犊牛机体各方面机能发育未健全，被动免疫能力低，极易发生腹泻[1]。腹泻可以导致犊牛生长发育缓慢，免疫能力下降，严重可导致犊牛死亡，是养牛产业中常见的疾病之一，给养殖者造成较大的经济损失。益生菌可以调节动物机体肠道菌群平衡，促进活性物质的增殖[2-3]。研究表明，在犊牛日粮中添加由枯草芽孢杆菌、乳酸菌和酵母菌配置的复合益生菌制剂可以显著提高犊牛的生长性能，显著降低犊牛腹泻率[4]。杨凯鑫[5]在犊牛日粮中加入益生菌制剂乳酸菌，发现添加益生菌制剂可以提高犊牛机体的免疫能力，降低犊牛的腹泻率。将枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和蛋白酶制作的复合益生菌制剂加入育肥羊日粮中可以提高育肥羊的生长性能、免疫力和抗氧化性能[6]。本研究将枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌复合益生菌制剂按照一定比例添加到犊牛日粮中，探究其对犊牛生长性能、腹泻率以及肠道发育的影响，以期找到最适添加量，为复合益生菌在反刍动物生产中更好的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）由北京美迪生医药科技有限公司提供。1.2试验设计试验选取48头2周龄生长发育良好的延边黄牛公犊，采用单因素设计，随机分成4组，每组3个重复，每重复4头犊牛。CK组犊牛饲喂基础日粮，CP-1组、CP-2组和CP-3组在基础日粮中分别添加1.0%、2.5%、5.0%的复合益生菌制剂。试验期67 d，其中预试期7 d，正式试验期60 d。将枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌按照1∶1比例制作菌粉，总活菌数为1×108 CFU/g。按比例添加到犊牛的代乳料中。3月龄开始饲喂开食料和羊草，试验期间自由采食。开食料组成见表1。代乳粉和开食料营养水平见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.004.T001表1开食料组成（风干基础）原料组成含量合计100.0玉米52.5麦麸13.5豆粕30.5预混料1.0磷酸氢钙1.5石粉1.0注：预混料为每千克开食料提供：VA 150 000 IU、VD3 8 000 IU、VE 70 mg、铁90 mg、铜12.5 mg、锰120 mg、锌105 mg、碘1.0 mg。%10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.004.T002表2饲粮营养水平（风干基础）项目代乳粉开食料干物质90.4485.89粗蛋白质20.9821.33粗灰分6.437.34粗脂肪14.503.45钙0.981.03磷0.450.71%1.3测定指标及方法1.3.1生长性能试验第1 d和第60 d空腹称重并记录体重；测量第60 d犊牛的体斜长、体高和胸围；每天8：00投喂日粮前记录剩余日粮量和投喂量。按照剩余料不超过饲喂料10%的原则调整饲喂量。计算犊牛的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）、体躯指数和体长指数。平均日增重(g/d)=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量(kg/d)=总采食量/(犊牛头数·试验天数)(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)体躯指数=(胸围/体斜长)100%(4)体长指数=(体斜长/体高)×100%(5)1.3.2腹泻率试验期间每天观察并记录犊牛的腹泻状况，计算犊牛的腹泻率。犊牛腹泻率=[(腹泻犊牛数×腹泻天数)/(总试验犊牛数×试验天数)]×100%(6)1.3.3肠道组织试验结束最后1 d，每组选取3头犊牛屠宰，取十二指肠近端、空肠和回肠中段端各1 cm，放入10%甲醛溶液中固定，脱水、透明、石蜡包埋、切片5 μm、苏木素-伊红（HE）染色、切片，用显微镜观察测量肠绒毛高度和隐窝深度并计算绒毛高度/隐窝深度。测定绒毛高度（villus height）和隐窝深度（crypt depth），计算绒毛高度/隐窝深度（V/C）。1.4数据统计与分析采用Excel 2010统计数据，使用SPSS 19.0进行数据处理与分析，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1复合益生菌对犊牛体尺指数的影响（见表3）由表3可知，添加复合益生菌制剂试验组犊牛胸围和体斜长均显著高于CK组（P0.05），CP-3组犊牛胸围和体斜长均显著高于CP-1组和CP-2组（P0.05）。CP-3组犊牛体躯指数显著高于其他各组（P0.05）。CP-3组犊牛体高显著高于CK组（P0.05）。CP-1组和CP-3组犊牛体长指数显著高于CK组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.004.T003表3复合益生菌对犊牛体尺指数的影响组别胸围/cm体斜长/cm体躯指数/%体高/cm体长指数/%CK组84.33±0.58a73.67±1.15a114.49±1.00a80.67±2.08a91.34±1.02aCP-1组87.33±0.58b75.67±0.58b115.42±0.83a81.33±1.15a93.04±0.62bCP-2组88.67±1.53b76.67±0.58b115.65±1.21a83.00±0.00ab92.37±0.70abCP-3组93.33±1.53c78.67±1.15c118.64±0.65b84.67±1.15b92.91±0.10b注：同列数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05），小写字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2复合益生菌对犊牛生长性能和腹泻率的影响（见表4）由表4可知，CP-3组犊牛终末体重最重，显著高于其他各组（P0.05）。CP-1组和CP-2组犊牛末重显著高于CK组（P0.05）。CP-3组犊牛平均日增重最高，较CK组犊牛平均日增重提高31.34%（P0.05）。添加复合益生菌试验组犊牛料重比显著低于CK组（P0.05）。CP-3组犊牛腹泻率最低，与CK组之间差异显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.004.T004表4复合益生菌对犊牛生长性能和腹泻率的影响组别初重/kg末重/kg平均日增重/(kg/d）平均日采食量/（kg/d）料重比腹泻率/%CK组43.62±0.6383.69±1.06a0.67±0.02a3.71±0.115.53±0.04c15.22±0.39cCP-1组43.47±0.8389.81±2.29b0.77±0.04b3.73±0.144.85±0.04b14.06±0.16bCP-2组44.72±0.9992.26±0.86b0.79±0.03b3.68±0.154.65±0.11b13.67±0.22bCP-3组44.62±0.8097.45±0.31c0.88±0.02c3.60±0.074.11±0.11a12.82±0.35a2.3复合益生菌对犊牛肠道发育的影响（见表5）由表5可知，CP-3组犊牛的十二指肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度显著高于CK组（P0.05），CP-1组和CP-2组犊牛十二指肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度显著高于CK组（P0.05）。添加益生菌试验组犊牛十二指肠隐窝深度均显著低于CK组（P0.05）。空肠方面，CP-3组犊牛的绒毛高度最高，CP-2组次之，较对照组分别提高7.58%和4.76%（P0.05）；添加益生菌试验组犊牛空肠隐窝深度均显著低于CK组（P0.05）；添加益生菌试验组犊牛空肠绒毛高度/隐窝深度均显著高于CK组（P0.05）。回肠方面，CP-3组犊牛的绒毛高度最高，CP-2组次之，较对照组分别提高8.15%和7.25%（P0.05）；添加益生菌试验组犊牛回肠隐窝深度均显著低于CK组（P0.05）；添加益生菌试验组犊牛回肠绒毛高度/隐窝深度均显著高于CK组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.004.T005表5复合益生菌对犊牛肠道发育的影响项目CK组CP-1组CP-2组CP-3组十二指肠绒毛高度443.33±2.89a454.67±4.16b455.33±4.51b476.67±6.11c隐窝深度254.33±1.53c245.00±2.17b239.00±1.20b226.00±5.57a绒毛高度/隐窝深度1.74±0.02a1.86±0.03b1.91±0.02c2.11±0.03d空肠绒毛高度426.67±3.51a435.33±3.06ab447.08±10.82bc459.01±8.54c隐窝深度308.67±1.53a297.67±3.51b284.00±3.61c271.33±4.51d绒毛高度/隐窝深度1.38±0.02a1.46±0.03b1.57±0.05c1.69±0.05d回肠绒毛高度441.67±1.53a465.30±5.00b473.67±2.89c477.67±2.52c隐窝深度340.80±2.00d322.20±7.81c312.33±3.21b291.33±1.53a绒毛高度/隐窝深度1.30±0.01a1.44±0.05b1.52±0.02c1.64±0.01d注：同行数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05），小写字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）。μm3讨论3.1复合益生菌对犊牛体尺指数影响体尺指数是动物机体生长发育的重要指标之一，能够反映犊牛的骨骼发育情况和生长性能[7]。王晓芳等[8]将益生菌加入3~4月龄荷斯坦公犊牛的日粮中，发现可以显著提高犊牛的体斜长增长量。符运勤等[9]在新生荷斯坦犊牛日粮中添加地衣芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌和植物乳酸杆菌的复合益生菌制剂，发现8周龄犊牛的体躯指数提高。研究表明，将乳酸菌添加到犊牛的日粮中，可以显著提高犊牛的胸围和体高[10]。本试验中，添加复合益生菌制剂试验组犊牛胸围和体斜长均较CK组差异显著，CP-3组犊牛体躯指数较CK组显著提高，CP-3组犊牛体高最高，较CK组犊牛体高差异显著，CP-3组犊牛体长指数较CK组差异显著，与上述研究结果基本一致。3.2复合益生菌对犊牛生长性能和腹泻率的影响乳杆菌是常见的益生菌之一，具有改善动物日粮适口性，降低胃肠pH值，提高免疫力的作用[11]。植物乳杆菌可以促进动物生长发育，改善动物机体健康和提高免疫能力[12]。枯草芽孢杆菌具有调节动物肠道微生物平衡，提高酶活性，提高机体免疫力等特性[13]。平均日增重和料重比可以反映犊牛生长性能、消化性能和瘤胃发酵[14]，也能反映犊牛对营养物质的消化、吸收和沉积[15]。研究表明，将枯草芽孢杆菌添加到多浪羊的日粮中，可以促进动物机体的生长发育，显著提高日增重和免疫能力[16]。朱五文等[17]将枯草芽孢杆菌添加到断奶仔猪的日粮中，发现添加枯草芽孢杆菌可以提高仔猪的平均日增重和末重。将植物乳杆菌饲喂断奶仔猪可以显著提高断奶仔猪的平均日增重[18]。何韵秋等[19]发现，在日粮中添加复合益生菌可以提高生长期湖羊平均日增重，降低料重比。本试验中，在日粮中添加益生菌组犊牛的末重和平均日增重较对照组均差异显著，与上述研究结果一致，可能因为在犊牛日粮中添加植物乳酸菌和枯草芽孢杆菌促进犊牛对营养物质的吸收，也可能因为添加复合益生菌制剂产生的代谢产物起到补充调节作用。研究表明，将枯草芽孢杆菌活菌制剂加入腹泻的反刍动物日粮中可以治疗动物的腹泻[20]。陈国福等[21]在断奶仔猪日粮中加入复合益生菌制剂（包括植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母和扣囊复膜孢酵母，有效活菌数为9.8×109 CFU/g），发现断奶仔猪的平均日增重显著提高，料重比和腹泻率显著降低。张燕等[22]在泌乳期德州驴驹日粮中添加复合益生菌，发现驴驹体重显著提高，腹泻率降低。本试验中，CP-3组犊牛腹泻率最低，添加益生菌试验组犊牛腹泻率较CK组犊牛腹泻率差异显著，说明添加植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌可以显著降低犊牛的腹泻率，与上述试验结果一致。可能的原因是加入植物乳杆菌会在犊牛体内产生乳酸，降低肠道pH值，抑制有害微生物。3.3复合益生菌对犊牛肠道发育的影响Pluske等[23]发现，小肠在犊牛的消化吸收中起到重要作用，小肠吸收营养物质的能力主要受肠道绒毛高度和隐窝深度的影响。枯草芽孢杆菌可以促进幼龄动物肠道绒毛的生长，调节动物机体肠道菌群平衡，改善动物肠道黏膜结构，促进动物机体的生长发育[24]。齐博等[25]将枯草芽孢杆菌添加到肉仔鸡的日粮中，发现添加枯草芽孢杆菌可以促进肉仔鸡十二指肠和空肠绒毛的生长，促进动物对营养成分的消化吸收。县怡涵等[26]在仔猪日粮中加入复合益生菌（植物乳杆菌和干酪乳杆菌），发现添加复合益生菌可以促进仔猪空肠和回肠绒毛发育。李玲茜等[27]在蛋雏鸡日粮中添加复合益生菌（海洋红酵母菌和枯草芽孢杆菌），发现添加复合益生菌可以显著提高机体的平均日增重，显著降低耗料增重比，显著提高十二指肠及空肠的绒毛长度。本试验中，添加复合益生菌试验组犊牛的十二指肠、空肠和回肠的绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度较CK组犊牛均显著提高，与上述试验结果一致，说明在日粮中添加枯草芽孢杆菌和植物乳酸菌可以促进犊牛的肠道发育，可能因为枯草芽孢杆菌和植物乳酸菌可以促进机体对营养成分的吸收能力和犊牛的肠道发育。4结论在犊牛日粮中添加枯草芽孢杆菌和植物乳酸菌制成的复合益生菌制剂可以提高犊牛的平均日增重和体尺指数，降低和腹泻率，促进犊牛肠道发育，且添加5.0%复合益生菌组效果较好。