精氨酸是一种条件性必需氨基酸,具有多种生理功能,在母羊妊娠阶段发挥重要作用,对于提高母体羊水量、胎儿体重、产羔率、改善胚胎和羔羊存活率等均有很好的效果。N-氨甲基谷氨酰胺(NCG)作为精氨酸的中间代谢产物N-乙酰谷氨酸(NAG)类似物,可以促进精氨酸内源合成,在动物机体中可发挥促进血管生成、改善氮代谢、促进泌乳和生长、增强动物繁殖和免疫力等功能[1]。2014年农业农村部已将NCG列入饲料添加剂目录。研究表明,在日粮中添加NCG可以增加多胎动物(猪和鼠)的窝产仔数和初生重[2-3]。试验表明,相同条件下,NCG添加量仅为精氨酸的1/20~1/10就会达到同样的效果[4],且NCG成本低于Arg[5]。孙玲伟等[6]发现,在妊娠期母羊日粮中适量添加NCG可以促进胎儿在母体内的生长,并为母羊提供营养。吴宝升等[7-9]、桑丹等[10]、赵宏丽等[11]、谷英[12]和孙海洲等[13]研究发现,日粮中添加NCG能够有效提高鄂尔多斯细毛妊娠前期母羊血浆、尿囊液、羊水和胎儿血浆中Arg家族氨基酸的含量,对胎儿早期健康生长发挥重要作用。本试验根据滩羊繁殖生理特点和不同阶段营养需求规律,研究不同添加剂量NCG对改善滩母羊空怀期、妊娠期和产后哺乳期营养状况及尽早恢复生理周期等繁殖性能的影响,探讨NCG对经产母羊妊娠期血液生化指标和羔羊生长性能的影响,为进一步提高滩羊母羊繁殖率、羔羊断奶成活率,增加经济、社会效益,助推滩羊产业高质量发展提供参考。1材料与方法1.1试验材料与仪器设备N-氨甲基谷氨酰胺(NCG)购自湖南百康生物工程有限公司,浓度97%,白色结晶性粉末。华卫德朗DR-200 BS酶标分析仪(无锡华卫德朗仪器有限公司);A6半自动生化仪(北京松上技术有限公司)。1.2试验设计及饲养管理试验在宁夏灵诚农牧科技公司某养殖场进行,选取体重、年龄、胎次相近、体况中等的空怀母滩羊200只作为试验动物。试验母羊采取同期诱导发情处理后,采用完全随机设计,分为4个试验组,每组50只,每1只羊为1个重复。饲养试验分空怀期(配种前45 d开始至配种)、妊娠期(妊娠前45 d和预产前45 d开始至产羔期两个阶段),共3个阶段。空怀期:对照组(CK,基础日粮)、试验1组(基础日粮+NCG 0.514 g/d DM)、试验2组(基础日粮+NCG 1.027 g/d DM)、试验3组(基础日粮+NCG 2.055 g/d DM)。妊娠期:对照组(CK,基础饲粮)、试验1组(基础日粮+NCG 0.593 g/d DM)、试验2组(基础日粮+NCG 1.195 g/d DM)、试验3组(基础日粮+NCG 2.369 g/d DM)。全混合日粮构成:全株玉米青贮+优质苜蓿干草+胡萝卜(适量)+精补料(分组),母羊空怀期日粮精粗比为55∶45,妊娠期日粮精粗比为60∶40。试验日粮组成及营养水平(见表1)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.11.001.T001表1试验日粮组成及营养水平项目空怀期妊娠期粗饲料/%全株玉米青贮27.50(50.0)30.0(50.0)干玉米秸秆16.50(30.0)18.0(30.0)苜蓿干草5.50(10.0)6.0(10.0)胡萝卜5.50(10.0)6.0(10.0)精料补充料/%玉米15.75(35.0)21.0(52.5)小麦麸4.50(10.0)5.0(12.5)脂肪粉2.25(5.0)—玉米油2.25(5.0)—玉米胚芽粕3.38(7.5)3.0(7.5)全脂大豆3.37(7.5)—棉籽粕3.38(7.5)2.0(5.0)胡麻饼3.37(7.5)2.0(5.0)玉米DDGS2.25(5.0)3.0(7.5)枸杞籽粉2.25(5.0)2.0(5.0)肉羊预混料2.25(5.0)2.0(5.0)合计100.00100.00营养水平DM/%63.9363.33ME/(MJ/kg)10.208.90CP/%10.2011.51NDF/%79.6670.60ADF/%43.1440.85Ca/%0.470.71P/%0.380.41注:1.预混料为每千克日粮提供:VA 50 000 IU、VD3 2 000 IU、VE 240 mg、Se 6.00 mg、I 0.40 mg、Co 0.17 mg、Cu 11.50 mg、Zn 24.00 mg、Mn 15.20 mg、Fe 0.03 mg、抗氧化剂及载体等。2.营养水平均为计算值。供试4组添加NCG分别配制成精补料中5%肉羊预混料,与其他原料混合加工制成繁殖母羊精料补充料。精、粗饲料按拟设计配方比例投置全混合日粮机组(TMR)调制混匀后,每日饲喂3次,预试期15 d,正式试验期180 d。试验期所有供试羊只在羊舍内设有自动温控饮水装置,自由饮水。其他饲养管理与羊舍环境条件一致。1.3测定指标及方法1.3.1母羊繁殖及羔羊生长性能记录母羊的发情数、配种数、受胎数;产羔时间、产羔数及产双羔数;羔羊的初生重、断奶重;参考文献[14]的方法计算母羊受胎率和繁殖率、羔羊成活率。受胎率=受胎母羊数/处理母羊数×100%(1)繁殖率=产羔羊数/受胎母羊数×100%(2)双羔率=产双羔母羊数/分娩母羊数×100%(3)羔羊成活率=活羔羊数/产羔总数×100%(4)1.3.2妊娠母羊血液生理生化指标于同期发情处理前、配妊第45、95、115、140 d,颈静脉采集母体血样10 mL,装于涂有肝素钠的离心管中,4 ℃、3 000 r/min离心15 min,制备血浆样本,-20 ℃冷冻保存。测定孕酮(P)、皮质醇(COR)、促黄体激素(LH)、类胰岛素生长因子(IGF-1)、胰岛素(INS)、促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)、一氧化氮(NO)、总氨基酸(T-AA)、胎盘催乳素(HPL)含量、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性等生化指标。1.4数据统计与分析数据采用SPSS 20软件进行单因素方差分析,结果以“平均值±标准差”表示,P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1NCG对滩羊母羊繁殖性能的影响(见表2)由表2可知,试验1、2和3组母羊的受胎率和繁殖率与对照组相比均有提高,受胎率分别提高9.75%、7.32%和4.88%,繁殖率分别提高11.82%、12.23%和6.18%。试验1、2和3组产双羔率较对照组分别提高112.57%、210.55%和122.41%,2组显著高于对照组(P0.05)。试验1、2和3组羔羊成活率与对照组相比分别提高7.32%、5.30%、2.94%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.11.001.T002表2NCG对滩羊母羊繁殖性能的影响组别母羊数/只受胎数/只羔羊数/只受胎率/%繁殖率/%双羔率/%羔羊成活率/%CK组50414482107.327.32b93.18试验1组50455490120.0015.56ab100.00试验2组50445388120.4522.73a98.12试验3组50434986113.9516.28ab95.92注:同列数据肩标字母相同或无字母表示差异不显著(P>0.05),字母不同表示差异显著(P<0.05);下表同。2.2NCG对滩羊羔羊生长发育的影响(见表3)由表3可知,与对照组相比,试验1组、2组和3组羔羊的平均初生重显著提高(P0.05)。试验1、2和3组羔羊断奶活重与对照组相比均有增高的趋势,分别比对照组提高4.84%、9.84%和3.35%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.11.001.T003表3NCG对滩羊羔羊发育的影响项目母羔初生重公羔初生重平均初生重断奶重CK组4.51b4.55b4.53b18.19试验1组4.41b4.90a4.71a19.07试验2组4.54b4.63a4.64a19.98试验3组4.85a4.96a4.91a18.80SEM0.1910.1290.1140.495P值0.000 30.000 10.000 10.096 0kg2.3NCG对滩羊母羊血液生理生化指标的影响(见表4~表7)由表4可知,妊娠第45 d,试验1、2和3组母羊血清中IGF-1含量显著高与对照组(P0.05),试验1组母羊血清中LH含量显著高与对照组(P0.05),试验1和2组母羊血清中NO含量显著高于对照组(P0.05),试验2组母羊血清中iNOS活性和COR含量显著高于对照组(P0.05),试验2和3组母羊血清中精胺含量显著高于对照组(P0.05)。由表5可知,妊娠第90 d,与对照组相比,试验3组母羊T-AA含量显著高于对照组(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.11.001.T004表4NCG对滩羊母羊妊娠45 d血液生理生化指标的影响项目NO/(μmol/L)iNOS/(U/mL)COR/(μg/L)T-AA/(μmol/L)E2/(μg/L)FSH/(IU/L)LH/(IU/L)HPL/(μg/L)P/(μg/L)INS/(mIU/L)IGF-1/(μg/L)精胺/(μmol/L)CK组27.63b11.93b147.85b2.2825.7710.5213.37a5.4025.4715.15156.30b0.29c试验1组38.83a13.31ab151.88b2.3317.2310.608.06b6.6323.8012.43197.38a0.41bc试验2组38.48a14.29a214.38a2.6119.1710.9211.87ab6.4922.3512.10188.44a0.68a试验3组33.07b13.7ab153.58b2.4415.7010.567.55b5.5920.0912.18187.65a0.56abSEM3.460.6115.930.123.590.971.390.442.051.957.500.08P值0.010.130.030.250.250.990.020.160.380.650.010.0210.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.11.001.T005表5NCG对滩羊母羊妊娠90 d血液生理生化指标的影响项目NO/(μmol/L)iNOS/(U/mL)COR/(mg/L)T-AA/(μmol/L)E2/(μg/L)FSH/(IU/L)LH/(IU/L)HPL/(μg/L)P/(μg/L)INS/(mIU/L)IGF-1/(μg/L)精胺/(μmol/L)CK组33.4312.88135.532.68b34.2512.1113.636.6821.8716.52183.540.42试验1组36.9114.29176.082.85ab30.059.9811.227.0321.9816.81191.190.58试验2组42.5114.55151.422.92ab20.5110.2911.007.4920.8113.28218.220.62试验3组36.4915.68162.482.98a21.4010.0811.906.8418.3115.50202.730.57SEM4.661.4031.650.085.601.161.330.602.201.1914.270.07P值0.700.580.830.060.270.540.510.790.620.190.370.22由表6可知,母羊妊娠第115 d,试验1、2和3组母羊血清中的精胺含量显著高于对照组(P0.05);试验2和3组母羊血清中E2含量显著高于对照组(P0.05)。由表7可知,母羊妊娠第140 d,试验1、2和3组母羊血清中NO含量显著高于对照组(P0.05)。试验1和2组母羊血清中iNOS活性显著高于对照组(P0.05),试验2组母羊血清中COR、HPL含量显著高于对照组(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.11.001.T006表6NCG对滩羊母羊妊娠115 d血液生理生化指标的影响项目NO/(μmol/L)iNOS/(U/mL)COR/(μg/L)T-AA/(μmol/L)E2/(μg/L)FSH/(IU/L)LH/(IU/L)HP/(μg/L)P/(μg/L)INS/(mIU/L)IGF-1/(μg/L)精胺/(μmol/L)CK组37.7110.67177.892.6432.79a12.9415.376.1916.2515.22224.830.36c试验1组39.0712.17220.852.8920.14ab10.2613.296.2115.9313.21247.270.57a试验2组44.4512.47229.842.9718.09b10.4812.646.6115.4913.10214.290.54ab试验3组40.1011.40189.012.7617.51b11.9814.466.5513.7615.18229.400.51abSEM4.320.6019.520.094.441.140.940.281.410.9813.530.03P值0.790.280.220.090.090.330.210.610.620.280.45010.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.11.001.T007表7NCG对滩羊母羊妊娠140 d血液生理生化指标的影响项目NO/(μmol/L)iNOS/(U/mL)COR/(μg/L)T-AA/(μmol/L)E2/(μg/L)FSH/(IU/L)LH/(IU/L)HPL/(μg/L)P/(μg/L)INS/(mIU/L)IGF-1/(μg/L)精胺/(μmol/L)CK组29.36b9.01c71.44b2.4038.7211.4714.044.26b31.7718.51146.990.40c试验1组41.24a14.58a86.68b2.4732.3311.1912.655.16b26.9718.09150.220.73ab试验2组32.94a13.42ab202.12a2.4828.6110.9610.956.59a29.9414.68161.800.81a试验3组37.35a10.90c106.91b2.5727.2310.8211.025.00b29.4014.64162.160.74abSEM4.340.9915.060.074.441.081.260.291.811.437.760.05P值0.040.02.00010.400.090.980.3000.350.150.4503讨论3.1NCG对滩羊母羊繁殖性能的影响NCG作为精氨酸内源合成途径中关键酶CPS-1的有效激活剂,能促进精氨酸的内源合成[15]。补充NCG可以通过促进精氨酸的合成改善繁殖性能[16]。本研究结果表明,在经产母羊日粮中添加约1.00 g/d NCG可以显著提高滩母羊繁殖率和产双羔率。3.2NCG对滩羊羔羊生长发育的影响NCG已被证明可发挥与精氨酸类似的促进母猪泌乳量和仔猪初生窝重及断奶窝重等作用。本研究结果表明,妊娠母羊日粮中适量添加NCG后,羔羊平均初生重显著提高,羔羊断奶活重也有增高趋势。试验结果与江雪梅等[17]在妊娠母猪饲粮中添加NCG或1%精氨酸提高活仔数和初生窝重结果相似。3.3NCG对滩羊母羊血液生理生化指标的影响精氨酸是合成NO和多胺的共同底物。研究表明,NO和多胺不仅是胎盘血管生成和胚胎发育的重要调控因子,而且是胎盘和胎儿生长的重要调控因子[18],日粮添加NCG能通过提高精氨酸及其代谢相关氨基酸的浓度促进机体NO和多胺产生。本研究中,各组母羊在妊娠45 d时血液中NO浓度均显著增高,IGF-1浓度显著升高。在妊娠后期试验各组母羊血液中精氨浓度、NO浓度均显著升高,试验1组、试验2组母羊妊娠后期显著提高iNOS的含量。NO和iNOS是机体内由精氨酸促进生成,具有调节血管舒张力和增加血管通透性的功能。本研究结果与刘星达等[19]在日粮中添加NCG提高母猪血浆精氨酸浓度,促进内源精氨酸的合成相似;与江雪梅等[17]在饲料添加NCG能提高母猪血浆中iNOS活性、NO含量结果相似。血液中生长激素增高促进胎儿的生长,而催乳素增高有可能有促进母猪乳房发育的功能。本研究表明,母羊妊娠第115 d、140 d时,血清催乳素(HPL)含量有上升趋势,在140 d是试验2组母羊HPL含量显著高于其他试验组,从对羔羊断奶活重的影响相比对照组未达到显著水平,与赖玉娇等[20]、生冉等[21]报道相似。4结论在滩羊母羊饲粮中添加1.027 g/d DM NCG可以显著提高繁殖率和产双羔率。添加NCG能够提高滩羊母羊血浆中iNOS、NO含量,提高羔羊的生长性能和健康程度。
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