随着养殖业迅速发展，我国饲料资源短缺的问题愈发突出。饲料资源缺乏已成为制约养殖业发展的一大挑战。非常规饲料的开发是解决这一难题的有效途径。酒糟是一类重要的非常规饲料资源，酒糟产量大、营养物质丰富，具有良好的饲用价值。据报道，2019年酒糟产量达5 640万t[1]。目前，酒糟饲料化利用主要有鲜酒糟直接饲用和微生物发酵后饲用等方式，但鲜酒糟含水量高、酸度大，极易腐败变质，直接饲喂会造成资源浪费[2]。鲜酒糟直接饲喂鲜酒糟易导致牲畜出现瘤胃酸中毒、酒精中毒和便秘等症状。因此，鲜酒糟在牲畜饲粮中的应用较为局限。鲜酒糟经微生物发酵后可以有效改善其营养特性，延长保质期，提高适用范围[3]。以酒糟为基质生产动物饲料主要以酵母发酵酒糟为主[4-5]，缺乏其他益生菌混合发酵酒糟生产动物活菌饲料方面的研究及应用。在长期的科学研究中，发现很多重要的生化反应单靠一种菌株是不能完成的[6]。复合菌协同共生、优势互补，应用效果比单一菌剂更佳[7]。因此，本试验通过利用《饲料添加剂品种目录（2013）》中允许添加的安全菌株枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、酿酒酵母和植物乳杆菌进行组配发酵酒糟制得的复合菌剂添加到肉鸡日粮中，研究其对肉鸡生长性能、屠宰性能、免疫器官指数、血清生化指标的影响，旨在为农业加工剩余的副产物的应用和推广提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验所用酒糟基复合益生菌剂为实验室研发，酿酒酵母（CICC1355）、枯草样芽孢杆菌（CGMCC17305）、植物乳杆菌（HZLp-005）和凝结芽孢杆菌（CGMCC9951）均为实验室菌种。发酵工艺为：86.4%酒糟、10%玉米粉、2.6%尿素和1%磷酸二氢钾，加水至物料含水量63%，pH值调至7，121 ℃灭菌20 min，冷却，接种凝结芽孢杆菌和酿酒酵母于35 ℃培养间中发酵2 d，再接种植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌发酵3 d，总接种量10%（细菌密度为108 CFU/mL）（接种比例为1∶1∶1∶1）。发酵后经测定各菌株活菌数≥1×109 CFU/g（含水量55%~60%）。爱拔益加（AA）肉鸡购自森都育种厂。1.2试验设计选取体重基本一致的1日龄爱拔益加（AA）肉仔鸡90只，随机分成3个组，每组3个重复，每个重复10只鸡，公、母各5只。对照组肉鸡饲喂基础日粮，Ⅰ组肉鸡饲喂基础日粮掺拌5%未发酵酒糟，Ⅱ组肉鸡饲喂基础日粮掺拌5%酒糟基复合益生菌剂。基础日粮组成及营养水平见表1。试验期49 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.09.013.T001表1基础日粮组成及营养水平（干物质）项目1~21日龄22~49日龄原料组成/%玉米58.7064.30豆粕32.0026.00棉籽粕2.003.00鱼粉3.002.50磷酸氢钙1.801.60石粉1.201.30氯化钠0.300.30预混料1.001.00合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.6313.12粗蛋白质/%21.1418.63粗灰分/%5.934.18粗纤维/%3.804.30钙/%0.950.87有效磷/%0.680.63赖氨酸/%0.450.35蛋氨酸/%0.730.56苏氨酸/%0.710.67色氨酸/%0.220.20注：预混料购自河南金华威饲料有限公司。1.3饲养管理试验鸡采用单层笼养方式，饲喂颗粒状饲料，自由采食和饮水。试验期间，1~3 d温度控制在35 ℃，4~7 d温度控制在33 ℃，此后每周降2 ℃，降到26 ℃时恒定，1~3 d全天光照，此后每天23 h光照，相对湿度保持在55%~60%。试验鸡房做好卫生处理，定时通风。饲养和免疫程序遵循常规饲养和免疫标准进行。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验第21、49 d早晨以重复为单位称量空腹12 h的鸡仔，记录体重和试验期间采食总量，计算试验前期（1~21日龄）、后期（22~49日龄）和全期（1~49日龄）的平均日增重（ADG，g/d）、平均日采食量（ADFI，g/d）和料重比（F/G）。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/(试验天数×鸡数)(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2屠宰性能结束日12 h前停止饲喂，每个重复中随机抽取接近平均体重的鸡仔颈部放血处死。参照国家家禽育种委员会制定的《家禽生产性能指标名称和计算方法》和李云龙等[8]所用方法测定活体重、屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重、腿肌重。屠宰率=屠体重/活体重×100%(4)全净膛率=全净膛重/活体重×100%(5)半净膛率=半净膛重/活体重×100%(6)胸肌率=两侧胸肌重/全净膛重×100%(7)腿肌率=两侧腿肌重/全净膛重×100%(8)1.4.3免疫器官指数试验结束日，从每个重复中随机抽取1只禁食12 h的鸡仔称重，颈动脉放血处死后，立即无菌解剖并分离肝脏、脾脏、胸腺和法氏囊称鲜重，计算免疫器官指数。免疫器官指数(mg/g)=免疫器官重量/活体重(9)1.4.4血清生化指标21、49日龄时，每个重复随机选取1只接近平均体重的试验鸡，翅下颈静脉采血1 mL，1 000 r/min离心10 min，严格按照试剂盒（深圳市库贝尔生物科技股份有限公司）的方法测定血清总胆固醇（TCHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿酸（UA）、葡萄糖（GLU）含量和谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）活性，其中球蛋白（GLB）含量为总蛋白减去白蛋白衡量。1.5数据统计与分析利用Excel 2010软件对原始数据进行处理，采用SPSS 19.0软件对数据进行单因素方差分析，使用LSD法进行组间多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，0.05≤P0.10表示有降低或提高趋势。2结果与分析2.1酒糟基复合益生菌剂对肉鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组和Ⅰ组相比，Ⅱ组肉鸡22~49日龄平均日增重、平均日采食量显著升高（P0.05）。1~49日龄肉鸡全期的平均日增重显著升高（P0.05），料重比显著降低（P0.05），49日龄体重显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.09.013.T002表2酒糟基复合益生菌剂对肉鸡生长性能的影响日龄/d项目对照组Ⅰ组Ⅱ组P值1体重/g40.47±0.4040.27±0.3140.53±0.310.63221体重/g259.16±16.21247.66±9.04268.53±14.750.25249体重/g1 024.00±51.8b1 037.10±37.41b1 160.27±22.48a0.0101~21平均日增重/g10.41±0.759.88±0.4210.86±0.680.245平均日采食量/g24.43±0.1524.34±1.3223.81±2.350.873料重比2.35±0.172.46±0.092.19±0.100.09422~49平均日增重/g27.32±1.49b28.19±1.33b31.85±0.40a0.007平均日采食量/g82.01±1.32b84.22±0.76b88.18±2.02a0.006料重比3.01±0.122.99±0.142.77±0.040.0631~49平均日增重/g20.07±1.05b20.34±0.77b22.86±0.45a0.009平均日采食量/g45.62±0.6246.52±0.8748.00±1.870.138料重比2.28±0.10a2.29±0.07a2.10±0.04b0.031注：同行数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05），不同小写字母表示差异显著（P0.05）；下表同。2.2酒糟基复合益生菌剂对肉鸡屠宰性能的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，Ⅱ组肉鸡的半净膛率显著升高（P0.05）。与对照组和Ⅰ组相比，Ⅱ组肉鸡的全净膛率、胸肌率显著升高（P0.05）。与对照组相比，Ⅰ组和Ⅱ组的肉鸡腿肌率存在升高的趋势（0.05≤P0.10）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.09.013.T003表3酒糟基复合益生菌剂对肉鸡屠宰性能的影响项目对照组Ⅰ组Ⅱ组P值屠宰率91.37±1.5892.49±0.2192.98±0.790.226半净膛率84.69±1.40b86.16±0.37ab87.60±1.19a0.045全净膛率66.99±0.56b68.21±0.62b70.78±1.84a0.019腿肌率20.98±0.7322.11±1.0123.49±1.250.063胸肌率18.28±0.29b18.41±0.53b20.38±0.19a0.001%2.3酒糟基复合益生菌剂对肉鸡免疫器官指数的影响（见表4）由表4可知，与对照组和Ⅰ组相比，Ⅱ组肉鸡的脾脏指数显著升高（P0.05）。与对照组相比，Ⅰ组和Ⅱ组肉鸡的肝脏指数显著升高（P0.05）。与对照组和Ⅱ组相比，Ⅰ组肉鸡胸腺指数显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.09.013.T004表4酒糟基复合益生菌剂对肉鸡免疫器官指数的影响项目对照组Ⅰ组Ⅱ组P值脾脏0.89±0.04b0.81±0.08b1.11±0.04a0.001肝脏21.08±0.72b23.18±1.24a24.15±0.61a0.015法式囊2.21±0.142.48±0.652.67±0.140.414胸腺2.36±0.05a2.00±0.18b2.51±0.12a0.008mg/g2.4酒糟基复合益生菌剂对21和49日龄肉鸡血清生化指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组和Ⅰ组相比，Ⅱ组21日龄肉鸡血清中TP、ALB含量显著升高（P0.05），ALT水平存在降低趋势（0.05≤P0.10）；Ⅱ组49日龄肉鸡血清中ALT水平显著降低（P0.05）。酒糟基复合益生菌剂对其他血清生化指标未产生显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.09.013.T005表5酒糟基复合益生菌剂对21和49日龄肉鸡血清生化指标的影响项目21日龄49日龄对照组Ⅰ组Ⅱ组P值对照组Ⅰ组Ⅱ组P值ALT/(U/L)19.00±7.2114.67±3.068.33±1.520.07618.00±3.61a16.33±2.08a10.33±1.53b0.024ALP/(U/L)2 620±12192 439±10263 356±7710.5432 619±6232 534±4823 247±6140.324HDL-C/(mmol/L)2.59±0.502.44±0.233.08±0.320.1643.12±0.302.79±0.233.20±0.380.307LDL-C/(mmol/L)2.99±0.242.83±0.532.93±0.280.8683.29±0.303.03±0.372.73±0.430.258AST/(U/L)322.00±83.14245.67±24.83247.00±5.570.184248.33±13.61229.00±26.85226.67±45.620.671TG/(mmol/L)1.57±0.381.47±0.201.43±0.200.8331.40±0.361.47±0.061.50±0.400.924TP/(g/L)25.33±0.58b24.67±0.58b27.00±1.00a0.02124.00±1.0024.33±2.5125.33±1.530.659ALB/(g/L)12.67±0.58b12.33±1.15b15.00±1.00a0.02611.33±0.5812.00±1.0013.67±1.150.055TCHO/(mmol/L)4.92±0.224.62±0.324.58±0.360.3835.03±0.395.10±0.704.81±0.180.747GLU/(mmol/L)16.13±0.9115.53±0.9515.67±0.990.73016.60±0.3915.33±0.6815.90±0.750.131UA/(μmol/L)303.00±34.18258.00±28.69230.67±23.860.059325.00±94.82288.00±52.60297.67±77.750.835GLB/(g/L)12.67±0.5812.33±0.5812.00±1.000.57912.67±1.1512.33±1.5211.67±0.580.5873讨论3.1酒糟基复合益生菌剂对肉鸡生长性能的影响薛同宣[9]研究表明，采用枯草芽孢杆菌制剂饲喂肉鹅能够显著提高肉鹅日增重，降低料重比。胡晓霞等[10]研究表明，采用复合益生菌剂饲喂生长育肥猪能够改善育肥猪生长性能，提高经济效益。郭王勇等[11]研究表明，采用复合益生菌剂饲喂肉鸡能够显著提高肉鸡日增重，降低料重比。本试验结果表明，空白对照组和日粮中掺拌未发酵酒糟组之间不存在显著差异。相比这两组，酒糟基复合益生菌剂组能够显著提高肉鸡平均日增重和平均日采食量，显著降低料重比。这是因为益生菌在生长代谢过程中会产生较高活性的酶类，如植酸酶、蛋白酶、几丁质酶、果胶酶、脂肪酶、纤维素酶和β-葡聚糖酶等[12-14]。这些酶可以将一些不易消化的大分子物降解质，促进机体对营养成分的消化吸收，提高饲料转化率，从而增强牲畜的生产性能。同时，益生菌会产生多种营养物质，如B族维生素、叶酸、有机酸、维生素C、多肽、氨基酸等益生物质，对饲料中微量元素、矿物质有促进吸收作用，从而提高牲畜对蛋白和钙磷等物质的利用率。3.2酒糟基复合益生菌剂对肉鸡屠宰性能的影响屠宰率、半净膛率、全净膛率、腿肌率和胸肌率是评价肉用动物产肉性能的重要指标，可以反映营养物在不同组织或同一组织不同位置沉积量的差异。陈晓帅等[15]研究表明，采用粪肠球菌和乳双歧杆菌复合剂饲喂乳鸽能显著提高乳鸽的屠宰率、半净膛率和全净膛率。黄金华等[16]研究表明，采用复合益生菌剂饲喂肉鸡可以显著提高肉鸡的半净膛和全净膛率。本试验结果表明，相比空白对照组，酒糟基复合益生菌剂组的半净膛率显著提高，且酒糟基复合益生菌剂组的全净膛率、胸肌率均显著高于空白对照组和日粮中掺拌未发酵酒糟组；日粮中掺拌未发酵酒糟组除腿肌率和酒糟基复合益生菌剂组有增高趋势外，其他与空白对照组无显著差异。上述结果表明，饲喂酒糟基复合益生菌剂能够提高禽类生长性能，益生菌所分泌的物质也会使营养物质在体内沉积水平得到有效提高，从而提高屠宰性能。3.3酒糟基复合益生菌剂对肉鸡免疫器官指数的影响免疫器官作为免疫细胞增殖发育和分化的场所，免疫器官发育状况以及功能强弱对家禽的免疫水平起决定性作用。所以，免疫器官指数是反映家禽机体免疫水平的直接指标。严涛等[17]研究表明，在日粮中掺拌凝结芽孢杆菌饲喂白羽肉鸡能够显著提高胸腺指数和法氏囊指数。胡振华等[18]研究表明，在日粮中掺拌枯草芽孢杆菌饲喂樱桃谷肉鸭能够显著提高胸腺指数。郭欣怡等[7]在日粮中掺拌不同益生菌饲喂肉鸡，发现乳酸菌、丁酸菌和复合菌剂均可以提高免疫器官指数，且复合菌剂优于单菌。本试验结果表明，相比另外两组，酒糟基复合益生菌剂组能够显著提高脾脏指数；相比对照组，未发酵酒糟组的胸腺指数显著降低。上述结果表明，酒糟对免疫器官有损害作用，而经过复合益生菌发酵的酒糟能有效提高安全性，对免疫器官有增强效果，能改善机体健康状况，减少发病率。3.4酒糟基复合益生菌剂对肉鸡血清生化指标的影响血清生化指标可以反映机体新陈代谢水平。蓝海恩等[19]研究表明，采用复合益生菌饲料代替10%日粮饲喂断奶仔猪能够显著提高TP和ALB含量。汪源泉[20]研究表明，采用不同益生菌组合的方式发酵豆秸饲喂肉羊能降低血清中ALT和UA含量。本试验结果表明，相比另外两组，酒糟基复合益生菌剂组21日龄的TP和ALB显著提高，ALT水平存在降低趋势；ALT水平在49日龄显著低于另外两组；空白对照组和未发酵酒糟组之间不存在显著差异。上述结果表明，酒糟经复合益生菌发酵后能起到益生效果，促进肝功能，提高肉鸡运输蛋白的能力，促进蛋白在体内转化沉积。4结论本试验结果表明，复合益生菌发酵酒糟能有效改善酒糟品质，饲喂肉鸡可以提高肉鸡生长性能和屠宰效能，增强免疫器官指数，改善血液生化环境。