蒙古马是我国国家级畜禽遗传资源保护品种之一。该马体型矮小、体魄强健，能远涉戈壁荒漠，具有适应性强、耐力好、骑乘速力佳和抗病性佳等优点。因此，该马种作为赛马被广泛养殖在我国内蒙古地区[1-2]。在养殖过程中，抗生素过度滥用会导致药物残留和耐药性问题，影响蒙古马生长性能和健康。“饲料禁抗”政策的全面落地使得抗生素替代品研发与应用工作更为急迫。复合微生态制剂是在发酵、培养和干燥等特殊工艺基础上，研发制作的活菌制剂。具有无残留、绿色安全、调节肠道内菌群平衡、提高饲料消化转化率、促进生长以及提高免疫等多种优势，是一种绿色、安全并且高质量的新型饲料添加剂，可替代抗生素，用于动物饲养过程[3-4]。目前，对于复合微生态制剂的研究，大多数集中于鸡、鸭和猪等畜禽养殖应用中，极少涉及马[5-7]。因此，本试验以蒙古马为研究对象，研究在日粮中添加不同浓度复合微生态制剂对蒙古马生长性能及血清的影响，为该制剂在蒙古马养殖中的推广应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1复合微生态制剂复合微生态制剂为实验室自制，主要由植物乳杆菌、乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌3种微生物复合配置而成。3种微生物体积比例分别为1∶1∶2，经鉴定其活菌总数≥1.0×109 CFU/g，酶活≥600 U/g。其中，枯草芽孢杆菌来源于山东益昊生物科技有限公司，有效活菌数为1 000亿CFU/g左右；乳酸杆菌来源于山东菌乐生物科技有限公司，有效活菌数为100~2 000亿CFU/g；植物乳杆菌来源于山东中科嘉亿生物工程有限公司，有效活菌数≥100亿CFU/g。1.1.2试剂盒白介素2（IL-2）、白介素6（IL-6）ELISA、马免疫球蛋白A（IgA）、总蛋白（TP）、谷草转氨酶（AST）和白蛋白（ALB）检测试剂盒购自上海晶抗生物工程有限公司；过氧化氢酶（CAT）、免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）检测试剂盒购自上海齐源生物科技有限公司；超氧化物歧化酶（T-SOD）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和谷丙转氨酶（ALT）检测试剂盒购自南京卡米洛生物工程有限公司；谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、尿素氮（BUN）、血清总抗氧化能力（T-AOC）和丙二醛（MDA）检测试剂盒购自宁波泰斯拓生物技术有限公司。1.1.3试验仪器全自动酶标仪购自上海寰熙医疗器械有限公司；高速离心机购自美国贝克曼库尔特公司；采血管、采血针和离心管等实验室常规仪器购自沈阳宝康生物工程有限公司。上述实验仪器均由本实验室提供。1.2试验设计选用平均体重为140 kg、平均年龄为6个月的40匹幼龄蒙古马进行单因素随机设计试验，随机分成4组，每组10个重复。各组蒙古马依次饲喂添加0（对照组）、100（试验1组）、500（试验2组）、1 000 mg/kg（试验3组） 复合微生态制剂的基础日粮。试验期21 d。各组试验马饲养管理完全相同。1.3试验日粮结合NRC饲养标准（2007）中蒙古马的营养物质需求，将基础日粮饲料均匀混合[8-9]。随后，将混合饲料倒入饲料制粒机，挤压出大小均匀的颗粒饲料，粒径为1.5~2.0 mm。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.13.019.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米45.00代谢能/(MJ/kg)9.85麦麸25.00干物质/%88.78次粉15.00酸性洗涤纤维/%28.21去皮豆粕（44%）10.00中性洗涤纤维/%17.12无水磷酸氢钙2.20有机物/%93.32食盐1.80灰分/%6.68预混料1.00磷/%0.93钙/%0.25注：预混料购自深圳市光普达科技有限公司。1.4饲养管理每日于8：00、14：00和18：00定量饲喂蒙古马。该时间不可更改，以免打乱蒙古马原有饮食规律，造成消化系统紊乱，遵循先粗后精的原则对蒙古马进行饲喂。单圈舍饲养，按马场生产管理对试验马驹进行驱虫。在马厩内常备清洁并且新鲜的饮水，保证马匹随时饮用。1.5测定指标及方法1.5.1生长性能在试验阶段，记录每个重复组马厩的投料量和剩料，同时对每个试验蒙古马（空腹）的初重、末重、试验增重、平均日增重等生长性能指标进行测定。平均日增重=末重-初重(1)平均日增重=(末重-初重)/试验天数(2)1.5.2生理生化性能试验结束后，选用一次性注射器（5.0 mL）对试验马进行静脉血采集，采血5.0 mL。在离心管中，分时段先静置于37 ℃培养箱2 h，静置于2~8 ℃冰箱4 h。将离心管以转速5 000 r/min离心10 min，取上清液。蒙古马血清生理生化性能、免疫性能和抗氧化性能均由试剂盒测定，具体方法参照说明书。1.6数据统计与分析数据采用Excel软件整理，采用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析，采用Duncan's法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著[10]。2结果与分析2.1复合微生态制剂对蒙古马生长性能的影响（见表2）由表2可知，试验1、2和3组蒙古马的试验末重和增重均高于对照组；试验2和3组平均日增重显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.13.019.T002表2复合微生态制剂对蒙古马生长性能的影响组别初重/kg末重kg增重/kg平均日增重/(kg/d)对照组140.55±4.89155.71±4.6315.16±2.960.72±0.12a试验1组140.36±5.27157.87±4.7717.51±2.530.83±0.32a试验2组140.72±4.8l161.21±5.7120.49±3.110.98±0.11b试验3组140.69±5.17162.36±5.3221.67±2.741.03±0.14b注：同列数据肩标字母不同表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2复合微生态制剂对蒙古马血清生化性能的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验2和3组蒙古马血清TP和ALB含量显著升高（P0.05），BUN、AST和ALT含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.13.019.T003表3复合微生态制剂对蒙古马血清生化性能的影响组别TP/(g/L)ALB/(g/L)BUN/(mmol/L)ALT/(mmol/L)AST/(mmol/L)对照组45.77±1.47a18.41±1.05a0.94±0.01b7.55±0.25b174.54±3.44b试验1组46.21±1.32a19.03±1.44a0.92±0.05b7.13±0.18b167.51±4.12b试验2组49.79±1.57b22.59±1.62b0.82±0.11a6.36±0.44a156.36±3.64a试验3组50.87±1.44c23.98±1.24b0.80±0.07a6.02±0.39a153.41±4.72a2.3复合微生态制剂对蒙古马血清免疫性能的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，试验2和3组蒙古马血清IgA、IgM、IgG、TNF-α、IL-2和IL-6含量均显著提高（P0.05）；试验3组IgG和IL-6含量显著高于试验2组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.13.019.T004表4复合微生态制剂对蒙古马血清免疫性能的影响组别IgA/(g/L)IgM/(g/L)IgG/(g/L)TNF-α/(ng/L)IL-2/(ng/L)IL-6/(ng/L)对照组2.16±0.45a1.21±0.26a8.14±1.79a76.34±2.91a124.72±5.24a86.61±4.15a试验1组2.21±0.53a1.23±0.37a8.16±2.68a76.54±3.57a125.65±6.84a87.58±4.23a试验2组2.45±0.47b1.68±0.34b9.47±2.65b78.85±5.43b128.89±8.24b91.21±4.27b试验3组2.63±0.66b1.74±0.52b9.58±3.57c79.59±4.36b129.78±7.91b93.05±3.87c2.4复合微生态制剂对蒙古马血清抗氧化性能的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，试验2和3组蒙古马血清T-AOC、T-SOD、GSH-Px和CAT活性显著提高（P0.05），MDA含量显著降低（P0.05）。试验3组GSH-Px活性显著高于试验2组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.13.019.T005表5复合微生态制剂对蒙古马血清抗氧化性能的影响组别T-AOC/(mol/L)T-SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)CAT/(U/mL)MDA/(μmol/L)对照组0.64±0.04a71.32±3.84a92.24±4.12a5.76±0.51a3.58±0.25b试验1组0.67±0.09a72.42±2.98a93.35±4.07a5.94±0.48a3.54±0.24b试验2组0.75±0.06b78.56±4.02b99.16±4.23b6.27±0.49ab3.31±0.32a试验3组0.78±0.07b82.21±4.11b102.76±4.54c6.55±0.58b3.28±0.33a3讨论3.1复合微生态制剂对蒙古马生长性能的影响研究认为，在饲料中添加复合微生态制剂，有利于提高动物的生长性能。徐海燕等[11]研究指出，在基础日粮中添加一定剂量的倍利素可以显著提高肉鸡的生长性。陈勇等[12]研究指出，在基础日粮中添加复合微生态制剂可以显著促进仔猪生长。刘俊阳等[13]研究发现，在日粮中添加复合微生态制剂能够有效改善犊牛肠道菌群，降低犊牛腹泻率，提高犊牛生长性能。本试验结果显示，添加复合微生态制剂的各试验组蒙古马末重和增重均显著高于对照组（P0.05），说明复合微生态制剂可以提高马的平均日增重，促进生长发育。产生这一结果的原因可能是复合微生态制剂由多种益生菌组成，这些益生菌可以抑制有害菌群生长、调整菌群平衡以及降低腹泻。在饲料中添加复合微生态制剂后，复合微生态制剂中的益生菌可发挥自身有害菌群抑制作用，加速蒙古马结肠内青粗饲料的消化，进而提升蒙古马生长性能。3.2复合微生态制剂对蒙古马血清生化性能的影响血清是被除去纤维蛋白原的血液，一定程度上可体现动物机体各器官的病理损伤情况[14-15]。添加100 mg/kg复合微生态制剂对蒙古马血清生化功能的影响不显著，添加500和1 000 mg/kg复合微生态制剂均能显著提高蒙古马的血清生化功能。进一步分析可知，在饲料中添加一定比例的复合微生态制剂，一方面可以提高蒙古马血清中的TP和ALB含量，也就是提高肝脏的蛋白质合成能力，提升机体蛋白质代谢率，加速蒙古马机体蛋白质消化、吸收和利用；另一方面会降低BUN含量、AST和ALT活性，改善蒙古马的肝脏和肾脏功能，进而加速肝脏物质代谢。3.3复合微生态制剂对蒙古马血清免疫性能的影响添加100 mg/kg复合微生态制剂对蒙古马血清免疫功能的影响不显著，添加500和1 000 mg/kg复合微生态制剂均能显著提高蒙古马的血清免疫功能。进一步分析可知，IgA、IgM和IgG含量增加意味着复合微生态制剂可有效抑制血清中的细菌，抵抗病毒并中和毒素，提升蒙古马体液免疫能力；TNF-α、IL-2和IL-6含量的增加代表复合微生态制剂可有效诱导B细胞分泌和分化，刺激T淋巴细胞增殖，促使细胞能够抗肿瘤和病毒，提升蒙古马机体细胞免疫能力。3.4复合微生态制剂对蒙古马血清抗氧化性能的影响添加100 mg/kg复合微生态制剂对蒙古马血清抗氧化功能的影响不显著，添加500和1 000 mg/kg复合微生态制剂均能显著提高蒙古马的血清抗氧化功能。基础日粮中添加复合微生态制剂可以提高蒙古马血清T-AOC，提升蒙古马机体的综合抗氧化能力；增强T-SOD活性，提高蒙古马机体对于超氧阴离子自由基的清除能力；增强血清GSH-Px活性，提升了蒙古马的还原反应性能；增强CAT活性，提升了蒙古马机体的过氧化氢清除能力；降低MDA含量，降低了蒙古马机体的脂质氧化和细胞损伤程度。本研究结果显示，在蒙古马基础日粮饲料中添加100 mg/kg制剂可以改善血清生化、免疫和抗氧化性能，但整体效果不显著。添加500和1 000 mg/kg复合微生态制剂对蒙古马血清生化、免疫和抗氧化性能的改善效果均较为显著，但二者差异并不显著。产生这一现象的原因可能是：在随饲料进入蒙古马瘤胃后，复合微生态制剂能够快速将血清中的微生态菌群调节至平衡状态，但所添加复合微生态制剂的剂量在满足蒙古马所需要用量后，额外添加部分无法完全被蒙古马吸收利用。因此，综合考虑养殖成本，500 mg/kg应为复合微生态制剂的最优临床添加剂量。4结论综上所述，蒙古马基础日粮饲料中添加复合微生态制剂可以提高蒙古马的平均日增重，促进蒙古马生长发育。不同浓度的复合微生态制剂均能够改善蒙古马的血清生化、免疫和抗氧化性能，但超过一定浓度后，复合微生态制剂对蒙古马血清的影响效用不再发生显著变化。综合考虑蒙古马养殖成本，实际应用中建议选择500 mg/kg作为复合微生态制剂的最适添加剂量。