微生态制剂具有绿色、安全等特点，逐渐成为替代抗生素的热门产品之一[1]。益生菌是微生态制剂的一种，可以调节动物肠道菌群平衡，促进生物活性物质有益菌的增殖[2-3]。研究表明，在小母牛日粮中添加益生菌（枯草芽孢杆菌）可以提高动物的生长性能和免疫力，改善动物健康状况[4]。卢奇成等[5]在犊牛日粮中添加益生菌（布拉氏酵母菌），发现可以显著提高犊牛的平均日增重和平均日采食量，显著降低犊牛的饲料转化率。Jia等[6]在育肥羊日粮中加入枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和蛋白酶的复合制剂，发现复合制剂可以提高育肥羊的生长性能、免疫力和抗氧化性能。本研究将枯草芽孢杆菌与单独或组合添加到犊牛日粮中，探究其对犊牛生长性能、抗氧化能力和血清生化指标的影响，为益生菌在反刍动物生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料布拉氏酵母菌（Saccharomyces boulardii）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）由山东宝来利来生物工程股份有限公司提供，活菌数均为2×1010 CFU/g。1.2试验设计选择48只3月龄生长发育良好的断奶延边黄牛公犊牛，分为4组，每组4个重复，每个重复3头牛。对照组犊牛饲喂基础日粮；PB-1组在基础日粮中添加3 g/(d·头)布拉氏酵母菌；PB-2组在基础日粮中添加3 g/(d·头)枯草芽孢杆菌；PB-3组在基础日粮中添加1.5 g/(d·头)+布拉氏酵母菌1.5 g/(d·头)枯草芽孢杆菌。试验共35 d，其中预试期7 d，正式试验期28 d。基础日粮组成及营养水平见表1。将益生菌混合到精料中于早晨饲喂，待精料全部采食完再投喂粗料，基础日粮中精粗比为55∶45，粗饲料为玉米秸秆。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.10.001.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00秸秆青贮45.00综合净能/(MJ/kg)8.13玉米43.00粗蛋白质/%18.24小麦麸5.00钙/%0.70豆粕4.00磷/%0.60棉籽粕1.50食盐0.50预混料1.00注：每千克预混料为日粮提供：VA 240 000 IU、VE 1 200 IU、VD 60 000 IU、钙118 g、锰2.00 g、硫2.00 g、铁2.00 g、锌2.85 g、磷20 g、镁20.5 g、钠203 g、铜1.20 g、钴11 mg、硒10 mg、抗氧化剂1.20 g。1.3饲养管理试验从2020年5月至2020年7月在龙井牧场进行。试验开始前全面消毒犊牛岛，采用单栏培育，每天8：00和16：00各饲喂1次，自由饮水。试验过程中单独记录每头犊牛的试验数据。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验第1 d测量初重（BIW），第28 d测量末重（FBW），期间每7 d空腹称重1次并记录体重；测量第1 d和第28 d犊牛的体斜长、体高和胸围；每天8：00投喂日粮前记录剩余日粮量和投喂量。按照剩余料不超过饲喂料10%的原则调整饲喂料的量。计算犊牛的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料重比（F/G）、体躯指数和体长指数。平均日增重=(末重-初重)/试验天数 (1)精料平均日采食量=每组犊牛精料总采食量/(每组犊牛只数×试验天数) (2)料重比=平均日采食量/平均日增重 (3)体躯指数=[胸围(cm)/体斜长(cm)]×100% (4)体长指数=[体斜长(cm)/体高(cm)]×100% (5)1.4.2血清指标试验第28 d晨饲前，采集每只犊牛颈静脉血10 mL，轻微摇晃，静置30 min，3 000 r/min离心15 min，将血清分装至离心管，-20 ℃保存待测。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定血液生化指标，试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司。采用比色法测定血液抗氧化指标，试剂盒购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，具体操作参考试剂盒说明书进行。1.5数据统计与分析采用Excel 2010记录数据，使用SPSS 19.0进行数据处理与分析，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同组合益生菌对犊牛生长性能的影响（见表2）由表2可知，PB-3组犊牛平均日增重最高，较CK组显著提高45.16%（P0.05）；与CK组相比，添加益生菌试验组料重比显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.10.001.T002表2不同组合益生菌对犊牛生长性能的影响组别初重/kg末重/kg平均日增重/(g/d)平均日采食量/(kg/d)料重比CK组84.59±0.96110.73±0.63a0.93±0.01a4.08±0.184.39±0.08cPB-1组86.56±1.55117.92±0.99b1.12±0.09b4.29±0.213.84±0.08bPB-2组85.86±3.31119.16±0.56b1.19±0.12b4.38±0.063.68±0.07bPB-3组87.56±1.53125.40±0.97c1.35±0.02c4.32±0.033.21±0.05a注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同组合益生菌对犊牛体尺指数的影响（见表3）由表3可知，添加益生菌试验组犊牛胸围和体斜长较CK组犊牛均显著提高（P0.05）；添加益生菌试验组犊牛体躯指数较CK组显著提高（P0.05）；PB-3组犊牛体高显著高于其他3组（P0.05）；PB-2组和PB-3组犊牛体长指数显著高于CK组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.10.001.T003表3不同组合益生菌对犊牛体尺指数的影响组别胸围/cm体斜长/cm体躯指数体高/cm体长指数CK组99.27±1.05a94.53±1.51a105.01±0.76a92.47±1.29a102.23±0.49aPB-1组104.40±0.90b96.27±0.95b108.46±1.72b93.67±0.58a102.77±0.55aPB-2组104.37±1.00b96.67±0.90b107.97±0.92b93.00±1.00a103.94±0.16bPB-3组110.47±0.70c100.37±0.21c110.06±0.92b96.67±0.58b103.83±0.83b2.3不同组合益生菌对犊牛血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，PB-3组犊牛血清总抗氧化能力最强，显著高于CK组（P0.05）；PB-3组犊牛血清谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于其他3组（P0.05）；PB-3组犊牛血清丙二醛含量显著低于其他各组（P0.05），添加益生菌试验组犊牛血清丙二醛含量均显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.10.001.T004表4不同组合益生菌对犊牛血清抗氧化指标的影响组别总抗氧化能力/(U/mL)谷胱甘肽过氧化物酶/(U/mL)总超氧化物歧化酶/(U/mL)丙二醛/(μmol/L)CK组19.89±0.43a106.28±2.15a69.07±2.133.37±0.06cPB-1组21.24±0.60a110.64±2.30a70.90±2.403.29±0.06bPB-2组23.13±0.90b110.66±1.69a71.78±3.023.24±0.05bPB-3组23.60±0.59b118.22±1.08b73.43±2.253.13±0.09a2.4不同组合益生菌对犊牛血清生化指标的影响（见表5）由表5可知，添加益生菌试验组球蛋白含量均显著高于CK组（P0.05），其中PB-3组球蛋白含量最高；PB-3组总蛋白含量最高，显著高于其他3组（P0.05），PB-1组和PB-2组总蛋白含量显著高于CK组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.10.001.T005表5不同组合益生菌对犊牛血液生化指标的影响项目CK组PB-1组PB-2组PB-3组白蛋白/(g/L)29.35±0.4028.78±1.0928.34±0.4728.26±0.80球蛋白/(g/L)27.35±0.44a32.13±0.47b30.89±1.88b34.60±0.90b总蛋白/(g/L)61.68±1.43a64.19±0.30b63.57±0.55b67.99±0.46c葡萄糖/(mmol/L)5.38±0.356.40±0.346.45±0.436.39±0.34总胆固醇/(mmol/L)1.53±0.061.56±0.031.60±0.071.57±0.05谷丙转氨酶/(U/L)20.41±3.0822.46±2.9823.84±0.8122.52±2.89甘油三酯/(mmol/L)0.39±0.040.38±0.030.42±0.020.35±0.05碱性磷酸酶/(U/L)165.45±1.76167.80±3.47168.07±2.76172.82±12.75注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。3讨论3.1不同组合益生菌对犊牛生长性能和体尺的影响平均日增重和料重比均可以反映犊牛的生长性能、消化性能和瘤胃发酵情况[7]，也可以反映犊牛对营养物质的消化、吸收和沉积情况[8]。布拉氏酵母菌作为酿酒酵母的亚种，具有耐高温、耐酸、抗氧化等特性[9]。布拉氏酵母菌可以通过阻断、破坏致病毒素受体，抑制病原体生长，提高动物机体免疫能力[10]。Bontempo等[11]在断奶仔猪日粮中添加2 g/kg的布拉氏酵母菌，可以显著提高断奶仔猪的平均日增重。Galvão等[12]在犊牛的代乳料中加入活性为1×1010 CFU/g布拉氏酵母菌0.5 g，可以显著提高提高犊牛的干物质采食量和平均日增重。枯草芽孢杆菌具有调节动物肠道微生物平衡，提高酶活性，提高机体免疫力等特性[13]。有研究表明，在早期断奶仔猪日粮中加入复合益生菌（酿酒酵母菌和枯草芽孢杆菌）可以提高动物的生长性能和免疫能力[14]。程连平等[15]发现，在湖羊羔羊日粮中添加富硒酵母和枯草芽孢杆菌可以显著提高湖羊羔羊的平均日增重，显著降低湖羊羔羊的料重比。本试验中，添加益生菌组犊牛的平均日增重较对照组显著升高，料重比显著降低，与上述研究结果一致。以上结果可能因为在延边黄牛犊牛日粮中单独或混合添加布拉氏酵母菌和枯草芽孢杆菌可以调节犊牛瘤胃微生物区系，提高犊牛肠道的消化吸收能力；也可能因为添加的布拉氏酵母菌和枯草芽孢杆菌产生的代谢产物，对犊牛瘤胃起到了补充调节作用。体尺指数可以反映犊牛的体格状况和生长性能[16]。符运勤等[17]在新生荷斯坦犊牛日粮中添加地衣芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌和植物乳酸杆菌的复合益生菌制剂，可以提高8周龄犊牛的体躯指数。王晓芳等[18]将益生菌加入3~4月龄荷斯坦公犊牛的日粮中，可以显著提高犊牛的体斜长增长量。本试验中，添加益生菌试验组犊牛体躯指数和体长指数均较CK组均差异显著，与上述研究结果一致。3.2不同组合益生菌对犊牛血清抗氧化指标的影响总抗氧化能力可以判断动物机体抗氧化能力；谷胱甘肽过氧化物酶活性可以反映机体抗氧化能力大小；总超氧化物歧化酶可以清除物酶自由基和过氧化物；丙二醛含量可以反映脂质过氧化或分解程度[19-20]。Angelis等[21]研究发现，将益生菌添加到动物日粮中可以清除机体自由基，提高动物的抗氧化能力。于洁等[22]将复合益生菌（丁酸梭菌和枯草芽孢杆菌）饲喂给肉鹅，发现添加复合益生菌可以提高肉鹅总增重、空肠脂肪酶活性及抗氧化功能，添加芽孢杆菌组可以更好地改善肠道形态。本试验中，PB-3组犊牛总抗氧化能力和谷胱甘肽过氧化物酶活性均较CK组显著升高，PB-3组犊牛丙二醛含量较CK组显著降低，且混合添加组效果最好，与上述研究结果基本一致。3.3不同组合益生菌对犊牛血清生化指标的影响白蛋白（ALB）含量可以反映肝脏蛋白质代谢水平，球蛋白（GLB）含量可以间接反映机体免疫能[23]。本试验中，ALB和GLB含量均在犊牛正常指标范围内，PB-3组GLB含量最高，添加益生菌试验组犊牛GLB含量较CK组犊牛差异显著。说明添加布拉氏酵母菌和枯草芽孢杆菌可以提高犊牛血清中GLB含量，对ALB含量无不良影响。犊牛血清中的总蛋白（TP）含量可以看出延边黄牛犊牛的营养水平和免疫能力[24]。有研究表明，健康犊牛的TP含量应该在55 g/L以上[25]。本试验中，各种延边黄牛犊牛的TP含量均在合理范围内，且PB-3组犊牛总蛋白含量最高，较其他3组犊牛TP含量均显著提高，且混合组效果最好，说明添加添加布拉氏酵母菌和枯草芽孢杆菌可以提高犊牛血清中的TP含量，促进犊牛对蛋白质的吸收利用。蒋治国[26]在断奶仔猪日粮中添加益生菌，发现添加益生菌可以提高断奶仔猪的血清中的TP含量，与本试验结果一致。4结论在犊牛日粮中添加不同组合益生菌可以提高犊牛的生长性能，提高犊牛血清中球蛋白、总蛋白含量、总抗氧化能力和谷胱甘肽过氧化物酶活性，降低犊牛血清中MDA含量，且PB-3组效果最优。