构树（Broussonetia papyrifera）别名为楮树、构桃树、沙纸树、构乳树等，属于桑科构树属落叶乔木[1-2]。构树叶是优质的粗蛋白饲料资源，其粗蛋白含量可与苜蓿（Medicago sativa）相媲美，含有丰富的氨基酸、维生素和微量元素等营养成分，是生产加工动物饲料优质绿色原料[3]。2015年，构树被国务院扶贫办列入十大精准扶贫工程备受关注。近年来，我国大规模推进构树产业，使构树产业进入新阶段，也为构树作为粗饲料的推广带来机遇[4-5]。由于构树中蛋白质分子大，结构复杂且纤维含量较高，直接饲喂畜禽不利于消化吸收，饲料消化率降低，导致生长缓慢。在生产实践中，通常通过添加青贮添加剂来改善青贮品质。司炳文等[6]研究表明，在杂交构树中添加糖蜜、酶菌复合剂及防腐剂青贮可以明显改善其发酵品质和营养价值。因此，本试验通过单独或组合添加青贮添加剂，探究其对全株构树青贮饲料发酵品质和营养成分的影响，筛选出合适的青贮添加剂来改善全株构树的青贮品质，为构树在开发新型饲料上的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料全株构树采收于河南省科学院杂交构树种植科研示范基地，株高120 cm，由青贮收割机统一收割粉碎，留茬高度15~20 cm，切割长度2~3 cm。植物乳杆菌、产朊假丝酵母、枯草芽孢杆菌，平均活菌数≥1.0×108 CFU/mL，均由河南省科学院生物研究所有限公司提供；酸性纤维素酶主要成分为纤维素酶，活性≥20 000 U/g，购自山东苏柯汉生物工程股份有限公司；糖蜜主要成分为蔗糖和葡萄糖，含糖量约50%，市售。1.2试验设计将全株构树切短至2~3 cm，经过自然晾晒至含水量约65%时，进行青贮制作。试验设5个处理组，每个处理组3个重复，分别为对照组、添加10%糖蜜组（试验Ⅰ组）、添加10%糖蜜＋8%植物乳杆菌+1%纤维素酶组（试验Ⅱ组）、添加10%糖蜜＋4%植物乳杆菌+4%产朊假丝酵母菌+1%纤维素酶组（试验Ⅲ组）和添加10%糖蜜＋4%植物乳杆菌+4%枯草芽孢杆菌+1%纤维素酶组（试验Ⅳ组）。糖蜜和纤维素酶按质量比添加，菌剂按质量体积比添加。青贮处理后装入带有放气阀的聚乙烯袋，每袋300 g，室温下发酵50 d后开封取样。1.3试验方法青贮袋开启后，去除距离开口3 cm处的青贮饲料，将剩余饲料混合均匀后，取20 g放入盛有180 mL蒸馏水的三角瓶内，放入冰箱4 ℃下浸提24 h，四层纱布过滤，滤液-20 ℃冷藏备用。滤液用来测定pH值、氨态氮（AN）、乳酸（LA）、乙酸（AA）、丙酸（PA）和丁酸（BA）。收集剩余青贮饲料于60 ℃烘箱内烘干，进行干物质（DM）、总氮（TN）、粗蛋白质（CP）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）和酸性洗涤木质素（ADL）的测定。1.4测定指标及方法1.4.1感官评定采用德国农业协会（DLG）标准[7]，根据气味、质地、色泽等对青贮质量进行感官评定，评定等级分为优、良、中、下。1.4.2发酵品质pH值采用雷磁E-201F测定；氨态氮采用苯酚-次氯酸钠比色法[8]，计算氨态氮与总氮的比值（AN/TN）；有机酸用高效液相色谱仪（日本岛津）测定。1.4.3营养成分将收集的样品置于65 ℃烘箱中烘60 h，测定干物质含量。采用范氏纤维（Van Soest）[9]测定中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维和酸性洗涤木质素的含量；粗蛋白、酸溶蛋白（acid soluble protein）和总氮采用凯氏定氮仪法[10]测定。1.5数据统计与分析数据采用Excel 2020整理，采用SPSS 22.0进行单因素方差分析，采用Duncan's法进行多重比较，结果以“平均数±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同添加剂对全株构树青贮饲料感官评定的影响（见表1）由表1可知，各试验组质地、色泽均呈现柔软松散、暗绿色。对照组质地略有黏性、色泽呈现暗绿色。试验Ⅱ和Ⅲ组气味均比对照组酸香味浓，总评分最高。试验Ⅳ组酸香味较弱且有怪味，评分较低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.024.T001表1不同添加剂对全株构树青贮饲料感官评定的影响组别质地色泽气味总评分等级对照组柔软、略黏暗绿色酸味较弱14良试验Ⅰ组柔软、松散暗绿色酸味淡15良试验Ⅱ组柔软、松散暗绿色酸香味19优试验Ⅲ组柔软、松散暗绿色酸香味20优试验Ⅳ组柔软、松散暗绿色酸香味弱、有怪味14良2.2不同添加剂对全株构树青贮饲料发酵品质的影响（见表2）由表2可知，各试验组间pH值差异均不显著（P0.05），但对照组pH值和氨态氮/总量均显著高于试验组（P0.05），且以试验Ⅲ组最低。各试验组酸溶蛋白含量均显著高于对照组（P0.05），且以试验Ⅲ组最高。各试验组间乳酸含量均显著高于对照组（P0.05），且以试验Ⅲ组乳酸含量最高。各试验组乙酸含量均显著低于对照组（P0.05）。试验Ⅱ和Ⅲ组丙酸含量显著低于其他各处理组（P0.05），且各试验组均显著低于对照组（P0.05）；各处理组均未检测到丁酸。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.024.T002表2不同添加剂对全株构树青贮饲料发酵品质的影响组别pH值酸溶蛋白/%氨态氮/总氮/%乳酸/%乙酸/%丙酸/%对照组5.03±0.01a7.49±0.01c5.54±0.00a5.49±0.14d5.74±0.06a3.13±0.03a试验Ⅰ组4.23±0.07b8.51±0.55b3.31±0.14bc9.05±0.18c4.49±0.07b2.70±0.15b试验Ⅱ组4.17±0.02b8.47±034b3.48±0.10b9.94±0.35ab4.24±0.43b2.37±0.01c试验Ⅲ组4.16±0.01b9.46±0.33a2.87±0.30c10.11±0.05a4.45±0.03b2.44±0.01c试验Ⅳ组4.17±0.04b9.21±0.20ab3.39±0.33bc9.38±0.33bc4.67±0.02b2.69±0.04b注：同列数据肩标不同表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.3不同添加剂对全株构树青贮饲料营养成分的影响（见表3）由表3可知，各试验组DM含量均显著高于对照组（P0.05）；试验Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组粗蛋白含量显著高于对照组（P0.05）；各试验组中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量显著低于对照组（P0.05），均以试验Ⅲ组含量最低；试验Ⅲ和Ⅳ组酸性洗涤木质素含量显著低于对照组、试验Ⅰ和Ⅱ组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.024.T003表3不同添加剂对全株构树青贮饲料营养成分的影响组别干物质粗蛋白中性洗涤纤维酸性洗涤纤维酸性洗涤木质素对照组32.81±0.57b17.48±0.47b35.50±0.01a23.37±0.57a3.02±0.41a试验Ⅰ组35.76±0.45a18.07±0.40a31.64±0.99b20.20±0.37b3.00±0.11a试验Ⅱ组36.54±0.88a18.48±0.14a30.83±0.52bc19.64±0.30bc2.51±0.08a试验Ⅲ组35.83±0.83a18.97±0.38a28.12±0.51d18.63±0.06d2.25±0.21b试验Ⅳ组35.97±0.44a18.74±0.33a29.38±0.34cd18.86±0.17cd2.29±0.25b%3讨论3.1不同添加剂对全株构树青贮饲料感官评定的影响青贮饲料发酵质量直接影响动物生理功能、生产性能和养殖户的经济效益。因此，青贮饲料的品质评定尤其重要。感官评定是评价青贮饲料质量最直接、快捷，最简单的方法[11]。本试验中添加糖蜜、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母菌和纤维素酶进行青贮发酵，添加糖蜜、植物乳杆菌与纤维素酶组和添加糖蜜、植物乳杆菌、产朊假丝酵母菌与纤维素酶组得分较高，等级为优；无添加、添加糖蜜组和添加糖蜜、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌与纤维素酶组得分较低，等级为良。不同添加剂单独添加或组合添加对全株构树青贮饲料感官品质影响不同，以糖蜜、植物乳杆菌、酵母菌和纤维素酶组合添加效果较佳。3.2不同添加剂对全株构树青贮饲料发酵品质的影响pH值是评定青贮饲料质量的重要指标[12]。pH值低表明发酵品质好，有利于抑制有害微生物活性，减少蛋白质降解产生的损失，抑制产生较多的乙酸和丁酸等物质[13]，更有利于青贮饲料保存。优质青贮饲料pH值通常在4.2以下，4.8以上则认为发酵品质较差，4.2~4.8之间为良好[14]。本试验中，各添加剂组pH值均低于4.2，且低于对照组。饲料中的酸溶蛋白主要包括小分子肽和游离氨基酸，很易被畜禽消化吸收，酸溶蛋白的含量可作为衡量饲料中粗蛋白质量品质的指标，且酸溶蛋白在构树青贮发酵方面研究报道较少[15]。本试验中，各添加剂处理组酸溶蛋白含量均显著高于对照组，表明添加糖蜜或菌酶复合使用可以提高酸溶蛋白含量，改善全株构树青贮饲料发酵品质。氨态氮含量是反映青贮饲料发酵过程中蛋白质降解程度的重要指标，其含量越低说明蛋白降解越少，青贮饲料发酵品质越好[16]。董志浩等[17]研究表明，青贮桑叶中添加乳酸菌和发酵底物可以降低氨态氮/总氮比例，提高干物质含量。本试验中，各添加剂处理组氨态氮/总氮比例显著低于对照组，可能是添加糖蜜为乳酸菌提供更多发酵底物，而添加植物乳杆菌可促进乳酸菌快速繁殖，产生大量乳酸，降低青贮饲料pH值，从而抑制有害微生物对蛋白质降解。青贮饲料发酵过程会产生乳酸、乙酸、丙酸和丁酸，乳酸占比越大越好，而丁酸所占比例越小越好[18]。本试验中，各添加剂处理组乳酸含量显著高于对照组，乙酸和丙酸含量显著低于对照组，可能是糖蜜和植物乳杆菌的添加使青贮饲料获得足够发酵底物，同时植物乳杆菌的添加使乳酸菌快速繁殖、产生更多的乳酸、降低pH值，从而抑制有害菌生长。3.3不同添加剂对全株构树青贮饲料营养成分的影响DM和CP含量是评价青贮饲料营养成分的重要指标[19-20]。本试验中，各添加剂处理组DM含量均高于对照组，且以混合添加糖蜜和植物乳杆菌组合添加组DM含量最高，可能是添加糖蜜和植物乳杆菌可以补充发酵底物，增加乳酸菌的数量，加速乳酸菌繁殖，产生更多乳酸，迅速降低pH值，抑制有害微生物的繁殖，从而减少营养物质损失；而其他试验组因添加酵母菌和枯草芽孢杆菌也会消耗部分营养物质，因此DM含量较混合添加糖蜜和植物乳杆菌组合添加组稍低，与黄秋连等[21]研究结果一致。本试验中，各添加剂组CP含量均高于对照组，且以添加糖蜜、植物乳杆菌、产朊假丝酵母菌与纤维素酶组CP含量最高，可能是由于添加植物乳杆菌促进优势乳酸菌菌群快速繁殖，降低青贮饲料pH值，从而抑制有害微生物对蛋白质分解；且产朊假丝酵母菌发酵初期大量繁殖，可产生部分菌体蛋白，从而提高青贮饲料CP含量。NDF和ADF是反映纤维品质的指标。ADF与动物消化率呈负相关，是指示饲料能量的关键，含量越低，代表饲料消化率越高，饲用价值也越大[22]。ADL不能被畜禽消化吸收。熊罗英等[23]研究表明，添加筛选的菌株发酵构树叶，可以降低粗纤维含量。Colombatto等[24]研究表明，添加纤维素酶可以降低ADF含量。本试验中，添加剂各处理组显著降低全株构树青贮饲料ADF和NDF含量，且添加纤维素酶各处理组ADF和NDF含量较低，可能是纤维素酶有利于分解植物细胞壁，从而降低饲料中纤维含量；也可能是低pH值环境下促进细胞壁的酸分解。本试验中，组合添加两种菌株和纤维素酶可以显著降低青贮饲料的ADL含量，可能是菌株组合效应产生更多有益菌群，加之纤维素酶对纤维素的降解作用，降低了ADL含量。4结论本试验中，添加不同青贮添加剂均在不同程度上改善了全株构树青贮饲料的发酵品质，降低了营养物质的损失。综合考虑，以同时添加糖蜜、植物乳杆菌、产朊假丝酵母菌和纤维素酶效果最佳。