壳寡糖[1]、低聚半乳糖[2]、沸石[3]、草药和益生菌[4]、博落回提取物[5]等作为饲料添加剂，能够促进动物生长，改善动物健康[6]，有替代抗生素的潜力。近年来，蒿属植物已成为该领研究的热点。Zimmermann-Klemd等[7]研究发现，艾蒿提取物具有较强的免疫抑制活性。Zhang等[8]发现，艾蒿中的一种倍半萜内酯类物质能够通过下调NF-κB信号通路抑制炎症反应。黑沙蒿（Artemisia ordosica）是一种菊科蒿属草本植物，主要分布在我国宁夏等西北部地区[9]。黑沙蒿含有多种生物活性化合物，如萜类、醇类、酯类、酮类化合物、羧酸、挥发油和多炔类[10-12]，具有调节动物免疫和抗氧化功能的作用[11]。本课题组前期研究发现，艾蒿水提物对小白鼠的免疫和抗氧化功能有促进作用，在毒理学试验中，证实艾蒿水提物为无毒性物质[13]。研究发现，艾蒿、黑沙蒿和黄花蒿水提物能够提高肉仔鸡的生长性能、免疫和抗氧化功能[14-17]，缓解免疫应激状态下肉仔鸡的肠黏膜损伤[18]。黑沙蒿多糖能够提高大鼠的生长性能和抗氧化功能[19]，且能调节肠道菌群[19]。本试验以小白鼠为试验对象，研究黑沙蒿水提物对其生长性能、免疫和抗氧化指标的影响，以期为黑沙蒿在动物生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1黑沙蒿水提物的制备试验所用的黑沙蒿采自内蒙古鄂尔多斯市境内，收割地上部分，将其在室温下阴干，切碎。每次称取200 g切碎的黑沙蒿，放入锅中煎熬3次，分别加入1 000、800、500 mL水，将3次所得滤液混合，浓缩，冻干，所得冻干粉为黑沙蒿水提物。1.2试验设计试验采用单因素随机设计，选取体重相近的30只28日龄的雄性小白鼠，随机分为5个处理组，每个处理组6个重复。5个处理组分别为基础日粮组，基础日粮+250 mg/kg WEAO组，基础日粮+500 mg/kg WEAO组，基础日粮+1 000 mg/kg WEAO组，基础日粮+2 000 mg/kg WEAO组。基础日粮为维持型鼠粮，购自江苏省协同医药生物工程有限责任公司。基础日粮营养成分表见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.012.T001表1基础日粮营养水平项目含量水分10.00粗蛋白18.00粗脂肪4.00粗纤维5.00灰分8.00钙1.00磷0.60赖氨酸0.82蛋氨酸+半胱氨酸0.53%在内蒙古医科大学实验动物中心开展小白鼠的饲养试验。预试期5 d，正式试验期28 d。1.3样品采集在正式试验第1、28 d称重，结料。从正式试验第14 d开始，连续3 d收集每只老鼠的粪便（全收粪法），并记录粪便重量和采食量。在试验期第28 d，从小白鼠眼眶静脉丛取血，倾斜45°静置后离心（4 000 r/min，15 min），-20 ℃保存备用。每组随机选取与平均体重相近的1只小鼠进行屠宰，采集肝脏和肠组织，用吸水纸取出其上的血液，称重。1.4测定指标及方法在预试期结束后,称取初重，在正式试验期第28 d称重，结料，并记录每天每个重复的耗料量。生长性能计算公式如下：平均日增重=（末重-初重）/试验天数(1)平均日采食量=试验期总耗料量/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)营养物质消化率：采用烘箱干燥法测定干物质（DM），采用凯氏定氮法测定粗蛋白（CP），采用乙醚浸提法测定粗脂肪（EE），采用高锰酸钾滴定法测定钙（Ca），采用钼黄比色法测定磷（P）。将肝脏和肠组织用组织匀浆器磨成10%的组织匀浆液，采用ELISA试剂盒测定血清免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-2（IL-2）和肠组织中分泌型免疫球蛋白A（sIgA）含量，以及血清和肝脏、肠组织匀浆液中总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醇（MDA）含量。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel软件整理，利用SAS软件进行回归分析。P0.01表示差异极显著，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1WEAO对小白鼠生长性能和营养物质表观消化率的影响（见表2、表3）由表2可知，随着饲粮中WEAO添加量的增加，小白鼠的ADG、ADFI和F/G未呈现出明显的剂量依赖效应（P0.1）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.012.T002表2WEAO对小白鼠生长性能的影响项目WEAO添加量/（mg/kg）SEMP值02505001 0002 000线性二次初重/g30.7830.8630.9830.8230.871.350.9890.999末重/g41.9141.4242.0841.3641.371.580.7970.967平均日增重ADG/(g/d)0.410.420.410.410.340.030.1450.250平均日采食量ADFI/(g/d)5.986.286.046.025.820.150.1510.147料重比F/G13.8814.3214.6314.6615.201.200.5040.795由表3可知，随着饲粮中WEAO添加量的增加，小白鼠CP和P的表观消化率有二次曲线升高趋势（P0.1）；而Ca的表观消化率随WEAO添加量的增加呈极显著的一次线性升高效应（P0.01），且以2 000 mg/kg 添加组效果最好。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.012.T003表3WEAO对小白鼠营养物质表观消化率的影响项目WEAO添加量/（mg/kg）SEMP值02505001 0002 000线性二次DM80.3080.6081.3081.0080.200.010.7510.421CP76.6079.3079.2080.4079.400.010.1980.089EE95.4095.1095.1095.0094.900.010.2480.422Ca52.5058.8064.5065.3066.500.020.0060.021P63.8067.7069.2070.6070.900.020.3610.059%2.2WEAO对小白鼠免疫因子的影响（见表4）由表4可知，小白鼠血清中免疫因子IgM（P0.01）、IgG（P0.05）和IL-1β（P0.01）的含量随饲粮中WEAO添加量的增加呈显著的一次线性升高效应，且2 000 mg/kg剂量组较为突出。小白鼠肠组织中sIgA含量未呈现出明显的变化规律。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.012.T004表4WEAO对小白鼠免疫因子的影响项目WEAO添加量（mg/kg）SEMP值02505001 0002 000线性二次血清IgM/(mg/L)1.281.421.391.681.910.160.0010.001IgG/(mg/L)250.00256.00255.00291.00313.0023.540.0390.123IL-1β/(ng/L)56.9061.1068.2061.6075.303.500.0010.006IL-2/(ng/L)14.7015.0014.6015.3014.700.800.9890.939组织sIgA/(mg/g prot)28.9030.4037.0040.9035.604.340.2630.1142.3WEAO对小白鼠血清、组织和肝脏中抗氧化指标的影响（见表5~表7）由表5可知，小白鼠血清中T-AOC随饲粮中WEAO添加量的增加呈极显著的一次线性或二次曲线升高效应（P0.01）；血清中SOD的活性呈极显著的二次曲线升高效应（P0.01）。MDA含量呈显著的二次曲线降低效应（P0.05）。添加2 000 mg/kg WEAO时效果最好。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.012.T005表5WEAO对小白鼠血清抗氧化指标的影响项目WEAO添加量/（mg/kg）SEMP值02505001 0002 000线性二次T-AOC/(U/L)0.550.700.740.770.940.080.0010.001SOD/(U/mL)165.00224.00215.00235.00241.0018.210.0110.008MDA/(μmol/L)8.615.276.315.045.540.700.0750.019由表6可知，小白鼠肠组织中SOD（P0.05）和GSH-Px（P0.1）的活性随饲粮中WEAO添加量的增加呈二次曲线升高效应；小白鼠肠组织MDA的含量随WEAO添加量的增加呈二次曲线降低趋势（P0.1），且在1 000 mg/kg 添加水平时最低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.012.T006表6WEAO对小白鼠肠组织中抗氧化指标的影响项目WEAO添加量/（mg/kg）SEMP值02505001 0002 000线性二次T-AOC/(U/mg prot)8.1711.8410.9814.0110.751.300.5630.133SOD/(U/mg prot)153.00162.00167.00173.00216.0016.300.8220.042GSH-Px/(U/mg prot)31.8039.0035.2054.5032.806.970.8080.075MDA/(μmol/g prot)4.924.703.962.104.600.540.7830.054由表7可知，小白鼠肝脏中GSH-Px活性随饲粮中WEAO添加量的增加呈极显著的二次曲线升高效应（P0.01）；肝脏中MDA的浓度随WEAO添加量的增加呈显著的二次曲线降低效应（P0.05），且在1 000 mg/kg添加水平下表现最好。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.012.T007表7WEAO对小白鼠肝脏中抗氧化指标的影响项目WEAO添加量/（mg/kg）SEMP值02505001 0002 000线性二次T-AOC/(U/mg prot)0.681.050.940.671.100.120.4890.764SOD/(U/mg prot)348.00466.00412.00336.00504.0045.700.2910.464GSH-Px/(U/mg prot)296.00330.00388.00549.00310.0048.700.474.001MDA/(μmol/g prot)7.076.424.204.043.810.880.0240.0203讨论3.1WEAO对小白鼠生长性能的影响Xing等[19]研究发现，饲粮中添加黑沙蒿多糖能够通过改善平均日增重和降低料重比。黑沙蒿水提物和多糖能够提高家禽的生长性能[20-21]。本试验中，小白鼠的平均日增重、平均日采食量和料重比未与饲粮WEAO添加量的增加呈现明显的变化规律，与Liu等[22]在家兔饲粮中添加艾蒿粉的试验结果相似。本试验中，小白鼠的表观消化率（CP、P和Ca）随饲粮WEAO添加量的增加表现出显著的剂量依赖效应，说明WEAO能够促进小白鼠的营养物质消化。马国强[23]也得出类似的研究结果，黑沙蒿及其多糖能够提高反刍动物绒山羊的养分消化率。具体的促生长机制需进一步研究，可能与WEAO改善机体的免疫和抗氧化功能有关。3.2WEAO对小白鼠免疫因子的影响蒿属植物提取物能够通过调节机体的免疫因子来提高其免疫功能[24-25]。本试验中，血清IgM、IgG和IL-1β的含量随饲粮WEAO添加量的增加呈现出正向的剂量依赖效应，与之前研究结果相似，岩蒿提取物通过TLR4信号通路调节IgG的抗原特异性抗体滴度和IL-4等免疫因子的含量，进而提高小鼠的免疫功能[26]。本课题组前期的研究结果显示，黑沙蒿水提物缓解了因脂多糖刺激引起的IL-2、IL-4和IgM含量下降，从而增强肉仔鸡的免疫力[27]。在肉仔鸡饲粮中添加黄花蒿水提物可通过调节机体的IL-1β和NF-κB/p65的基因水平，进而上调IgA、IgG、IgM和IL-4等的含量来改善机体的免疫状态[28]。上述结果可能与蒿属植物富含多糖、多酚和黄酮等多种生物活性物质有关。黑沙蒿水提物含有多酚、黄酮和多糖等生物活性成分[24]。Zhang等[29]发现，艾蒿多糖能够调节炎症的相关信号通路。因此，初步猜测黑沙蒿水提物对小白鼠的免疫调节活性可能与其富含的生物活性成分有关，具体的机制需进一步研究验证。3.3WEAO对小白鼠抗氧化指标的影响Zarezade等[30]在体外试验中发现，菊科蒿属植物龙蒿具有较强的DPPH和ABTS等自由基清除能力，且在体内试验中得出，口服该植物提取物能够显著提高大鼠的肝脏抗氧化酶活性（SOD、CAT、GST和GSH-Px），抑制MDA含量升高。本试验中，小白鼠血清、肝脏和肠组织中T-AOC、SOD和GSH-Px的活性随饲粮WEAO添加量的增加表现出明显的正向剂量依赖效应，而MDA的含量呈显著的降低效应。岳远西等[31]也得出类似的结果，在黑沙蒿水提物对肉仔鸡抗氧化功能的影响试验中发现，血清中T-AOC和CAT的活性随黑沙蒿水提物的增加呈显著的正向剂量依赖效应，同时MDA含量呈下降态势。本课题组在前期大鼠的试验中发现，饲粮黑沙蒿多糖可提高血清和肝脏中T-AOC、SOD、CAT和GSH-Px的活性，降低MDA的含量，且发现这些抗氧化酶活性与肝脏中SOD1、SOD2、CAT、GPx的基因表达水平呈正相关。黑沙蒿多糖具有较强的体外自由基清除能力（DPPH和ABTS），进入体内能够依然发挥清除自由基能力，从而提高抗氧化酶的活性和基因水平，抑制脂质过氧化水平[19]。此外，Guo等[16]报道，黄花蒿水提物能够提高肉仔鸡抗氧化酶活性和基因表达水平，并推测可能是通过Nrf2信号通路进行调控。因此，初步推测饲喂添加WEAO的饲粮后，小白鼠的抗氧化能力提高，可能是WEAO通过Nrf2/ARE调控通路降低机体的氧化损伤和增加肝脏和肠组织中抗氧化酶的基因和蛋白表达水平，进而调节抗氧化酶活性的升高，降低脂质过氧化程度[32]，但具体的机制需大量的研究去验证。4结论饲粮中添加WEAO能够提高小白鼠Ca和P的表观消化率；可调节小白鼠血清中免疫因子的含量，从而有助于调节机体免疫功能；提高血清和组织中抗氧化酶的活性，且能降低MDA的含量，从而提高机体的抗氧化能力。