中草药接种微生物进行发酵是当前的研究热点。中草药活性成分位于植物细胞壁内，只有破碎细胞壁，活性成分才能游离出来。使用传统的中草药粉碎工艺，中草药不能很好地被吸收利用，微生物发酵后的中草药细胞壁容易碎裂，中草药活性成分的吸收利用率提供，益生素代谢产生活性物质也有利于动物的生长[1]。发酵中草药能够提高畜禽的平均日增重，降低料重比，提高免疫功能，改善血清生化指标，有利于动物的生长[2-3]。试验以黄芪、蒲公英、艾叶、山楂、麦芽、甘草组成的中草药方剂经接种益生菌发酵制作成中草药饲料添加剂，进行饲喂肉兔试验，旨在研究发酵中草药对肉兔生长性能、免疫功能和屠宰性能的影响，为发酵中草药用于肉兔生产提供参考。1材料与方法1.1试验材料中草药组成（黄艾散）：黄芪、蒲公英、艾叶、山楂、麦芽、甘草。所用中草药原料均购自安徽亳州中药材大市场。原料干燥、无杂质、无霉变，经粉碎机粉碎70目过筛。试验用益生菌：嗜酸乳酸杆菌（YB106）、粪链球菌（YB93）、枯草杆菌（YB65）由商丘森奥达动物药业有限公司提供。辅助基质组成：大豆粕、小麦麸、次粉、红糖、水。发酵物组成比例：嗜酸乳酸杆菌2.0%、粪链球菌1.5%、枯草杆菌1.5%、中草药黄艾散20.0%、大豆粕19.0%、次粉22.0%、小麦麸5.0%、红糖4.0%、水26.0%。按常规厌氧发酵程序进行，由商丘森奥达动物药业有限公司代加工制作。1.2试验设计试验在商丘光磊养殖场进行。选择240只体况健康、体重接近、遗传背景相同的48日龄新西兰兔，采用单因素随机分组设计，分为4组，每组5个重复，每个重复12只兔。对照组饲喂基础日粮；普通组饲喂基础日粮+1%未发酵黄艾散；发酵1组饲喂基础日粮+1%发酵黄艾散；发酵2组饲喂基础日粮+2%发酵黄艾散。试验期35 d，其中正式试验期30 d。参照无公害食品肉兔饲养饲料使用准则（NY 5132—2002）制定新西兰兔饲料，并加工程成颗粒饲料，兔子颗粒饲料质量要符合该标准要求。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.10.001.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米29.00消化能/(MJ/kg)10.76小麦麸21.00粗蛋白/%17.01花生壳粉6.00中性洗涤纤维/%32.38苜蓿粉24.50酸性洗涤纤维/%20.15大豆粕12.00赖氨酸/%0.85菜籽粕3.00蛋氨酸/%0.42L-赖氨酸盐酸盐0.30钙/%1.64蛋氨酸0.15总磷/%0.61石粉0.45食盐0.40磷酸氢钙1.20豆油1.00预混料1.00注：预混料为每千克日粮提供：VA 3 100 IU、VD3 2 700 IU、VE 93 IU、Cu 12 mg、Fe 45 mg、Zn 63 mg、Mn 25 mg、Se 0.10 mg、Co 0.15 mg、I 0.30 mg。1.3饲养管理试验兔采用3层笼养，笼子上下错开呈半开放式，试验前20 d对兔舍、兔笼彻底消毒，试验开始后根据随机分组情况把试验兔置于相应的兔笼里，每天上料2次（8：00、17：00），乳头式饮水器昼夜不间断供水，自由采食、饮水。兔舍保持适宜的光照、温度和湿度，新西兰兔防疫和消毒按常规程序进行，试验兔日常管理符合无公害食品肉兔饲养管理准则（NY/T 5133—2002）的要求。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验开始当天7：00和试验结束后第2 d 7：00，对所有试验兔以重复组为批次空腹称重。每天记录上料量，在第2 d上料之前记录剩料量。根据记录数据以单只兔为单位计算平均日采食量、平均日增重和料重比。每天细心观察肉兔有无腹泻，根据腹泻情况对粪便进行评分，粪便正常记0分，轻微腹泻记1分，中度腹泻记2分，严重腹泻记3分。腹泻指数=粪便总评分/兔只总数 (1)1.4.2免疫功能试验结束后，每重复选取2只健康的肉兔空腹称重，所选肉兔公、母各半。肉兔心脏采血5 mL，放置离心管，静置2~3 h，2 500 r/min离心15 min，采集上清液，-20 ℃保存备用。肉兔采血后屠宰，剖腹开膛取出脾脏、胸腺，截取回肠末端，清洗肠内容物，剪取圆小囊，剔除胸腺、脾脏和圆小囊表面的脂肪，使用纸巾擦拭干净，脾脏、胸腺和圆小囊分别称量并记录。解冻血清至室温，采用酶联免疫吸附试验法测定血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）的含量，所用试剂盒购自南京建成生物工程研究所。免疫器官指数=器官重(g)/活体重(kg) (2)1.4.3屠宰性能试验结束后，每重复组抽取的2只肉兔心脏采血后按常规方法屠宰。参照田媛等[4]所述方法称量屠体重、胴体重，计算全净膛重、全净膛率、半净膛重和半净膛率。1.5数据统计与分析采用SPSS 19.0统计软件进行单因素方差分析，采用邓肯氏进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1发酵中草药对肉兔生长性能的影响（见表2）由表2可知，发酵1组和发酵2组肉兔的平均日增重较对照组分别提高11.14%和8.31%（P0.05），其中发酵1组平均日增重最高，发酵1组平均日增重较普通组提高5.56%（P0.05）。发酵1组肉兔的料重比较对照组降低5.67%（P0.05）。普通组、发酵1组和发酵2组肉兔的腹泻率较对照组分别降低47.19%、52.16%和61.79%（P0.05），发酵2组肉兔的腹泻率较普通组降低27.66%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.10.001.T002表2发酵中草药对肉兔生长性能的影响组别初重/g末重/g平均日采食量/g平均日增重/g料重比腹泻率/%对照组1 386.52±89.242 288.92±78.29100.67±3.1230.08±0.92a3.35±0.06b6.23±0.37c普通组1 393.27±76.532 343.37±101.20104.58±2.1931.67±1.59ab3.30±0.05ab3.29±0.45b发酵1组1 385.72±59.652 388.62±65.76105.37±3.6933.43±1.20c3.16±0.05a2.98±0.51ab发酵2组1 367.83±79.242 345.23±98.32106.54±5.8732.58±1.16bc3.27±0.04ab2.38±0.67a注：同列数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05），小写字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2发酵中草药对肉兔免疫功能的影响2.2.1发酵中草药对肉免疫器官指数的影响（见表3）由表3可知，肉兔添加中草药和发酵中草药后，肉兔免疫器官指数均有不同程度的提高。与对照组相比，普通组、发酵1组和发酵2组肉兔的胸腺指数分别提高12.04%、21.76%和24.07%（P0.05），发酵1组和发酵2组肉兔的胸腺指数较普通组分别提高8.68%和10.74%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.10.001.T003表3发酵中草药对肉兔免疫器官指数的影响组别胸腺指数脾脏指数圆小囊指数对照组2.16±0.18a0.61±0.091.12±0.12普通组2.42±0.21b0.63±0.111.15±0.09发酵1组2.63±0.24c0.65±0.081.21±0.10发酵2组2.68±0.15c0.68±0.121.19±0.80g/kg2.2.2发酵中草药对肉兔血清免疫球蛋白的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，普通组、发酵1组和发酵2组肉兔的血清IgG水平分别提高32.62%、44.70%和56.72%（P0.05），发酵2组肉兔的血清IgG水平较普通组提高18.17%（P0.05）。发酵1组、发酵2组肉兔的血清IgM水平较对照组分别提高30.72%和38.36%，较普通组分别提高22.01%和29.14%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.10.001.T004表4发酵中草药对肉兔血清免疫球蛋白的影响组别IgAIgGIgM对照组1 428.71±196.7318.30±4.16a6 453.11±870.46a普通组1 516.29±315.3724.27±4.18b6 913.72±753.29a发酵1组1 692.27±368.4526.48±3.56bc8 435.30±1 217.15b发酵2组1 612.31±357.6328.68±3.94c8 928.71±953.22bmg/L2.3发酵中草药对肉兔屠宰性能的影响（见表5）由表5可知，发酵1组和发酵2组肉兔全净膛重较对照组分别提高7.89%和6.07%（P0.05），发酵1组肉兔半净膛重较对照组提高11.12%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.10.001.T005表5发酵中草药对肉兔屠宰性能的影响组别活体重/g胴体重/g屠宰率/%全净膛重/g半净膛重/g全净膛率/%半净膛率/%对照组2 168.67±102.751 153.29±76.8253.18±2.291 012.51±41.36a1 087.82±83.53a46.69±1.7950.16±2.51普通组2 230.83±113.191 193.94±81.2753.52±3.071 042.72±54.71ab1 135.47±53.71ab46.74±2.3550.90±2.37发酵1组2 348.81±98.971 270.71±94.3054.10±2.181 092.39±47.93b1 209.73±92.16b46.53±2.2851.49±1.83发酵2组2 236.79±87.241 204.51±87.5653.85±2.561 073.98±62.23b1 140.86±53.72ab48.03±2.4351.03±2.293讨论3.1发酵中草药对肉兔生长性能的影响中草药发酵是微生物以中草药作为营养基进行的无氧代谢活动，微生物在代谢活动中具有羟基化、甲基化、酯化和氧化还原等作用[5]。中草药发酵可以将细胞壁内不易被吸收利用的活性成分游离出来，将大分子的物质分解成易于吸收利用的小分子营养物质，同时产生一些活性酶、未知促生长因子等活性物质。与未经发酵处理的中草药相比，发酵中草药及其在发酵过程中产生的活性物质起效更快、效果更强[6]。黄芪具有补中益气、增强机体免疫力的作用；蒲公英、艾叶具有清热解毒、杀菌消炎、防病治病、促进生长等功效。张凯等[7]研究表明，发酵黄芪提取物可以提高肉仔鸡的生长性能。姚东云[8]研究表明，蒲公英多糖能够提高蛋鸡的产蛋性能，改善血清生化指标。傅杰[9]研究表明，蒲公英发酵后抑菌活性和抗氧化能力增强，有利于机体的生长。左文山[10]研究表明，艾叶粉能够提高肉兔的生长性能。周丽萍等[11]研究表明，含有山楂、麦芽的复方健胃散能够促进肉鸡的生长。本试验发现，以上述中草药为原料制成的中草药添加剂经发酵后药效增强。与对照组相比，普通组、发酵1组和发酵2组肉兔的平均日增重显著提高，发酵组与未发酵组比较，发酵1组肉兔的平均日增重较普通组显著提高。试验结果与上述结果一致，表明本试验中的发酵中草药能够提高肉兔的生长性能，且比未发酵中草药作用效果更强。3.2发酵中草药对肉兔免疫功能的影响脾脏、胸腺和圆小囊是兔子重要的免疫器官。脾脏作为最大的淋巴器官能够产生大量的巨噬细胞和淋巴细胞，体液免疫和细胞免疫的调控主要在脾脏进行。胸腺是动物的中枢免疫器官，对T淋巴细胞的发育与成熟具有重要影响。圆小囊是一种兔子特有的免疫器官，属于肠相关淋巴组织，可以发挥消化道黏膜免疫作用[12]。免疫器官指数在一定程度上反映动物的免疫能力。肉兔血清中含有的免疫球蛋白主要有IgA、IgG和IgM。免疫球蛋白是机体体液免疫应答中主要的抗体活性物质。IgG在主动免疫应答反应中起主导作用，IgM对浆细胞产生抗体具有调控作用，IgA主要介导体液免疫应答[13]。免疫球蛋白IgA、IgG和IgM在动物机体体液免疫的特异性免疫中发挥重要作用，其含量升高表明机体免疫力增强[14]。唐诗博等[15]报道，添加蒲公英能够提高贵妃鸡的免疫功能。罗旋等[16]研究表明，艾叶多糖具有调节小鼠免疫功能的作用，对非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫均有一定的增强作用。郭小会[17]研究表明，含有山楂、麦芽的复方中草药制剂能够提高肉羊的免疫功能。黄文清[18]研究表明，甘草颗粒能够提高乌骨鸡雏鸡血清新城疫滴度和法氏囊指数，提高雏鸡的免疫功能。本试验结果表明，与对照组相比，发酵1组和发酵2组肉兔的血清IgG和IgM水平显著提高，脾脏指数显著提高，表明发酵薰艾散能够提高肉兔的免疫功能。3.3发酵中草药对肉兔屠宰性能的影响营养物质在畜禽不同部位的沉积和分布情况可以通过屠宰性能指标来反映。全净膛重、半净膛重、全净膛率和半净膛率是衡量畜禽屠宰性能的重要指标[19]。中草药添加剂能够提高畜禽的屠宰性能，提高畜禽的养殖效益。孙波等[20]研究表明，日粮里添加黄芪多糖可以提高肉仔鸡的屠宰性能。潘玉琪[21]研究表明，含有蒲公英活性成分的植物提取物能够提高肉鸡的屠宰率。吴华等[22]研究表明，添加甘草药渣能够提高放牧肉鸡的酮体品质。罗江宏[23]研究表明，含有山楂成分的健脾促长颗粒能够改善育肥猪的胴体性状。本试验结果表明，添加黄艾散后发酵组和发酵2组肉兔的全净膛重显著提高，可见黄艾散能够提高肉兔的屠宰性能。4结论在饲料里添加发酵黄艾散能够提高肉兔的生长性能、免疫功能和屠宰性能。综合考虑各项性能指标，饲料中添加1%发酵黄艾散较为理想。