我国是世界上重要的大蒜生产国之一，每年大蒜种植面积达66.67万hm2[1-2]。山东省是我国大蒜种植大省。2019年山东省大蒜主产区累计种植面积15.64万hm2，年产量超过200万t[3]。大蒜中含有多种活性成分，具有抗菌消炎[4]、抗氧化[5]、抗癌[6]、降低胆固醇[7]、增强机体免疫力[8]等作用。大蒜皮作为大蒜的主要副产物，资源丰富，其利用率低。研究发现，大蒜皮提取物对金黄色葡萄球菌、变异链球菌、大肠杆菌和白色念珠菌等乳腺炎致病菌的生长有极显著的抑制作用[9]。大蒜皮可改善非酒精性脂肪肝大鼠氧化应激和肝细胞凋亡[10]。蒜皮中的肉桂酰胺类化合物是理想的酪氨酸酶抑制剂，对老年痴呆模型大鼠具有较好的防治作用[11-12]。大蒜皮中的总黄酮具有良好的清除超氧离子和羟基自由基的能力[13]。将大蒜皮添加到反刍动物粗饲料中可提高动物生产性能、降血脂、促进生长和抗氧化等[2-3]。大蒜皮添加到肉羊饲料中可提高肉羊生产性能，促进机体合成代谢，降低分解代谢[14]。目前，大蒜皮在畜牧业中作为粗饲料使用。但是，大蒜皮的添加比例及其对动物机体抗氧化及免疫水平的影响等研究鲜见报道。因此，本研究以沂蒙黑山羊为研究对象，探讨不同比例大蒜皮对其生化指标、免疫力及抗氧化功能的影响，为探明大蒜皮的最佳添加比例以及大蒜皮在规模化羊场的高效利用提供参考。1材料与方法1.1试验设计选取24只4月龄左右体重相近、健康的沂蒙黑山羊，随机分为4组，分别是大蒜皮0%（对照组）、5%、10%和15%添加组，每组6只（公羊3只，母羊3只）。试验羊精料组成及营养水平见表1，粗饲料组成及营养水平见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.001.T001表1精料组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100玉米51代谢能/(MJ/kg)10.64豆粕27粗蛋白/%21.97麸皮15粗脂肪/%8.14食盐1粗灰分/%3.31小苏打1中性洗涤纤维/%28.34预混料5酸性洗涤纤维/%5.42钙/%1.28磷/%0.46注：1.预混料为每千克饲粮提供：VA 1 367 IU、VD 194 IU、VE 15 IU、铁74 mg、锌46.3 mg、锰36.5 mg、铜17.0 mg、碘1.5 mg、硒0.3 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.001.T002表2粗饲料组成及营养水平组别原料含量/%粗蛋白粗脂肪粗灰分中性洗涤纤维酸性洗涤纤维钙磷对照组大蒜皮09.808.589.0441.8628.381.860.13花生秧1005%组大蒜皮59.578.628.9742.3328.891.960.13花生秧9510%组大蒜皮109.338.668.9042.8129.402.060.12花生秧9015%组大蒜皮159.108.708.8343.2829.922.160.12花生秧85%1.2饲养管理试验羊采用全舍饲饲养管理。试验开始前，做好圈舍清理和疫病防治等工作。试验设10 d预试期，预试期内分组并佩戴耳标。试验羊采用分圈饲养的方式，6只/圈，圈舍面积为24 m2/圈，每天饲喂2次（7：00、17：00），先精后粗。在饲喂同等精料补充料的条件下，饲喂大蒜皮花生秧混合料，羊只自由采食粗料，并自由饮水。每天下午饲喂前进行1次圈舍清扫，每周进行1次消毒。1.3测定指标及方法1.3.1血清生化指标在试验前和试验后30 d采集羔羊血液，分离血清，采用Elisa法测定试验前后羔羊血清中总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血清尿素氮（BUN）和类胰岛素样生长因子-1（IGF-1）水平。试剂盒购自上海裕霞生物科技有限公司。1.3.2血清抗氧化指标采用生化法测定试验前后羔羊血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、还原性谷胱甘肽（GSH）和总抗氧化能力（T-AOC）。试剂盒购自上海裕霞生物科技有限公司。1.3.3血清免疫指标采用ELISA法测定试验前后羔羊血清中补体C3、补体C4和免疫球蛋白（IgG、IgM）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）和白介素-6（IL-6）。试剂盒购自上海裕霞生物科技有限公司。1.4数据统计与分析采用Excel 2006对数据进行整理，通过SPSS 16.0 Independent Samples T Test检验组内试验前后差异显著性，采用One-way ANOVA检验组间差异显著性，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1大蒜皮对沂蒙黑山羊血清生化指标的影响（见表3）由表3可知，5%、10%和15%大蒜皮能够增加羔羊血清总蛋白和白蛋白水平，降低血清尿素氮水平。其中，5%大蒜皮能够显著增加羔羊血清总蛋白和白蛋白水平（P0.05），10%大蒜皮能够显著增加羔羊血清白蛋白水平（P0.05），15%大蒜皮能够显著增加羔羊血清白蛋白水平，降低血清尿素氮水平（P0.05）。组间比较发现，5%和15%大蒜皮组羔羊血清白蛋白水平显著高于对照组（P0.05），5%和10%大蒜皮组羔羊血清尿素氮水平显著高于对照组和15%大蒜皮组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.001.T003表3大蒜皮对沂蒙黑山羊血清生化指标的影响组别总蛋白/(g/L)白蛋白/(g/L)类胰岛素生长因子/(μg/L)血清尿素氮/(mmol/L)0 d30 d0 d30 d0 d30 d0 d30 d对照组39.77±1.6136.05±1.6238.34±0.95A30.64±1.63Bb164.94±18.26195.88±15.7913.60±1.12A9.20±0.71Bb5%组36.57±1.01B41.24±1.36A28.90±0.87B36.40±1.34Aa168.81±15.82153.18±15.7016.28±0.9914.09±0.78a10%组35.96±1.1540.49±2.1929.72±0.76B33.25±0.67Aab173.44±25.32188.26±19.6515.74±0.6613.48±0.89a15%组36.85±1.7637.46±1.3031.89±1.23B35.64±0.40Aa137.85±13.59165.77±18.2914.91±0.75A10.03±0.94Bb注：不同大写字母表示组内第0 d和第30 d之间差异显著（P0.05），不同小写字母表示第30 d组间差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2大蒜皮对沂蒙黑山羊血清免疫指标的影响（见表4）由表4可知，15%大蒜皮可显著增加补体C3水平，且显著高于5%大蒜皮（P0.05）；15%大蒜皮可显著增加补体C4水平，且显著高于5%和10%大蒜皮（P0.05）；5%大蒜皮可以显著增加羔羊血清IgG水平（P0.05）；5%、10%和15%大蒜皮均可显著增加羔羊血清IgM水平（P0.05），其中15%大蒜皮组羔羊血清IgM水平显著高于其他各组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.001.T004表4大蒜皮对沂蒙黑山羊血清免疫指标的影响组别补体C3/(mg/L)补体C4/(mg/L)IgG/(g/L)IgM/(mg/L)0 d30 d0 d30 d0 d30 d0 d30 d对照组42.26±3.0150.44±2.84ab13.80±0.7814.97±0.64ab5.74±0.32B7.30±0.38Aa1 180.70±129.991 326.70±63.98b5%33.59±2.4841.34±3.52b10.77±0.8112.72±0.92c5.55±0.29B6.57±0.32Aab963.62±94.27B1 316.50±87.04Ab10%40.88±3.1547.37±3.18ab11.32±0.5213.00±0.55bc5.51±0.365.72±0.22b929.34±96.62B1 332.60±61.70Ab15%37.49±2.33B53.95±3.37Aa9.90±0.91B15.58±0.63Aa5.71±0.256.47±0.29ab851.79±61.79B1 738.30±82.83Aa2.3大蒜皮对沂蒙黑山羊血清免疫细胞因子的影响（见表5）由表5可知，10%大蒜皮可显著降低羔羊血清TNF-α水平（P0.05）；10%和15%大蒜皮可显著降低羔羊血清IL-1β水平（P0.05）；5%大蒜皮可显著增加羔羊血清IL-6水平（P0.05），15%大蒜皮可显著降低羔羊血清IL-6水平（P0.05），且15%大蒜皮组IL-6水平显著低于5%和10%大蒜皮组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.001.T005表5大蒜皮对沂蒙黑山羊免疫细胞因子的影响组别TNF-αIL-1βIL-60 d30 d0 d30 d0d30 d对照组144.81±13.71139.91±7.5473.25±6.5174.12±7.16116.46±6.3091.34±9.57b5%组152.34±8.31136.21±5.2982.25±6.4180.74±4.93100.24±7.55B127.70±7.80Aa10%组165.24±9.16A130.70±8.54B86.17±5.12A68.23±5.38B103.74±10.45126.53±7.51a15%组148.93±6.51128.27±9.9087.34±4.99A64.40±5.78B119.33±10.32A87.22±7.35Bbng/L2.4大蒜皮对沂蒙黑山羊羔羊抗氧化指标的影响（见表6）由表6可知，10%和15%大蒜皮可显著增加羔羊血清T-AOC（P0.05），但组间差异不显著（P0.05）；5%、10%和15%大蒜皮可显著增加羔羊血清SOD活性（P0.05），且15%大蒜皮组SOD活性显著高于其他各组（P0.05）；10%和15%大蒜皮可显著降低羔羊血清MDA含量（P0.05），但组间差异不显著（P0.05）；10%和15%大蒜皮可显著增加羔羊血清GSH活性（P0.05），且15%大蒜皮组羔羊血清GSH活性显著高于5%大蒜皮组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.08.001.T006表6大蒜皮对沂蒙黑山羊抗氧化功能的影响组别T-AOC/(mmol/L)SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)GSH/(mmol/L)0 d30 d0 d30 d0 d30 d0 d30 d对照组0.52±0.03B0.70±0.05Aa72.06±7.5980.68±4.85b4.34±0.29A2.01±0.52B0.16±0.010.20±0.02ab5%组0.49±0.070.52±0.02b58.25±6.27B77.44±5.21Ab4.89±0.433.58±0.590.15±0.020.18±0.02b10%组0.50±0.04B0.76±0.06Aa50.93±4.11B70.02±4.44Ab5.57±0.41A2.99±0.73B0.15±0.01B0.20±0.01Aab15%组0.41±0.02B0.77±0.04Aa56.16±2.28B94.35±1.69Aa5.25±0.51A1.95±0.53B0.15±0.02B0.23±0.01Aa3讨论3.1大蒜皮对羔羊血清生化指标的影响血清生化指标是了解动物机体健康状况的有效指标，能够反映动物对饲粮的利用、营养物质的吸收和代谢等[15-16]。血清总蛋白和白蛋白与动物机体蛋白质合成与代谢密切相关。血清总蛋白由肝脏合成，其含量高低直接影响动物生长发育及生理状态。血清白蛋白是衡量肝脏功能和机体营养状况的重要指标[17]。本研究发现，5%大蒜皮可显著增加羔羊体内总蛋白水平，5%、10%和15%大蒜皮均可增加羔羊体内白蛋白水平，说明大蒜皮可增强羔羊肝脏的合成功能，促进蛋白质的吸收和代谢，增加蛋白质在体内的沉积，与王顺伟等[14]研究结果一致。Amin等[18]发现，大蒜浸膏对羔羊血清总蛋白和白蛋白水平无显著影响。刘敏等[19]发现，大蒜素对哈萨克羊血清总蛋白和白蛋白水平无显著影响，与本研究结果不一致，可能因为大蒜皮与大蒜浸膏或大蒜素有效成分的不同。血清尿素氮是反映动物机体含氮物质代谢情况的有效指标，也是反应饲粮蛋白质利用率的指标之一[20]。本试验发现，15%大蒜皮可显著降低羔羊血清尿素氮水平。王顺伟等[14]在杜蒙杂交羊的研究中得到同样的结论。因此，5%、10%和15%大蒜皮对羔羊血清生化指标均有积极的影响。大蒜皮可能通过加强羔羊体内蛋白质代谢，提高氨基酸利用率，从而改善羔羊生理生化过程，促进其生长。3.2大蒜皮对羔羊免疫指标的影响免疫系统可防御外来抗原的侵袭，确保在免疫监视过程中对自身抗原的激活[21]。外周血液中含有大量的IgA、IgG和IgM，3种免疫球蛋白能清除体内的病原体和有毒抗原，在先天免疫应答中发挥重要作用[22]。本研究发现，5%大蒜皮可显著增加羔羊血清IgG水平，5%、10%和15%大蒜皮可显著增加羔羊血清IgM水平，说明大蒜皮可通过提高羔羊免疫球蛋白水平增强其免疫力。C3、C4是补体系统的固有成分，在机体防御过程中可调节吞噬细胞清除病原微生物，提高机体的免疫力[23]。本研究发现，15%大蒜皮可显著增加羔羊血清中补体C3和C4的水平，且显著优于5%和10%的大蒜皮的效果，说明15%大蒜皮可以增加羔羊体内补体C3和C4水平来提高羔羊的免疫力。动物先天免疫应答与炎症反应密切相关，炎症反应是动物机体对外界刺激做出应答的关键过程，主要由细胞因子介导[24]。TNF-α、IL-6、IL-1β是机体重要的促炎因子，能诱导炎症的发生，降低机体免疫力[25-26]。本研究发现，10%大蒜皮可显著降低羔羊血清TNF-α、IL-1β水平，15%大蒜皮可显著降低羔羊血清IL-1β、IL-6的水平，表明大蒜皮可通过降低机体免疫器官促炎因子的分泌来缓解炎症反应，提高机体免疫力。3.3大蒜皮对羔羊抗氧化功能的影响动物机体的抗氧化水平可以反映机体的健康状况。在正常情况下，体内抗氧化酶可以清除氧化代谢产物，而当其氧化能力下降时，过量的氧自由基与不饱和脂肪酸发生脂质过氧化，会损伤细胞膜及细胞内的大分子蛋白和核酸，对动物造成损伤[27-28]。T-AOC是机体抗氧化性能的综合性指标，与自由基清除能力相关，是机体抗氧化能力的标志[29]。本研究发现，10%和15%大蒜皮可显著增加羔羊体内T-AOC，且组间差异不显著，而5%大蒜皮对羔羊体内T-AOC无显著影响。SOD是机体清除氧自由基的重要抗氧化物酶。脂质过氧化产醛基、酮基、羟基、氢氧基等。MDA含量反映机体内脂质过氧化的程度，间接反映细胞损伤程度[30]。GSH是一种重要的抗氧化剂，由于其巯基与多种亲电自由基和代谢物结合，是细胞内抗氧化应激保护机制的重要组成部分[31]。本研究发现，添加大蒜皮显著增加羔羊血清T-AOC、SOD和GSH活性，显著降低MDA含量，说明大蒜皮可通过增加羔羊体内抗氧化酶的含量，保护宿主细胞免受自由基的损伤，降低脂质过氧化程度，发挥其抗氧化能力。本研究结果与李亚利等研究结果一致[32]。植物源性提取物的抗氧化活性大多来自酚类化合物，主要因为它们的氧化还原性质使其可以作为还原剂、氢供体和单态氧猝灭剂发挥抗氧化作用[33]，大蒜提取物中的酚类化合物达22.8 mg GAE/100 mg[34]，大蒜皮的抗氧化功能是否也来源于酚类化合物以及大蒜皮中酚类化合物的含量仍需进一步研究。4结论在沂蒙黑山羊粗饲料中添加大蒜皮可提高羔羊体内蛋白质利用率，改善机体生理生化过程，促进羔羊生长，且增强其免疫力和抗氧化能力。15%大蒜皮添加量效果优于5%和10%大蒜皮添加量。