黔北麻羊源自贵州黔北地区,2009年5月被农业农村部认定为新的山羊遗传资源品种[1]。黔北麻羊肉质感好,其生存能力较强、生产性能优。舍饲黔北麻羊常见应激反应,羔羊30 d左右会进行人工强制断奶,断奶后羔羊应激反应明显,会出现生长迟缓、腹泻等现象,使羔羊的生长发育受影响[2]。因此,寻找能够提高羔羊的免疫力和抗应激能力的方法,是提高黔北麻羊养殖技术和养殖价值的重要环节。黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)是黄芪根部提取物。目前,动物用黄芪多糖主要用来提高动物疫苗保护力,防控免疫抑制性疾病和防制禽类、猪等病毒性疾病[3]。黄芪多糖可以提高肠道对物质的吸收率,降低料重比[4]。目前,黄芪在提高鸡、猪免疫系统方面研究成果较丰富,在羊的研究与运用上较少,且未见黄芪在舍饲黔北麻羊中的研究与应用。因此,试验选用35日龄的黔北麻羊断奶羔羊为试验动物,通过在其饲粮中添加0.05%和0.10%黄芪多糖,探讨黄芪多糖作为饲料添加剂对黔北麻羊断奶羔羊生长性能、血清生化及免疫功能的影响,为中药添加剂在黔北麻羊生产中的科学应用提供临床试验依据和养殖技术指导。1材料与方法1.1试验材料试验动物为刚断奶的黔北麻羊羔羊(羔羊和饲料均由习水县某规模化养殖场提供);黄芪多糖粉购自河南康迪生物科技有限公司;生化试纸购自爱德士生物科技股份有限公司;细胞因子和免疫球蛋白ELISA试剂盒均购自Sigma公司。1.2试验设计试验在贵州省习水县某规模黔北麻羊种羊场进行。选取45只体重相近、临床表现健康的35日龄羔羊,随机分为3组,每组15只羊,每只羊为1个重复。各组羔羊体重差异不显著(P0.05)。对照组羔羊饲喂基础日粮,试验1组在日粮里添加0.05%黄芪多糖,试验2组在日粮里添加0.10%黄芪多糖。日常饲喂的饲料由粗饲料和精饲料混合搭配后制备的基础日粮。基础日粮组成与营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.09.007.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100全株玉米59代谢能/(MJ/kg)9.39酒糟5粗蛋白质/%12.38花生秧15粗脂肪/%3.83精料20中性洗涤纤维/%73.42石粉1酸性洗涤纤维/%28.66粗灰分/%6.10注:1.精料组成为:玉米65%、豆粕20%、尿素1%、预混料2%、磷酸氢钙1.5%、食盐0.5%、麦麸10%。2.预混料购自成都英美尔农牧科技有限公司。试验期间所有羔羊舍饲,每组分栏饲喂,每天9:30和18:30清理饲槽后投喂,自由采食和饮水,试验共持续47 d,其中包括7 d的预试验,用于羔羊适应日粮和减少应激反应。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能预试期后,第7 d称重为初重,试验第40 d称取各组羔羊末重,计算其平均日增重量。记录每天加料量,除去损耗量,计算各组羔羊平均日采食量和料重比。料重比=平均日采食量/平均日增重量(1)1.3.2血清生化指标所有羔羊分别在正式试验前、试验第15、40 d使用装有肝素的抽血管在饲喂前从颈静脉采血10 mL,3 000 r/min离心10 min,收集上层血清,保存在冰袋中,2 h内带回遵义职院附属动物医院进行血清测定。测定血清总蛋白(TP)、球蛋白(GLB)、白蛋白(ALB)含量、碱性磷酸酶(ALP)活性、生长激素(hGH)水平。1.3.3免疫指标所有羔羊分别在正式试验前、试验第15、40 d通过1.3.2方法采取所有羔羊血清,分别利用羊免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、白介素-2(IL-2)及-α干扰素(IFN-α)的ELISA试剂盒测定各组试验羊血清样品中的IgG、IgA、IgM、IL-2、IFN-α含量。试验结束后,从每个组中随机选取3只羊(不分公母)屠宰,摘取屠宰后藏羊的脾脏并称重,通过脾脏重量除以体重得到脾脏指数(spleen index,SI)。1.4数据统计与分析试验数据采用Excel 2010软件记录和整理,采用SPSS 22.0软件进行分析,结果以“平均值±标准差”表示,P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1黄芪多糖对黔北麻羊羔羊生长性能的影响(见表2)由表2可知,试验1组羔羊的平均日增重比对照组显著提高12.67%(P0.05),试验2组羔羊的料比重显著低于对照组(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.09.007.T002表2黄芪多糖对黔北麻羊羔羊生长性能的影响组别初重/kg末重/kg平均日采食量/(g/只)平均日增重/(g/只)料重比对照组10.63±0.5912.86±0.28208.4855.25±7.25a3.79±0.31b试验1组10.62±0.6713.07±0.54212.4758.45±3.55ab3.64±0.27ab试验2组10.88±0.7613.37±0.39210.4562.25±4.24b3.38±0.20a注:同列数据肩标小写字母不同表示差异显著(P0.05),小写字母相同或无字母表示差异不显著(P0.05)。2.2黄芪多糖对黔北麻羊羔羊血清生化指标的影响(见表3)由表3可知,第40 d,试验2组羔羊血清TP、GLB、ALP含量显著高于对照组(P0.05)。第15 d、40 d,试验2组羔羊血清hGH含量显著高于对照组(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.09.007.T003表3黄芪多糖对黔北麻羊羔羊血清生化指标的影响项目时间/d对照组试验1组试验2组TP/(g/L)022.26±4.3121.79±5.0322.35±3.591522.12±5.3621.89±4.1624.47±2.444022.77±4.96a23.09±4.60ab25.22±2.70bGLB/(g/L)015.48±3.2115.93±3.1015.37±2.301515.25±3.4216.43±2.0316.67±3.564015.42±2.88a17.03±3.40ab18.27±3.05bALB/(g/L)07.86±2.437.45±4.227.72±3.64157.43±2.556.88±3.278.04±1.86407.58±2.817.06±0.857.14±0.92ALP/(U/L)01.42±1.771.25±1.071.58±0.96151.29±0.791.56±1.141.92±0.85401.37±1.24a1.60±1.16ab2.27±1.02bhGH/(μg/L)00.33±0.250.37±0.480.35±0.19150.37±0.36a0.44±0.27ab0.51±0.32b400.42±0.27a0.49±0.35ab0.55±0.18b注:同行数据肩标小写字母不同表示差异显著(P0.05),小写字母相同或无字母表示差异不显著(P0.05);下表同。2.3黄芪多糖对黔北麻羊羔羊免疫功能的影响(见表4)由表4可知,第15 d,试验2组羔羊血清IgG含量显著高于对照组和试验1组(P0.05)。与对照组相比,试验2组第40 d羔羊脾脏指数、IgA、IgG、IL-2含量分别提高13.3%、18.7%、33.5%、32.3%(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.09.007.T004表4黄芪多糖对黔北麻羊羔羊免疫功能的影响项目时间/d对照组试验1组试验2组脾脏指数/%401.43±0.23a1.50±0.20ab1.62±0.28bIgA/(mg/L)0311.17±37.28328.24±48.16320.93±40.2815360.79±40.83386.16±42.33390.±37.5240377.42±21.20a412.38±18.36ab447.90±26.51bIgG/(mg/L)0834.27±56.55833.79±41.06874.07±87.9215974.17±49.10a1 070.44±27.47b1 292.38±36.53c401 103.38±15.13a1 288.05±49.66ab1 473.01±33.95bIgM/(g/L)02.48±0.232.72±1.072.47±0.74153.15±1.063.77±0.963.99±1.37404.69±0.105.17±0.685.54±1.23IL-2/(ng/L)052.03±6.3549.72±10.4055.58±5.391548.53±9.505689±10.3161.08±2.774059.25±8.10a68.52±8.28ab78.41±7.45bIFN-α/(ng/L)0356.26±49.71357.17±42.36347.28±40.8215378.55±60.07397.20±58.75367.12±70.4840390.77±48.63410.27±83.15398.28±52.403讨论3.1黄芪多糖对黔北麻羊羔羊生长性能的影响冯士彬等[5]在饲料中添加3%的黄芪多糖喂食湖羊羔羊,发现黄芪多糖能够显著增加羔羊肠道双歧杆菌科、茂螺菌科等益生菌群的数量,降低料重比。黄芪纤维作为添加剂,能够提高仔猪对食物的吸收率和消化率[6]。本试验中,45只断奶羔羊均未出现腹泻和应激反应情况,其他未试验的羔羊群中均发现有腹泻情况。本试验结果表明,在饲料中添加0.10%黄芪多糖能够显著增加刚断奶的羔羊体重增幅和平均日增重,促进其快速生长,缩短出栏时间,显著降低料重比,提高饲料转化率。鲍玉林等[7]发现,在藏羊饲粮中添加0.10%黄芪多糖60 d,藏羊日均增重、脾脏指数、IgG含量、IgA含量明显升高,表明黄芪多糖能够提高藏羊的生长性能。李春生[8]研究表明,在日粮中添加10 g/头的黄芪可以显著降低断奶犊牛腹泻率。有研究发现,静脉注射50 mL/d的黄芪多糖注射液可以改善热应激下的奶牛生产性能[9]。上述研究说明,饲喂黄芪多糖能够提高反刍动物生长性能。3.2黄芪多糖对黔北麻羊羔羊血液生化指标的影响血清TP是ALB和GLB的总和,在血液中携带着脂肪酸,是细胞和组织的组成部分。ALB是动物体内不能缺失的液体物质,能够保证细胞与组织之间交流,参与维持胶体渗透压、物质的运输等生理功能[10]。GLB是IgA、IgM、IgG、IgD、IgE的总称,GLB高于正常值范围表示机体存在慢性炎症或肝脏问题;GLB过低表示机体抵抗力很差,病原体很容易入侵动物机体。Song等[11]研究发现,离子型中草药的饲料添加剂可以显著增加炎热环境中运输肉牛血清中蛋白质的含量,逐渐降低血糖,缓解肉牛的应激反应。杨浩杰[12]研究发现,在饲料中添加0.15%黄芪多糖能够显著提高小尾寒羊的GLB含量。本试验中,试验2组羔羊血清IgA、IgG含量明显升高,与生化指标中GLB含量相呼应,但饲喂黄芪多糖对羔羊血清ALB含量无影响。ALP广泛分布于肝脏、骨骼等组织中。有肝脏疾病特别是肝硬化和肝肿瘤时,ALP会比正常值升高几倍[13]。Annibali等[14]研究表明,当机体处于发育期时,体内ALP含量会明显增加。本试验中,试验2组羔羊的平均日增重显著高于对照组,40 d时试验2组羔羊血清的ALP也比对照组明显上升,说明试验2组羔羊生长发育比对照组好,从hGH指标也可以反映出生长情况。3.3黄芪多糖对黔北麻羊羔羊免疫系统的影响黄芪多糖可以增强细胞免疫和体液免疫,使畜禽的免疫功能更加稳定,能够抵抗病毒感染和自身免疫性疾病[15]。侯喜娥等[16]研究发现,在饮水中加入黄芪多糖比加入土霉素更能够降低仔猪腹泻率,提升CD8+细胞含量。孙林浩等[17]研究黄芪多糖对鱼类的免疫调节作用,利用流式细胞仪检测高纯度黄芪多糖对头肾巨噬细胞吞噬功能的影响,结果表明,黄芪多糖对离体培养大黄鱼头肾巨噬细胞有较为明显的免疫调节作用。脾脏是最大的外周免疫器官,可以产生大量的B淋巴细胞,还可以产生促吞噬素来激活单核细胞和吞噬细胞的吞噬作用,淋巴细胞增殖的数量和速度是脾脏指数的高低的关键因素,脾脏指数可粗略评估免疫功能[18]。IgG和IgA可以中和多种毒素、是抗感染的主力军,IgM可防止细菌进入血液造成菌血症,对新生动物具有重要作用,IgG、IgA、IgM均是主要的体液免疫检测指标;IL-2和IFN-α均是调节T、B淋巴细胞活化因子,是抗肿瘤的关键,它们均可刺激NK细胞分泌[19]。IL-2含量是动物细胞免疫的很重要标志[20]。本试验发现,0.05%黄芪多糖添加剂量和0.10%黄芪多糖添加剂量均可以改善羔羊免疫系统功能,试验2组羔羊比对照组羔羊的脾脏指数、IgA、IgG、IL-2含量分别提高13.3%、18.7%、33.5%、32.3%,说明0.10%黄芪多糖组羔羊免疫功能明显增强,能更好地抵御外环境不良因素。4结论饲粮中添加0.10%黄芪多糖可以提高舍饲黔北麻羊羔羊平均日增重,降低料重比,有效增强免疫力和增加生长激素的分泌。
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