竹叶提取物具有抗氧化和增强机体免疫力的生物学功能[1-4]。研究表明，添加2 g/kg竹叶提取物可以提高肉鸡生产性能，激活Nrf2信号途径，提高抗氧化能力，减轻鸡胸肉脂质氧化[5]。日粮中添加竹叶提取物30 g/d能够提高奶牛机体免疫和抗氧化性能，提高奶产量和奶品质[6-7]。竹叶提取物能够显著提高肝脏细胞超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，降低丙二醛（MDA）含量，降低氧化应激引起的肝脏损伤[4]，并且以剂量依赖的方式影响核转录因子-κB（NF-κB）信号通路，抑制肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）等基因的表达，从而起到免疫调节作用[8-9]。因此，本试验探究日粮中添加不同剂量竹叶提取物对肉牛生长性能、营养物质表观消化率以及血清抗氧化和免疫指标的影响，为其在肉牛生产中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料本试验所用竹叶提取物由四川裕沣商贸有限公司提供，其组分包括总黄酮（41.20%）、粗蛋白质（13.20%）、水溶性多糖（15.40%）、灰分（20.50%）及其他活性成分（9.70%）。1.2试验设计本试验采用单因素完全随机设计，将24头体重为（259.3±12.17）kg西门塔尔杂交公牛分为4组，每组6头牛，每个重复1头。参照《肉牛饲养标准》（NY/T 815—2004）[10]配制日粮，基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.003.T001表1基础日粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米26.50综合净能/(MJ/kg)5.11麦麸3.50粗蛋白/%12.00豆粕2.00酸性洗涤纤维/%27.55棉粕5.30中性洗涤纤维/%47.77尿素0.20乙醚浸出物/%2.32大豆油0.20钙/%0.73碳酸钙0.70磷/%0.48磷酸氢钙0.20硫酸钠0.20小苏打0.40氯化钠0.50预混料0.30白酒糟30.00皇竹草青贮30.00注：预混料为每千克日粮提供：VA 8 000 IU、VD3 1 000 IU、VE 60 IU、铁 50 mg、铜 10 mg、锌 60 mg、锰 40 mg、硒 0.20 mg、碘 0.20 mg、钴 0.20 mg。4组竹叶提取物的添加量分别为0、40、80和120 g/d。将全混合日粮与竹叶提取物混匀，撒入料槽供牛只采食，保证每天供给的竹叶提取物被完全采食。1.3饲养管理本试验于2020年8至11月在四川巨力农业开发有限公司进行。在将试验牛运进圈舍前，对圈舍和周边环境进行清洁，并使用苯扎氯铵消毒。肉牛进场后，对所有试验用牛皮下注射伊维菌素驱虫，待动物情况稳定后预试期，预试期14 d。24头试验牛头对头双向排列饲喂，每头牛所占面积为3.0 m2。根据预试期牛的采食量预估并供给全混合日粮，保证料槽中略有剩料。每天8：00和17：00各饲喂1次。试验期间牛自由采食，自由饮水。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能正式试验第1 d和90 d晨喂前对所有试验牛只进行空腹称重，用于计算平均日增重。正式试验开始后，每天记录每头牛的投料量和剩料量，以此计算平均日干物质采食量。平均日增重(ADG)=(末重-初重)/90(1)平均日干物质采食量(DMI)=每头牛的总干物质采食量/90(2)料重比(F/G)=DMI/ADG(3)1.4.2营养物质表观消化率在正式试验开始后，每隔2 w采集试验TMR日粮样品约500 g，使用密封袋保存，-20 °C冰箱保存备测。利用全收粪法于正式试验的第86~90 d收集试验牛粪便并称重，按总鲜重的10%取样。每100 g粪样加20 mL 10% H2SO4混匀，-20 ℃保存，用于干物质（DM）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）以及粗蛋白质（CP）、钙（Ca）和磷（P）等营养物质含量测定。DM、粗灰分（Ash）、粗脂肪（EE）含量的测定参考AOAC（2000）[11]方法；CP含量参照GB/T 6432—1994[12]方法，采用FOSS全自动凯氏定氮仪进行测定；ADF和NDF含量采用Van Soest等[13]的方法进行测定；Ca的含量采用高锰酸钾法进行测定（GB/T 6436—2002）[14]；P的含量采用钒钼酸铵比色法测定（GB/T 6437—2002）[15]。营养物质表观消化率=[采食的该养分的量－粪中该养分的量]/采食该养分的量×100%(4)1.4.3血清抗氧化和免疫指标在正式试验结束的清晨，空腹前腔静脉采集血样，3 000 r/min离心10 min，静置10 min，利用移液枪将血清分装于0.5 mL的Ep管中，-20 ℃冻存备测。采用硫代巴比妥酸法测定血清中MDA含量，采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，采用ABTS法测定总抗氧化能力（T-AOC），采用微量酶标法测定GSH-Px活性。采用ELISA法测定细胞因子白介素-1β（IL-1β）、白介素-2（IL-2）、白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等含量。采用双抗体夹心法测定免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）含量。所用试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，具体的指标测定操作方法见说明书。1.5数据统计与分析采用SAS 9.4对数据进行单因素方差分析，采用TUKEY法进行多重比较，结果以平均值和总标准误（SEM）表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1竹叶提取物对肉牛生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，添加80 g/d竹叶提取物可以显著提高肉牛平均日干物质采食量（P0.05），且呈二次曲线变化（P0.05）。竹叶提取物对肉牛的末重、平均日增重以及料重比无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.003.T002表2竹叶提取物对肉牛生长性能的影响项目竹叶提取物添加量/(g/d)SEMP值04080120处理线性二次初重/kg258.50257.40259.30261.4012.3300.8840.7850.865末重/kg398.90399.60405.10400.0015.4500.7830.5430.133平均日增重/(kg/d)1.561.581.651.540.0320.3240.3420.087平均日干物质采食量/(kg/d)9.20b9.36ab10.17a9.82ab0.5430.0330.2330.021料重比5.905.936.176.370.3340.2240.2130.332注：同行数据肩标字母不同表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2竹叶提取物对肉牛营养物质表观消化率的影响（见表3）由表3可知，竹叶提取物对肉牛的DM、CP、NDF、ADF、Ca和P表观消化率均无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.003.T003表3竹叶提取物对肉牛营养物质表观消化率的影响项目竹叶提取物添加量/(g/d)SEMP值04080120处理线性二次DM83.4084.5084.4086.203.240.5850.2240.335CP81.2083.2083.4084.104.360.4580.1070.265NDF65.3065.7066.8068.205.430.2840.1220.432ADF37.5038.5039.4039.303.230.4720.3670.376Ca46.7045.5047.8047.303.230.3820.2320.324P40.2040.3039.6041.203.770.3910.5630.349%2.3竹叶提取物对肉牛血清抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，80和120 g/d竹叶提取物组肉牛血清中SOD、GSH-Px活性和T-AOC显著高于对照组（P0.05），且随添加剂量呈二次曲线变化（P0.001，P=0.024，P0.001）。120 g/d竹叶提取物组肉牛血清T-AOC显著高于80 g/d组（P0.05）。40、80和120 g/d竹叶提取物组血清中MDA含量显著低于对照组（P0.05），且随添加剂量呈二次曲线变化（P0.001）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.003.T004表4竹叶提取物对肉牛血清抗氧化指标的影响项目竹叶提取物添加量/(g/d)SEMP值04080120处理线性二次MDA/(μmol/L)4.30a3.60b3.30b3.20b0.140.0010.0010.001SOD/(U/mL)125.30b129.50b154.30a156.40a9.340.0010.0010.001GSH-Px/(U/mL)157.70b157.90b175.40a178.30a9.440.0340.0130.024T-AOC/(U/mL)12.40c13.50c14.60b15.30a1.120.0110.0010.0012.4竹叶提取物对肉牛血清免疫指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，80和120 g/d竹叶提取物组肉牛血清中IgG和IL-10含量显著升高（P0.05），且随添加剂量呈二次曲线变化（P=0.001，P=0.045）。与对照组相比，竹叶提取物120 g/d组肉牛血清中IL-1β含量显著降低（P0.001），IL-1β含量随添加剂量呈二次曲线变化（P0.001）。与对照组相比，竹叶提取物80和120 g/d组肉牛的血清中TNF-α含量显著降低（P0.05），TNF-α含量随添加剂量的呈线性变化（P0.001）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.12.003.T005表5竹叶提取物对肉牛血清免疫指标的影响项目竹叶提取物添加量/(g/d)SEMP值04080120处理线性二次IgA/(g/L)2.202.102.402.400.120.3320.4530.127IgG/(g/L)20.20b21.40b23.30a23.10a1.230.0320.0140.001IgM/(g/L)2.602.402.502.600.080.3440.2640.421IL-1β/(ng/L)3.50a3.30a3.10ab2.90b0.130.0010.0010.001IL-10/(ng/L)122.40b126.20b134.50a138.50a9.330.0230.0380.045IL-2/(ng/L)25.4026.3026.5026.901.220.7830.2310.564IL-6/(pg/L)89.6090.1091.2092.404.330.4340.5530.763IFN-γ/(ng/L)164.30163.40168.50172.408.780.2320.3450.563TNF-α/(ng/L)45.70a44.40a40.70b41.40b2.240.0240.0010.3323讨论3.1竹叶提取物对肉牛生长性能和营养物质表观消化率的影响黄酮类物质是竹叶提取物的主要活性成分，具有抗氧化、抗菌甚至抗癌等功效，但此前的研究大多集中在细胞[16-17]、小鼠和大鼠上[18-20]，近年来也出现一些竹叶提取物作为饲料添加剂的相关研究[20-22]。栗明月等[6]报道，添加30 g/d竹叶提取物可以提高牛奶的乳糖率、乳蛋白率以及乳脂率，表明竹叶提取物的抗氧化功能可以改善牛奶品质。以肉鸡为研究对象，添加2.0和5.0 g/kg竹叶提取物，可以改善生长性能，且日粮中添加2.0 g/kg竹叶提取物较为适宜[21]。本试验中，添加80 g/d竹叶提取物可以提高肉牛的DMI，与在肉鸡研究中的结果相似。但是，本试验发现，竹叶提取物对肉牛ADG和F/G无显著影响。40~120 g/d竹叶提取物对肉牛日粮营养物质表观消化率均无显著影响。3.2竹叶提取物对肉牛血清抗氧化指标的影响竹叶提取物具有抗氧化和提高机体免疫力功效。苟杨[20]以小鼠为模型进行研究，与对照组相比，低温组（-4 ℃）小鼠血清T-AOC显著下降，MDA含量显著上升，灌注340 mg/kg BW竹叶提取物后，小鼠T-AOC和GSH-Px活性显著升高。添加0.10%和0.20%竹叶提取物组的肉鸡血清中GSH-Px活性分别比对照组提高5.82%和4.90%；添加0.10%、0.20%和0.40%竹叶提取物组的血清MDA含量分别比对照组降低11.18%、14.59%和4.05%[21]。在热应激奶牛日粮中添加1.3 g/kg DM的竹叶提取物可以提高奶牛血清SOD和GSH-Px活性，降低MDA含量[7]。侯昆等[22]报道，添加30 g/d竹叶黄酮14 d后，奶牛血清中MDA含量显著下降，且血清SOD活性有上升的趋势。本试验中，在添加竹叶提取物后，肉牛血清中的SOD、GSH-Px活性以及T-AOC显著升高，MDA含量显著降低。当动物机体产生大量氧自由基而不能及时清除时，会导致机体自由基动态失衡，进一步可造成炎症细胞浸润，产生大量氧化中间产物，导致动物机体的氧化应激。Yu等[23]研究表明，竹叶提取物能够抑制叉头框转录因子FoxO信号通路的启动，并通过Nrf2 α介导抗氧化防御反应，从而缓解HepG2细胞的氧化应激。3.3竹叶提取物对肉牛血清免疫指标的影响B淋巴细胞增殖分化后会产生大量免疫球蛋白，参与体液免疫，帮助机体抵抗细菌和病毒感染。血清中的免疫球蛋白含量可以反映机体的免疫状态和水平[24]。侯昆等[22]报道，添加30 g/d竹叶提取物可以显著提高奶牛血清中IgM、IgA和IgG含量。李义等[7]报道，添加竹叶提取物组奶牛血清IgA含量显著高于对照组，与本试验结果相似。竹叶提取物能够通过调节免疫球蛋白的分泌而调节机体的体液免疫功能。研究表明，添加30 g/d的竹叶黄酮14 d，可以降低奶牛血清中IL-1β和TNF-α等细胞因子含量[22]。添加竹叶提取物可以降低热应激奶牛血清IL-1β含量，与本研究结果相一致。竹叶提取物可以抑制促炎症因子的表达，主要因为caspase-3和NF-κB等核转录因子表达降低[3]；另一方面，奶牛热应激可以显著提高血清IL⁃1β含量，作用于神经递质，抑制瘤胃蠕动，诱发奶牛厌食，降低奶牛采食量和产奶量。因此，本试验中添加80 g/d竹叶提取物组肉牛的采食量较对照组显著提高可能与血清中IL-1β含量降低有关。4结论日粮添加竹叶提取物可以改善肉牛的抗氧化和免疫能力，提高采食量。竹叶提取物在肉牛日粮中适宜的添加剂量为80 g/d。