夏季是水貂的快速生长发育期，此时期水貂对蛋白质和维生素等营养物质的代谢水平较高[1]。但是，高温天气不仅影响水貂对养分的消化利用率，改变机体代谢机能，还会造成水貂抗氧化力和免疫机能下降[2]，甚至危及水貂生命。当动物受到热应激时，机体清除自由基能力减弱。自由基过量将引发一系列链式反应，对生物膜和生物大分子造成氧化和过氧化损伤[3]。维生素C可通过清除血浆中活性氧自由基、提高体内抗氧化酶活性等方式发挥抗氧化作用。段晨磊等[4]研究表明，维生素C可提高血清中总超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性，抑制脂质过氧化，提高夏季长毛兔抗氧化能力。秦红等[5]认为，维生素C可以通过提高抗氧化酶基因表达，进而提高抗氧化酶活性，使热应激蛋鸡具有较好的肠道抗氧化能力。本试验在夏季高温条件下在水貂日粮中添加维生素C，研究其对水貂血清生化指标、抗氧化能力的影响，为在夏季水貂日粮中添加维生素C提供依据。1材料与方法1.1试验动物及设计试验于潍坊诸城市水貂养殖基地进行。试验选用60日龄育成期水貂各120只，随机分为6组，每组20只，公、母各半，单笼饲养。Ⅰ组（对照组）水貂饲喂基础日粮，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组分别在基础日粮上添加25、50、100、200、400 mg/kg维生素C。试验时间为2018年6月27日至2018年9月1日。预试期1 w。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.11.014.T001表1基础日粮组成及营养水平 （风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00海杂鱼40.00代谢能/(MJ/kg)15.12鸡架25.00粗蛋白质/%36.64鸡胸肉7.00粗脂肪/%22.51鸡肝5.00粗灰分/%8.32鸡蛋2.00钙/%2.41膨化大豆2.00磷/%1.95膨化玉米6.00膨化小麦6.00鸡油2.00鱼粉2.00血球蛋白粉1.00预混料1.00食盐0.50磷酸氢钙0.50注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 10 000 IU、VK3 1 mg、VB1 20 mg、VB2 10 mg、VB6 10 mg、VB12 0.1 mg、烟酸40 mg、泛酸13 mg、叶酸1 mg、生物素0.5 mg、Cu 5 mg、Fe 60 mg、Zn 50 mg、Mn 30 mg、I 0.5 mg、Se 0.4mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。1.2饲养管理饲养试验前应对貂棚和貂笼全面消毒，仔貂进行免疫，饲养试验。水貂早晚各饲喂1次，自由饮水，并记录每日采食量。将维生素C混入微量水溶解，倒入基础日粮中混匀饲喂。将温度计悬挂于貂笼上方。试验测得平均最高温度为30.73 ℃，平均最低温度为23.95 ℃。1.3样品采集8月27日，每组各取3只公貂和3只母貂。心脏采血，每只取血样10 mL，离心后取上清液，-80 ℃冷冻保存。1.4测定指标及方法1.4.1血清生化指标采用考马斯亮蓝法测定总蛋白（TP）含量；采用溴甲酚绿比色法测定白蛋白（ALB）含量；采用二乙酰—肟法测定尿素氮（BUN）含量；采用赖氏法测定谷丙转氨酶（ALT）活性。球蛋白为白蛋白与总蛋白差值计算获得。1.4.2血清抗氧化指标采用化学比色法测定抗超氧阴离子（anti-·O2－）能力；采用钼酸铵法测定过氧化氢酶（CAT）活性；采用比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性；采用羟胺法测定超氧化物歧化酶（SOD）活性；采用硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（MDA）含量；采用比色法测定总抗氧化能力（T-AOC）。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。1.5数据统计与分析数据采用SPSS 20.0软件中单因素方差分析（One-way ANOVA），LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著水平。2结果与分析2.1不同维生素C水平对水貂血清生化指标的影响（见表2、表3）由表2可知，Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅵ组公貂血清ALB含量显著高于对照组（P0.05），Ⅲ组和Ⅳ组公貂血清ALB含量显著高于Ⅱ组（P0.05）。与对照组相比，Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组公貂血清BUN含量显著降低，Ⅱ组血清BUN含量显著高于Ⅲ组和Ⅴ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.11.014.T002表2不同维生素C水平对公貂血清生化指标的影响项目TP/(g/L)ALB/(g/L)GLB/(g/L)BUN/(mmol/L)ALT/(U/L)P值0.1080.0110.6870.0230.946Ⅰ组74.94±1.5423.12±0.42c51.82±1.405.31±0.48a180.61±5.68Ⅱ组75.55±1.7323.44±0.60bc52.11±2.215.18±0.48ab178.53±7.24Ⅲ组78.57±1.7124.82±0.60a53.75±1.534.27±0.42d180.94±8.58Ⅳ组78.53±0.9625.22±0.53a53.30±0.564.47±0.06bcd181.46±3.62Ⅴ组77.22±1.1924.13±0.45abc53.09±1.434.43±0.23cd183.95±9.71Ⅵ组77.60±2.6724.57±1.01ab53.02±2.035.03±0.41abc176.72±15.38注：同列数据肩标字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05），小写字母不同表示差异显著（P0.05），大写字母不同表示差异极显著（P0.01）；下表同。由表3可知，Ⅳ组母貂血清BUN含量显著低于对照组（P0.05），Ⅵ组母貂血清BUN含量显著高于Ⅲ组、Ⅳ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.11.014.T003表3不同维生素C水平对母貂血清生化指标的影响项目TP/(g/L)ALB/(g/L)GLB/(g/L)BUN/(mmol/L)ALT/(U/L)P值0.8790.0550.8880.0490.937Ⅰ组74.68±1.9123.47±0.2650.07±0.975.53±0.48ab183.77±10.46Ⅱ组75.53±2.0624.53±0.0850.85±1.945.43±0.36abc176.99±15.59Ⅲ组76.87±2.5324.68±0.1252.33±2.514.91±0.25bc184.01±17.35Ⅳ组76.59±3.6424.68±0.4351.90±4.074.89±0.17c187.14±11.63Ⅴ组76.49±3.5524.28±0.3152.20±3.865.07±0.39abc182.75±9.13Ⅵ组75.23±0.5124.60±0.9551.75±0.355.65±0.07a180.42±5.512.2不同维生素C水平对水貂血清抗氧化指标的影响（见表4、表5）由表4可知，日粮中添加不同水平维生素C对公貂血清中Anti-·O2-以及CAT、GSH-Px和SOD活性影响不显著（P0.05）。各试验组公貂血清T-AOC均高于对照组，其中Ⅳ组公貂血清T-AOC极显著高于Ⅰ组和Ⅱ组（P0.01），Ⅲ组公貂血清T-AOC极显著高于Ⅰ组（P0.01），Ⅴ和Ⅵ组公貂血清T-AOC显著低于Ⅳ组（P0.05）。各试验组公貂血清MDA含量均低于对照组，Ⅲ组和Ⅳ组公貂血清MDA含量极显著低于对照组（P0.01），Ⅵ组公貂血清MDA含量显著低于对照组（P0.05），且Ⅴ组公貂血清MDA含量显著高于Ⅲ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.11.014.T004表4不同维生素C水平对公貂血清抗氧化指标的影响项目Anti-·O2-/(U/mL)CAT/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)T-AOC/(U/mL)P值0.0940.1040.1310.9060.0010.005Ⅰ组166.86±16.8234.53±0.26408.06±7.59181.46±54.7537.03±0.84Aa5.04±0.28BcⅡ组169.30±034.96±0.39401.31±21.25170.30±7.3036.88±0.88Aa5.51±0.61BbcⅢ组192.08±17.7235.36±0.55434.11±21.69193.68±66.7934.07±0.83BCc6.40±0.52AabⅣ组203.04±4.2135.40±0.50454.64±45.97208.73±26.3533.70±1.12Cc7.19±0.20AaⅤ组185.47±21.5934.83±0.24432.26±6.88164.13±5.5335.92±0.67ABab5.84±0.67ABbcⅥ组172.78±20.7234.69±0.33428.80±2.57175.14±90.8735.18±0.42ABCbc5.33±0.77Bc由表5可知，日粮中添加不同水平维生素C对母貂血清Anti-·O2-、GSH-Px和SOD活性量及T-AOC均无显著影响（P0.05）。与对照组相比，Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组母貂血清CAT活性显著提高（P0.05）。与对照组相比，各试验组母貂血清MDA含量均降低，Ⅲ组和Ⅳ组母貂血清MDA含量显著低于对照组（P0.05），Ⅳ组母貂血清MDA含量显著低于Ⅱ组和Ⅵ组（P0.05），其余各组间差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.11.014.T005表5不同维生素C水平对母貂血清抗氧化指标的影响项目Anti-·O2-/(U/mL)CAT/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)SOD/(U/mL)MDA/(μmol/L)T-AOC/(U/mL)P值0.4450.0230.5000.9330.0300.986Ⅰ组168.00±8.2132.97±1.94b403.45±2.28149.78±15.6036.88±1.81a5.41±0.35Ⅱ组172.46±8.9835.31±0.04a405.17±24.09165.84±18.6636.66±0.98ab6.00±2.32Ⅲ组181.01±11.4335.79±0.27a448.9±45.21169.78±45.7834.44±1.11bc7.19±2.81Ⅳ组194.69±10.5035.79±0.48a439.99±51.07167.19±26.4233.33±1.23c6.75±6.55Ⅴ组185.59±19.9934.44±0.91ab439.14±50.40158.44±10.4035.18±1.35abc6.41±1.77Ⅵ组176.95±28.6134.39±0.58ab412.86±5.95160.10±19.9635.88±0.48ab6.00±1.293讨论3.1不同维生素C水平对水貂血清生化指标的影响血液生化指标可以间接反映动物健康状况。血清ALB含量在一定程度上可反映日粮蛋白质水平以及机体对摄入蛋白质吸收利用程度[6]。本试验发现，在日粮中添加维生素C能够提高血清ALB合理，当维生素C含量高于100 mg/kg时，ALB含量不再随维生素C的添加量增加而增加，且各组血清ALB含量均有减小的趋势，日粮中添加维生素C促进组织蛋白质沉积，进而降低血清BUN含量，维生素C水平为100 mg/kg时，水貂对蛋白质的利用效率相对较高。尿素氮作为动物体内蛋白质和氨基酸的代谢主要终产物，反映机体蛋白质代谢和氨基酸平衡[7]。张琪等[8]通过对育肥后期松辽黑猪的研究发现，日粮中添加维生素C，试验组血清BUN含量极显著低于对照组，本试验结果与该报道一致。ALT在蛋白质和非必需氨基酸代谢中发挥重要作用，ALT活性能直接反映机体蛋白质合成代谢状态[9]。李浩杰等[10]研究发现，日粮中添加维生素时，育成蛋鸡血清ALT活性较对照组降低32.09%。安婷婷等[11]研究发现，日粮中添加维生素C的试验组血清ALT活性显著低于对照组。本试验中，水貂血清ALT活性随维生素C添加量呈现波动变化趋势，但无显著差异，与上述研究结果均有差异，原因可能是物种间存在差异。3.2不同维生素C水平对水貂血清抗氧化指标的影响T-AOC和MDA综合评价机体抗氧化能力。施会强等[12]在蛋鸡的研究中发现，高温条件下日粮中维生素C添加量为100 mg/kg时，血清T-AOC显著升高，MDA含量显著降低。李彦等[13]研究发现，日粮中补充100~200 mg/kg维生素C，肉鸡血清T-AOC和MDA含量分别随之升高和下降。本试验与上述报道一致，日粮中添加适宜水平的维生素C能够提高水貂血清T-AOC，降低水貂血清MDA含量，且维生素C添加水平为100 mg/kg时水貂血清MDA含量最低、T-AOC最强。结果表明，在日粮中添加维生素C可在一定程度上提高水貂抗氧化能力。赵琳琳等[14]和张红梅等[15]研究发现，维生素C可以增强小鼠血清中CAT、T-SOD、GSH-Px活性。本试验结果表明，随着日粮中维生素C添加水平提高，在一定范围内CAT、GSH-Px和SOD的活性以及抗·O2-能力也随之增强，但除CAT外，其余各项指标差异不显著。这与前人研究结果不一致，一方面可能是动物种间存在差异，另一方面可能是维生素C化学性质不稳定，在高温环境中易被氧化破坏，从而影响到试验结果。4结论日粮中添加维生素Ｃ可以提高公貂血清白蛋白含量，降低丙二醛及尿素氮含量。综上所述，育成期水貂日粮中维生素C适宜添加水平为50~100 mg/kg。