霉变会破坏和降低饲料营养成分，对人和动物健康产生危害[1]。常见的霉菌毒素主要有黄曲霉毒素B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、烟曲霉毒素及赭曲霉毒素和T-2毒素[2]。王金勇[3]报道，超过65%的饲料样品存在2种或2种以上的霉菌毒素。目前，对霉菌毒素的研究主要集中于单一毒素或两种毒素毒性的研究，但饲料或饲料原料霉变后普遍同时存在多种霉菌毒素。因此，研究多种霉菌毒素的联合危害具有现实意义。本试验用霉变原料配制饲料，研究霉变饲料在肉鸡上的应用情况，为畜禽生产上降低霉菌毒素的危害提供参考。1材料与方法1.1试验设计选取1日龄健康艾维因肉鸡180只，随机分为2个处理组，每组6个重复，每个重复15只肉仔鸡。试验期42 d。对照组肉仔鸡饲喂基础日粮，试验组饲喂由自然霉变原料组成的日粮。两组配方相同，基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.009.T001表1基础日粮组成及营养水平项目1~21日龄22~42日龄原料组成%玉米62.0064.00豆粕27.8025.40玉米蛋白粉5.004.00石粉1.201.30磷酸氢钙1.701.50食盐0.300.30豆油1.002.50预混料1.001.00合计100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.8613.24粗蛋白/%22.9019.80钙/%0.970.86总磷/%0.620.55有效磷/%0.430.34蛋氨酸/%0.510.37蛋+胱/%0.890.71赖氨酸/%1.101.04注：预混料为每千克日粮提供：VA 12 000 IU、VD3 3 000 IU、VE 12 IU、VK3 1.5 mg、VB1 1.2 mg、VB2 4.8 mg、VB6 2.0 mg、VB12 0.02 mg、烟酸18 mg、叶酸0.5 mg、泛酸钙15.0 mg、氯化胆碱1 500 mg、铜8 mg、铁90 mg、锌78 mg、锰105 mg、硒0.15 mg。1.2样品采集1.2.1血清试验第7、14、21、28、35及42 d，每个重复选取1只接近平均体重的肉鸡，颈静脉采血，制备血清，-20℃冰箱保存待测。1.2.2组织试验第7、14、21、28、35及42 d，采血后将肉鸡肝脏、心脏、十二指肠的相同部位剪成小块，福尔马林溶液固定，待测。1.3测定指标及方法1.3.1日粮霉菌毒素含量对照组和试验组的日粮随机多点采样，-20 ℃冰箱冷冻保存，待测。采用高效液相色谱法测定配制后的饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素含量。黄曲霉毒素B1测定参考GB/T 30955—2014、玉米赤霉烯酮参考GB/T 28716—2012和呕吐毒素依据GB/T 30956—2014。1.3.2生长性能试验第7、14、21、28、35及42 d，以重复为单位称肉仔鸡重量，记录各阶段饲料消耗量、增重，计算料重比。周采食量是1 w内每日采食量之和。周增重=周内末重-周内初重(1)料重比=周采食量/周增重(2)1.3.3血清抗氧化指标采用分光光度计测定血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性、丙二醛（MDA）含量及总抗氧化能力（T-AOC）。试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.3.4石蜡切皮肝脏、心脏、十二指肠组织利用石蜡包埋、切片、H.E常规染色，光学显微镜下观察组织病理变化。1.4数据统计与分析采用SPSS 18.0软件进行单因素方差分析，采用Duncan's法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1饲料霉菌毒素含量（见表2）由表2可知，对照组饲料未检出霉菌毒素，试验组检测出黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.009.T002表2饲料霉菌毒素含量组别黄曲霉毒素B1玉米赤霉烯酮呕吐毒素对照组NDNDND试验组5.6170.7550.0注：ND代表未检出。μg/kg2.2霉变饲料对肉鸡生长性能的影响（见表3）由表3可知，饲喂霉变饲料对1 w内的肉鸡末重、周增重、周采食量和料重比影响不显著（P0.05）。第2~3 w，试验组肉鸡末重、周采食量、周增重均显著低于对照组（P0.05），料重比显著高于对照组（P0.05）。第4 w，试验组肉鸡末重、周采食量、周增重均极显著低于对照组（P0.01），料重比显著高于对照组（P0.05）。第5~6 w，试验组肉鸡周采食量和周增重极显著低于对照组（P0.01），料重比极显著高于对照组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.009.T003表3霉变饲料对肉鸡生长性能的影响日龄/d组别体重/kg周增重/kg周采食量/kg料重比1对照组41.12±0.97试验组41.38±0.857对照组122.88±5.6381.78±3.19110.21±4.151.35±0.03试验组115.03±5.2773.65±4.51102.80±4.741.40±0.0514对照组270.13±7.32a147.25±5.13a219.01±3.80a1.49±0.03b试验组222.35±8.14b107.32±4.04b169.12±4.23b1.58±0.04a21对照组562.25±9.85a292.12±5.31a505.35±4.93a1.73±0.04b试验组454.72±10.26b232.37±6.21b422.19±4.01b1.82±0.05a28对照组880.68±12.39A318.43±7.62A579.78±4.51A1.82±0.03b试验组724.68±11.08B269.96±7.45B526.41±5.15B1.95±0.05a35对照组1 367.95±13.54A487.27±6.76A929.56±8.62A1.91±0.04B试验组1 156.48±15.25B431.08±7.48B887.71±7.02B2.06±0.04A42对照组2 075.45±17.36A707.65±8.38A1 437.28±10.26A2.03±0.04B试验组1 806.53±18.02B650.05±7.87B1 392.08±9.39B2.14±0.03A注：同列数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05），大写字母不同表示差异极显著（P0.01），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.3霉变饲料对肉鸡血清抗氧化能力的影响（见表4）由表4可知，从第2 w起，试验组肉鸡血清SOD、GSH-Px活性和T-AOC显著低于对照组（P0.05）。第3 w起，试验组肉鸡血清MDA显著高于对照组（P0.05）。第5~6 w，试验组肉鸡血清SOD、GSH-Px活性极显著低于对照组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.009.T004表4霉变饲料对肉鸡血清抗氧化能力的影响日龄/d组别SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)MDA/(μmol/L)T-AOC/(U/mL）7对照组212.73±6.43206.75±8.658.23±0.395.23±0.32试验组205.28±5.69199.34±6.418.67±0.364.91±0.2914对照组220.46±5.57a317.29±7.34a7.68±0.325.45±0.25a试验组201.33±6.78b295.41±8.09b8.31±0.435.02±0.21b21对照组228.35±9.23a506.83±10.25a7.04±0.34b5.61±0.22a试验组202.38±7.31b470.18±11.83b7.67±0.31a5.12±0.35b28对照组235.62±6.05a665.34±13.62a6.53±0.37b5.77±0.28a试验组207.09±8.48b624.57±10.56b7.39±0.32a5.23±0.33b35对照组240.78±8.78A381.36±6.73A5.91±0.30b5.70±0.27a试验组212.30±6.57B345.09±9.61B6.62±0.34a5.05±0.29b42对照组242.92±7.21A278.25±6.29A5.78±0.28b5.87±0.34a试验组211.99±8.32B243.63±8.72B6.53±0.35a5.12±0.27b2.4霉变饲料对肉鸡组织病理变化的影响（见图1~图3）由图1可知，对照组肉鸡第1~6 w肠道均正常。饲喂霉变饲料组肉鸡肠道第1 w有水肿，第2 w出现炎症，并伴有绒毛坏死，第3 w出现水肿和炎症，第4 w炎症，并伴有坏死，第5 w和第6 w有炎症。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.009.F001图1肠道组织切片由图2可知，对照组肉鸡第1~6 w肝脏均正常。饲喂霉变饲料组肉鸡肝脏第1 w由水肿，第2 w有炎症+，第3 w有炎症+和水肿，第4 w有炎症++，第5 w有出血和坏死，第6 w有出血和轻度纤维化。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.009.F002图2肝脏组织切片由图3可知，对照组肉鸡第1~6 w心脏均正常。饲喂霉变饲料组肉鸡心脏第1 w有炎症，第2 w有炎症、心肌断裂，第3 w有水肿，第4 w有炎症和水肿，第5 w有炎症和水肿，第6 w有炎症。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.009.F003图3心脏组织切片3讨论3.1霉变饲料对肉鸡生长性能的影响杨军[4]研究发现，用不同比例自然霉变玉米替代正常玉米饲喂肉鸡影响生长性能。肖丹等[5]报道，日粮中添加50 μg/kg黄曲霉毒素B1，肉鸡日增重和料重比无显著性变化。左瑞雨等[6]研究发现，饲粮中添加400 μg/kg黄曲霉毒素B1，肉鸡的日增重、采食量和料重比均显著降低。田莎等[7]报道，添加0.2 mg/kg AFB1、1.0 mg/kg T-2毒素可以显著降低22~42日龄肉鸡末重和平均日增重，显著提高1~21日龄料重比。出现不同结果的原因是饲料霉菌毒素含量和种类不同。多种霉菌毒素同时存在可以降低动物生长性能[8-9]。本试验所用饲料同时含有多种霉菌毒素，肉鸡的生长性能从第2 w开始显著降低（P0.01）。3.2霉变饲料对肉鸡血清抗氧化能力的影响霉变饲料中的黄曲霉毒素和赤霉烯酮能够引起机体氧化应激和氧化性损伤[10-11]。但是，王方圆[12]研究表明，呕吐毒素对肉鸡血清SOD、GSH-Px活性和MDA含量均无显著影响（P0.05）。表明不同毒素在抗氧化性能方面有不同结果，单一呕吐毒素对肉鸡抗氧化性能无显著影响，多种霉菌毒素加剧动物的氧化应激[13]。本试验饲喂霉变饲料的肉鸡从第2 w起氧化应激显著。3.3霉变饲料对肉鸡组织病理变化的影响黄曲霉毒素进入动物体内后会引起肝脏损伤[14]。朱于斌[15]研究发现，玉米赤霉烯酮、呕吐毒素均能够造成小鼠肝脏和肾脏细胞凋亡，两种毒素联合会导致小鼠肝脏和肾脏出现组织病理学损伤。采食呕吐毒素含量7.54 mg/kg的饲料3 w影响肉鸡十二指肠与空肠的形态[16]。呕吐毒素可以通过抑制肠上皮细胞的蛋白质合成造成肠道损伤[17]。本试验中，黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素联合作用，第1 w肉鸡的肝脏、肠道、心脏就出现组织病理学变化，随着日龄的增长，组织病理学损伤逐渐加剧。4结论霉变饲料通常含有1种或多种霉菌毒素。饲喂多种霉菌毒素并存的霉变饲料会降低肉鸡的生产性能、抗氧化性能，并导致肉鸡肠道、肝脏、心脏不同程度的损伤，且随着日龄的增长，霉变饲料对肉鸡的危害逐渐加剧。