硒是动物生长代谢与繁殖必需的微量元素，对动物机体抗氧化、抗应激、改善免疫功能等方面具有重要作用。在养殖业中，通常在奶牛的日粮中添加无机硒或有机硒以增强动物的免疫力，提高奶牛血液和牛奶中的硒水平。与无机硒相比，有机硒以其易吸收、毒性小及对环境无潜在污染等特点。2006年，利用特殊酵母菌株生产的酵母硒被允许并成为首个获准生产的饲料添加剂之一[1]。本试验在奶牛基础日粮中添加适量的酵母硒，研究酵母硒对奶牛全血中硒含量和血液抗氧化能力的影响，为酵母硒在奶牛养殖中的推广应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料酵母硒主要成分为酵母硒、啤酒酵母粉，其中酵母硒≥1 960 mg/kg，由武汉新宏玑生物科技有限公司生产。1.2试验设计及饲养管理试验选择体况相近（580~610）kg、胎次约2.5胎、产奶量（26.5±2.8）kg的荷斯坦奶牛共40头，随机分成4组，每组10个重复。饲养试验牛群的基本情况见表1。对照组（C组）在基础日粮中添加亚硒酸钠，添加后日粮中硒水平为0.30 mg/kg（干物质基础）。试验各组在基础日粮中添加酵母硒。酵母硒采用逐级稀释、混合均匀的方式，先用10 kg精料预混稀释后再加入混合搅拌机中进行混匀。G1组奶牛饲喂酵母硒浓度为0.30 mg/kg的混合日粮；G2组奶牛饲喂酵母硒浓度为0.40 mg/kg的混合日粮；G3组奶牛饲喂酵母硒浓度为0.50 mg/kg的混合日粮。基础日粮组成及营养水平见表2。试验期60 d。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.026.T001表1试验牛群的基本情况组别试验头数/头平均胎次/胎平均泌乳天数/d平均产奶量/(kg/d)C组102.673.027.83±1.29G1组102.474.026.78±1.07G2组102.472.827.45±0.48G3组102.673.227.56±1.3610.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.026.T002表2基础日粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米秸秆13.30产奶净能/(MJ/kg)5.97豆饼6.70干物质/%55.20干草10.70钙/%0.39玉米青贮50.00磷/%0.23玉米11.22麸皮5.61碳酸钙0.74食盐0.37小苏打0.28鱼粉0.47预混料0.61注：1.预混料购自三元种业科技股份有限公司。2.营养水平均为计算值。试验采用定点单槽拴饲，每天给料3次，自由采食和饮水，早中晚3次定时挤奶，挤奶设备为鱼骨式挤奶机，其他饲养管理按照奶牛场常规管理进行。1.3测定指标及方法1.3.1全血硒和抗氧化指标在试验的第0、20、40、60 d，牛尾静脉采集血液20 mL，其中10 mL用于全血硒含量的测定[2]；10 mL装入一次性无添加真空采血管中，室温下静置1 h，移入4 ℃冰箱静置过夜，高速冷冻离心机2 500 r/min离心10 min，分离血清，-20 ℃冷冻保存，进行谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性、总抗氧化能力（T-AOC）和丙二醛（MDA）含量测定，所用试剂盒购自南京建成生物工程研究所，检测方法参照各检测盒中的说明书进行。1.3.2乳成分采集对照组和各试验组的奶牛的早、中、晚的乳汁，等量混匀后作为待检样品。采用细胞分析仪测定乳中体细胞数（SCC）；试验结束（第60 d）时，逐只采集各组奶牛的乳汁，采用乳成分分析仪对乳样进行乳脂率、乳蛋白率、乳糖率、乳干物质率测定。1.4数据统计与分析数据采用Excel进行初步整理，采用SPSS 13.0软件进行显著性检验，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1酵母硒对奶牛全血硒含量的影响（见表3）由表3可知，与C组相比，补硒第20、40、60 d，各试验组奶牛的全血硒含量均显著高于C组（P0.05）。补硒第60 d，G1、G2、G3组奶牛的全血硒较C组分别提高21.05%、36.84%和42.11%。G2、G3组奶牛的全血硒含量显著高于C组（P0.05），G2和G3组奶牛的全血硒含量差异不显著（P0.05）。结果表明，日粮中添加酵母硒可以提高奶牛全血中的硒含量，随着酵母硒添加量和添加时间的延长，全血硒含量也呈上升趋势。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.026.T003表3酵母硒对奶牛全血硒含量的影响组别第0 d第20 d第40 d第60 dC组0.12±0.020.14±0.01c0.19±0.02c0.19±0.12cG1组0.13±0.010.15±0.01b0.21±0.02b0.23±0.02bG2组0.13±0.010.19±0.02a0.21±0.01b0.26±0.01aG3组0.13±0.020.19±0.01a0.24±0.02a0.27±0.02a注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。μmol/L2.2酵母硒对奶牛血清GSH-Px活性、T-AOC的影响（见表4）由表4可知，与C组相比，补硒第20、40、60 d，各试验组的奶牛血清中GSH-Px活性显著升高（P0.05）；补硒第60 d，G1、G2、G3组奶牛血清GSH-Px活性分别提高40.38%、37.99%和28.87%。结果表明，在各试验组中，随着酵母硒添加时间的增加，奶牛血清GSH-Px活性呈上升趋势；但在酵母硒添加量不同的各组进行组间比较，发现随着酵母硒添加剂量的增加，奶牛血清中GSH-Px活性呈先升高后降低趋势。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.026.T004表4酵母硒对奶牛血清GSH-Px活性、T-AOC的影响组别GSH-PxT-AOC20 d40 d60 d20 d40 d60 dC组109.17±5.13c112.79±9.04c117.23±9.06c2.17±0.09c2.29±0.03c2.23±0.05cG1组149.94±7.12a156.36±10.19a164.57±12.13a2.72±0.03a2.93±0.09a3.17±0.02aG2组147.52±10.11b152.93±13.07a161.76±18.12b2.28±0.11a2.76±0.07a3.06±0.12bG3组143.37±9.03b147.68±10.12b151.08±12.05b2.24±0.12b2.39±0.22b2.98±0.13bU/mL补硒第20、40、60 d，奶牛血清中各试验组T-AOC显著高于对照组（P0.05），随着酵母硒添加量的增加，补硒第60 d，G1、G2、G3组奶牛T-AOC分别比C组提高42.15%、37.22%、33.63%，且G2、G3组之间并无显著差异（P0.05）。结果表明，随着各组酵母硒添加量的递增，T-AOC水平有下降的趋势。2.3酵母硒对奶牛血清SOD活性、MDA含量的影响（见表5）由表5可知，各试验组奶牛的血清SOD活性变化基本与GSH-Px活性、TOC的变化规律一致。补硒第60 d，牛血清中各试验组SOD显著高于对照组（P0.05），但G1组与G2组之间差异不显著（P0.05），G3组与G2组差异显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.026.T005表5酵母硒对血清SOD活性、MDA含量的影响组别SOD(/U/mL)MDA/(μmol/L)20 d40 d60 d20 d40 d60 dC组166.32±14.13c164.57±9.18c165.19±16.04c10.32±0.07a11.57±0.41a10.22±0.22aG1组176.39±16.11a187.22±15.07a194.28±11.12a8.94±0.16c7.36±0.27c6.76±0.57cG2组175.41±12.17a184.63±10.12ab191.76±12.09a9.39±0.17c8.92±0.33c8.08±0.35bG3组173.94±10.11b179.63±13.22b189.43±14.17b9.92±0.15b9.63±0.19b10.13±0.29a补硒第60 d，与对照组相比，G1、G2组奶牛血清MDA含量分别降低33.86%和20.94%（P0.05）。随着各组酵母硒添加量的递增，MDA含量有上升的趋势，G3组比G1、G2组分别提高49.85%和25.37%（P0.05）。2.4酵母硒对乳汁体细胞数的影响（见表6）由表6可知，各试验组的奶牛体细胞数呈显著下降趋势（P0.05），随着酵母硒的饲喂时间的增加不断减少。补硒第60 d，C组的体细胞数没有发生明显变化，G1、G2、G3组分别比试验开始时下降16.05%、28.31%和26.80%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.026.T006表6酵母硒对乳汁体细胞数的影响组别第0 d第20 d第40 d第60 dC组5.70±0.065.62±0.17a5.92±0.11a5.97±0.14aG1组5.67±0.215.52±0.08b4.87±0.15b4.76±0.11bG2组5.59±0.125.39±0.17b4.72±0.12b4.28±0.12dG3组5.73±0.115.35±0.15c4.75±0.03c4.37±0.09c105个/mL2.5酵母硒对乳品成分的影响（见表7）由表7可知，与对照组相比，补硒第60 d，各试验组奶牛乳样中的乳蛋白率、乳脂率、乳糖率均无显著差异（P0.05），G2组奶牛乳干物质率显著升高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.026.T007表7酵母硒对乳品成分的影响组别乳蛋白率乳脂率乳糖率乳干物质率C组3.32±0.053.74±0.064.83±0.2111.38±0.43aG1组3.37±0.033.77±0.014.93±0.2312.05±0.35abG2组3.42±0.063.82±0.044.97±0.1812.20±0.14bG3组3.35±0.023.64±0.024.94±0.1111.97±0.23ab%3讨论硒是动物机体必需的微量元素之一，在动物饲料中添加硒对奶牛生产性能影响的报道很多，但结论并不一致。孙玲玲等[3]、靳二辉等[4]、林金玉等[5]分别在奶牛、肉仔鸡、泌乳期母猪中的研究得出，在动物饲料中添加一定剂量的硒（无机硒或有机硒），能够提高动物的抗氧化能力，增强动物的免疫功能，且有机硒的效果明显优于无机硒。酵母硒是以酵母菌作为载体富集微量元素硒的高品质有机硒，可以消除无机硒对机体的毒副作用和肠胃刺激，且具有抗氧化、促吸收、抗应激、提高动物繁殖性能、增强免疫力等多重功效。本试验结果表明，与对照组（亚硒酸钠）相比，各试验组奶牛全血中的硒含量显著升高（P0.05），随着酵母硒添加量和添加时间的延长，全血硒含量也呈上升趋势。这一结果与黄志坚等[6]报道的在奶牛日粮中添加富硒酵母可以提高血硒浓度的结论一致。许宗运等[7]研究表明，奶牛机体可以吸收较高水平的酵母硒，其利用率比亚硒酸钠高，添加酵母硒的奶牛全血硒含量明显高于添加亚硒酸钠的对照组。在动物的饲料中添加一定剂量的硒可以促进动物的生长，改善动物的生产性能，增强机体免疫力，减少养殖环节的常见疾病的发病率，且添加有机硒的效果明显优于无机硒[5,8-9]。乳房炎会导致奶牛养殖业造成巨大经济损失。Cebra等[10]报道，血液中硒含量较高时，奶牛的乳汁中的体细胞数较低，奶牛有较强的抗氧化能力和中性粒细胞杀伤力，从而减少奶牛乳房炎的发生率和严重程度。本试验中，随着各试验组酵母硒添加量的增加，乳汁中的体细胞数减少，与蔺文爱[11]试验中使用酵母硒可以降低体细胞数的结论一致。由此可见，添加酵母硒可以降低奶牛乳房炎的发生率，提高奶牛场的经济效益。Johansson等[12]报道，与无机硒相比，给反刍动物饲喂有机硒（酵母硒）能够增加血液和组织中的硒浓度，提高GSH-Px、SOD的活性及T-AOC等。本试验结果表明，在奶牛日粮中添加酵母硒可以显著提高奶牛全血中硒含量，促进血清中T-AOC、GSH-Px及SOD活性升高，使血清中MDA含量降低，奶牛乳汁中体细胞数减少，说明在奶牛日粮中添加酵母硒可以增强奶牛的抗感染能力，使奶牛机体处于最佳状态。本试验中，与对照组相比，G2组乳干物质率显著升高（P0.05），与杨攀等[13]在水牛上应用富硒酵母的研究结果不同，但与吕远蓉等[14]、郭璐等[15]的研究结论基本一致，对奶牛乳品成分的影响并不显著，对奶牛的抗氧化、生长繁殖性能及提高免疫力等方面也有明显的改善作用。受各试验组的奶牛个体状况、所选用有机硒的种类及饲料营养成分不同的影响，在酵母硒的添加剂量选择上不可避免地存在一定的差异。后续研究中将进一步探讨奶牛日粮中酵母硒的最佳添加剂量。4结论本试验结果表明，在奶牛日粮中添加适量酵母硒后，可改善奶牛的抗氧化能力，减少奶牛乳汁中的体细胞数。