05）。添加YC在24 h发酵液pH值显著高于未添加YC组（P＜0.05）。ADF水平与YC添加量对于12 h发酵液pH值有显著互作效应（P＜0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.003.T003表3不同ADF水平饲粮中添加酵母培养物对pH值及NH3-N的影响项目pH值NH3-N/(g/100 L)12 h24 h30 h12 h24 h30 h组别A16.366.115.7412.5112.9114.71A26.376.115.7412.7514.3715.80A36.416.115.7312.4813.8416.65B16.436.115.7814.4713.5617.77B26.426.125.8114.5112.7816.22B36.446.125.8115.6713.8816.38C16.486.145.8115.9414.7217.66C26.466.175.8117.7414.6916.65C36.446.165.816.7015.0817.91酸性洗涤纤维16.0%6.38a6.11a5.74a12.58a13.61a15.66a18.5%6.42b6.12a5.80b14.88b13.41a17.31b21.0%6.46c6.16b5.81b16.80c15.32b16.81b酵母培养物06.416.12a5.7814.3114.1716.251.0%6.426.13b5.7815.6613.9216.481.5%6.426.13b5.7915.6214.2717.06SEM0.040.020.040.240.10.19P值ADF0.050.050.050.050.050.05YC0.390.050.360.050.380.09ADF×YC0.050.200.440.080.050.12注：同列数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著（P＞0.05），不同字母表示差异显著（P＜0.05）；下表同。21.0%ADF处理组发酵液体外12、24 h的NH3-N含量均显著高于16.0%、18.5%ADF水平组（P＜0.05）。发酵30 h时，21.0%、18.5%ADF水平处理组NH3-N含量显著高于16%ADF水平组（P＜0.05）。ADF水平与YC添加量对于24 h发酵液NH3-N浓度有显著互作效应（P＜0.05）。2.2不同ADF水平饲粮中添加酵母培养物对VFA浓度的影响（见表4、表5）由表4、表5可知，在发酵30 h时，随着饲粮ADF水平的上升，瘤胃液的乙酸、丙酸、丁酸和TVFA含量显著降低（P＜0.05）。16.0%ADF饲粮组瘤胃液丁酸与TVFA含量均显著高于18.5%和21.0%组（P＜0.05）。添加YC能显著增加30 h乙酸和TVFA含量（P＜0.05），且添加1.0%YC的效果优于1.5%YC组。1.5%YC组30 h发酵液中丙酸含量显著高于未添加YC组（P＜0.05）。1.0%与1.5%YC添加剂量对乙丙比无显著影响（P＞0.05），饲粮ADF水平与YC互作效应只对于24 h乙酸含量有显著的互作效应（P＜0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.003.T004表4不同ADF水平饲粮中添加酵母培养物对VFA的影响项目乙酸丙酸丁酸12 h24 h30 h12 h24 h30 h12 h24 h30 h组别A143.5653.4859.0818.2322.0027.077.228.729.86A243.1552.2958.6017.9821.6826.527.619.1110.34A343.4251.5957.8518.4021.5626.757.308.8510.18B142.8651.5655.5418.0122.6225.167.118.289.31B243.7653.3357.3219.8923.1625.887.048.218.92B341.3952.2456.4317.9223.3125.786.918.088.81C142.5150.4953.2918.2521.7623.907.018.078.42C243.7052.6856.3817.9123.3425.366.937.978.40C342.8752.5756.6418.3222.5625.626.797.297.97酸性洗涤纤维16.0%43.3852.4558.51b18.2021.75a26.78b7.38b8.89b10.13c18.5%43.0052.3556.43a18.6123.03b25.61a7.02a8.19a9.01b21.0%43.3651.8755.44a18.1622.55b24.96a6.91a7.78a8.26a酵母培养物043.6452.6955.97a18.1622.1325.37a7.118.369.201.0%43.5451.7457.44b18.5922.7325.92ab7.198.439.221.5%42.5652.3556.97b18.2122.4826.05b7.008.078.99SEM0.220.230.280.190.150.130.050.110.06P值ADF0.740.630.050.580.050.050.050.050.05YC0.110.120.120.610.300.120.310.390.25ADF×YC0.310.050.130.200.320.110.510.680.12mmol/L10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.003.T005表5不同ADF水平饲粮中添加酵母培养物对TVFA与乙丙比的影响项目TVFA/(mmol/L)乙丙比12 h24 h30 h12 h24 h30 h组别A169.0182.2096.012.382.432.18A268.7483.0895.462.212.422.21A369.1282.0094.782.322.392.16B167.9882.4690.002.332.282.21B270.6984.792.122.442.312.21B366.2283.6391.022.342.242.19C167.7780.3285.612.332.322.23C268.5483.9990.142.442.262.22C367.9882.4290.222.342.332.21酸性洗涤纤维16.0%68.9683.0995.42c2.312.412.1918.5%68.3083.6091.05b2.372.282.2121.0%68.1082.2488.66a2.372.302.22酵母培养物068.2582.3390.54a2.352.342.211.0%69.3283.9292.57b2.372.332.221.5%67.7882.6892.01ab2.342.322.20SEM0.300.310.360.020.010.01P值ADF0.470.230.050.210.050.60YC0.120.120.080.770.690.73ADF×YC0.120.120.100.050.310.992.3不同ADF水平饲粮中添加酵母培养物对产气量和干物质消化率的影响（见表6）由表6可知，发酵30 h时，16.0%与18.5%ADF水平组干物质消化率均显著高于21.0%ADF组（P＜0.05）。YC添加剂量对于干物质消化率影响不显著（P＞0.05）。随着饲粮ADF水平的增加，产气量在发酵12、24和30 h均出现降低的趋势，且在发酵12 h时达到显著水平（P＜0.05）。在发酵12、24和30 h时，添加YC均提高体外发酵的产气量，1.0%YC剂量添加组在发酵12 h产气量显著高于其他处理组（P＜0.05）。ADF水平与YC添加量互作效应对发酵12 h产气量有显著影响（P＜0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.07.003.T006表6不同ADF水平饲粮中添加酵母培养物对产气量和干物质消化率的影响项目干物质消失率/%产气量/mL12 h24 h30 h12 h24 h30 h组别A115.9221.9224.98189.80263.62278.83A216.3222.2824.92199.52273.18287.29A316.2021.7324.74189.80258.45279.13B115.5421.6724.78188.24258.14274.59B216.1022.0825.22182.91256.57275.69B316.0122.3025.15183.84257.82272.24C114.9321.7223.55175.70254.69270.05C215.0322.1124.28179.93260.33276.16C315.2322.1823.95180.71260.49280.55酸性洗涤纤维16.0%16.15b21.9824.88b193.04c265.09281.7518.5%15.88b22.0125.05b185.00b257.51274.1821.0%15.06a22.0123.92a178.78a258.50275.59酵母培养物015.4721.7724.44184.58a258.82274.491.0%15.8122.1624.81187.45b263.36279.711.5%15.8122.0724.61184.79a258.92277.31SEM0.120.130.140.351.531.47P值ADF0.050.860.050.050.120.11YC0.410.470.560.050.400.37ADF×YC0.970.820.870.050.380.513讨论3.1不同ADF水平饲粮中添加不同剂量酵母培养物对pH值及NH3-N的影响pH值受唾液、瘤胃VFA、乳酸与饲粮成分等影响较大，能够影响瘤胃微生物菌群的变化，从而改变瘤胃发酵效果。周雪飞[13]发现，在饲粮中添加两种不同产品的YC均可以增加小尾寒羊瘤胃pH值。本试验结果发现，添加YC能显著增加24 h发酵液pH值，在其他时间点有增加趋势，但效果不显著，与前者结果一致。在整个试验过程中，发酵液pH随着饲粮ADF水平的升高而升高，这与王海荣等[14]研究结果一致，这可能因为低ADF水平饲粮中累积较多的VFA。NH3-N是由瘤胃微生物分解瘤胃食糜中含氮物质产生，并用于合成瘤胃微生物蛋白的瘤胃发酵物质，它是微生物分解含氮物质，产生NH3速度与利用NH3合成MCP效率的综合结果。Oetega[15]等研究认为，反刍动物瘤胃NH3-N含量在6.3~27.5 g/100 L时，不会影响到瘤胃正常发酵。本试验各时间不同处理组发酵液中NH3-N浓度都在前者所列范围内，表明本试验的ADF水平与YC剂量能够保证山羊瘤胃NH3-N浓度的正常变化，不会对瘤胃发酵产生不利影响。3.2不同ADF水平饲粮中添加不同剂量酵母培养物对VFA的影响VFA由碳链为1~6的脂肪酸组成，主要包括乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、异戊酸等，是反刍动物主要的供能物质之一，其中丙酸能量转化率最高。VFA成分的吸收速度取决于pH值，通常丁酸吸收速度最快。饲粮营养结构与部分饲料添加剂都可以在一定程度上影响VFA的生成量和组成。邹华围等[16]研究表明，随着酸性洗涤纤维水平的升高，山羊瘤胃中乙酸、丙酸、丁酸及TVFA含量均显著降低。本试验结果发现，在体外培养30 h时，发酵液中乙酸、丙酸、丁酸、TVFA含量随着ADF水平的提高而显著降低，与前者结果一致。唐海翠等[17]研究表明，在山羊饲粮中添加不同剂量的YC能显著增加瘤胃乙酸、丙酸、丁酸与TVFA浓度。本试验中，添加不同剂量YC显著增加30 h乙酸、丙酸与TVFA含量，与前者结果一致。且添加1%剂量YC提高TVFA含量高于添加1.5%，表明YC添加剂量能够影响瘤胃发酵[18]，添加YC促进瘤胃TVFA生成[19]。3.3不同ADF水平饲粮中添加不同剂量酵母培养物对山羊体外发酵产气量与干物质消化率的影响产气量为饲粮在瘤胃中经微生物发酵作用产生的指标之一。产生气体主要为二氧化碳与甲烷，产气量反映瘤胃微生物活性与饲粮营养成分可被吸收的程度[20]。本试验结果表明，产气量与干物质消化率均随着ADF水平的升高而下降。此外，在不同ADF水平饲粮中添加YC有提高各组产气量与干物质消化率的趋势，YC可以通过改善瘤胃发酵，提高饲粮营养物质利用率，从而增加产气量与干物质消化率[21]。4结论在体外试验条件下，1.0%与1.5%YC添加量对于16.0%ADF饲粮组瘤胃发酵效果与干物质消化率无明显影响，但是能够促进18.5%与21.0%ADF饲粮组中VFA含量、产气量与干物质消化率，且添加1.0%剂量YC相比于1.5%促进效果更好。