随着农业农村部第194号公告的实施，我国自2020年7月1日进入饲料无抗时代[1]。凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans，B. coagulans）和酵母培养物（yeast culture，YC）作为饲用抗生素促生产类药物的潜在替代品，具有抑菌、抗炎、增强免疫能力、改善肠道健康等作用，在维护动物机体健康、改善生产性能、提高养殖效益等方面有积极作用[2-4]。Zhang等[5]研究发现，YC可以增强老龄蛋鸡肠道消化酶活性，减少血浆内毒素产生，改善产蛋性能。Zhang等[6]报道，B. coagulans可以增强肉仔鸡抗氧化和免疫能力，改善肠道健康，提高平均日增重。目前，关于YC和B. coagulans的研究主要为其单体或联合有机矿物质的作用效果，鲜有复合益生菌酵母培养物的报道，其对地方家禽品种影响的报道更少。本研究旨在探究复合凝结芽孢杆菌酵母培养物（Bacillus coagulans yeast culture，BcYC）对固始鸡生长性能、屠宰性能、血清生化、抗氧化和免疫功能的影响，为其在地方家禽饲养生产中的推广应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料复合凝结芽孢杆菌酵母培养物由江苏奕农生物股份有限公司提供，主要营养成分为粗蛋白质≥5%、粗灰分≤8.0%、水分≤10.0%、甘露聚糖≥1.0%、凝结芽孢杆菌≥5×108 CFU/g。基础日粮购自长沙华港饲料有限公司。1.2试验设计与饲养管理试验采取单因素设计，选择180只48日龄健康固始鸡（♀），随机分为3组，每组6个重复，每个重复10只鸡。在固始鸡基础日粮中分别添加0、200、400 mg/kg复合凝结芽孢杆菌酵母培养物。预试期7 d（基础日粮），正式试验期42 d。基础日粮组成及营养水平（风干基础）见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.027.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.0A级玉米17.0代谢能/(MJ/kg)11.544豆粕（46%）13.2粗蛋白质/%18.207A级小麦24.0粗脂肪/%4.393油糠6.0粗纤维/%3.551肉粉2.5粗灰分/%7.380石粉1.3钙/%0.792膨润土2.0总磷/%0.546抛光粉8.0氯化钠/%0.294稻谷16.0赖氨酸/%1.003玉米蛋白粉3.0蛋氨酸/%0.431玉米淀粉渣4.0半胱氨酸/%0.277预混料3.0蛋氨酸+半胱氨酸/%0.602苏氨酸/%0.571注：1.预混料为每千克日粮提供：铜17.5 mg、锌105 mg、铁45 mg、锰124 mg、硒0.225 mg、碘1.29 mg、VA 12 000 IU、VD3 5 000 IU、VE 75 mg、VK 2.8 mg、VB1 3 mg、VB2 8 mg、VB6 7 mg、VB12 0.03 mg、泛酸20 mg、烟酸50 mg、生物素0.1 mg、叶酸1.5 mg。2.营养水平中代谢能为计算值，其余均为实测值。试验动物饲养于湖南农业大学耘园基地，采用三层五门A型笼笼养，每笼2只鸡。试验开始前对鸡舍、鸡笼、采食及饮水设备进行彻底清洗、消毒。试验期间试验鸡自由采食、饮水，每日光照11 h。饲养期间，每天7：30和16：30进行添加饲料、打扫卫生、记录鸡群健康状况等日常管理工作。1.3样品采集各试验组每个重复分别在74日龄与98日龄时早晨随机选择1只鸡进行空腹翅下采血，装入EDTA抗凝血采血管中，4 ℃保温箱静置，3 600 r/min离心5 min，分离血清，样品于-80 ℃保存。随后将鸡颈静脉放血处死，分离所需组织。1.4测定指标与方法1.4.1生长性能生长性能包括55~73日龄及74~97日龄阶段平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）及料重比（F/G）。分别于54、73、97日龄下午添料时间段清料断粮，保障饮水充足，次日上午添料时间段称量每个重复的所有鸡的空腹体重。平均日增重=阶段总增重/统计天数(1)平均日采食量=阶段总采食量/统计天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2屠宰性能根据《家禽生产性能名词术语和度量计算方法》（NY/T 823—2020）计算全净膛率、胸肌率、腿肌率。1.4.3血清相关指标血清生化指标包括尿酸（UA）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）；血清抗氧化指标包括谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）（比色法）、丙二醛（MAD）（TBA法）、超氧化物歧化酶（SOD）（WST-1法）、过氧化氢酶（CAT）（可见光法）、总抗氧化能力（T-AOC）（比色法）；血清免疫指标包括免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白A（IgA）。检测所需试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，按试剂盒说明书进行操作。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel 2019初步整理，运用SPSS（Ver. 23.0）软件One-way ANOVA进行单因素方差分析，采用Duncan氏法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示极显著差异，0.05≤P0.10表示有显著的趋势。2结果与分析2.1BcYC对固始鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，日粮中添加BcYC对固始鸡试验前期（55~73日龄）和试验后期（74~97日龄）的平均日增重、平均日采食量、料重比均无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.027.T002表2BcYC对固始鸡生长性能的影响项目55日龄体重/g73日龄体重/g97日龄体重/g55~73日龄74~97日龄平均日增重/g平均日采食量/g料重比平均日增重/g平均日采食量/g料重比P值0.9480.8210.8740.6410.5030.9840.4830.1720.407对照组897.56±42.581 285.50±58.891 539.16±76.9922.82±1.7194.59±5.994.16±0.3019.00±1.35104.64±8.965.51±0.27200 mg/kg添加组895.14±44.711 297.20±78.921 539.83±126.1123.65±2.3698.84±9.304.19±0.2220.73±2.73113.26±5.515.53±0.75400 mg/kg添加组903.36±46.481 311.70±76.481 567.16±109.6524.02±2.6199.15±6.304.16±0.4119.97±1.96116.20±9.925.84±0.59注：同列数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著（P0.05），不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01）；表3、表6与此同。2.2BcYC对固始鸡屠宰性能的影响（见表3）由表3可知，日粮中添加BcYC均未显著影响74日龄和98日龄固始鸡全净膛率、胸肌率和腿肌率（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.027.T003表3BcYC对固始鸡屠宰性能的影响项目74日龄98日龄全净膛率胸肌率腿肌率全净膛率胸肌率腿肌率P值0.5190.4860.870.0970.7480.466对照组66.33±3.4820.13±1.9214.76±1.5175.73±1.3321.72±1.1613.71±1.02200 mg/kg添加组67.75±2.4520.60±1.2214.62±1.7375.77±1.2120.91±2.7314.44±2.63400 mg/kg添加组67.90±1.2820.15±2.0115.75±1.9173.23±3.2720.68±3.0214.99±1.12%2.3BcYC对固始鸡血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，日粮中添加BcYC对74日龄固始鸡尿酸、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯、总胆固醇未产生显著影响（P0.05），但对甘油三酯有提高趋势（0.05≤P0.10）。与对照组相比，添加400 mg/kg BcYC可以极显著提高低密度脂蛋白胆固醇含量（P0.01）。200 mg/kg BcYC未影响低密度脂蛋白胆固醇（P0.05）。BcYC对98日龄固始鸡血清生化指标影响不显著（P0.05），但200 mg/kg添加量有升高血清尿酸水平趋势（0.05≤P0.10）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.027.T004表4BcYC对固始鸡血清生化指标的影响项目对照组200 mg/kg添加组400 mg/kg添加组P值74日龄尿酸/(mmol/L)51.77±1.8451.04±1.9150.99±1.330.683高密度脂蛋白胆固醇/(mmol/L)5.68±1.176.15±1.916.24±1.900.830低密度脂蛋白胆固醇/(mmol/L)1.30±0.25B1.48±0.31B2.43±0.50A0.001甘油三酯/(mmol/L)1.11±0.041.29±0.451.56±0.210.084总胆固醇/(mmol /L)2.94±0.243.06±0.363.32±0.530.263总蛋白/(g/L)22.34±3.9520.85±8.0818.99±5.830.686白蛋白/(g/L)21.92±5.6917.80±1.9917.98±4.040.21210.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.027.T005项目对照组200 mg/kg添加组400 mg/kg添加组P值98日龄尿酸/(mmol/L)44.82±2.0950.30±4.5747.36±3.570.055高密度脂蛋白胆固醇/(mmol/L)5.57±0.886.04±0.895.41±0.730.420低密度脂蛋白胆固醇/(mmol/L)1.91±0.502.27±0.472.35±0.900.491甘油三酯/(mmol/L)0.24±0.060.30±0.140.32±0.120.516总胆固醇/(mmol/L)2.34±0.552.30±0.302.10±0.360.589总蛋白/(g/L)41.54±6.4943.92±6.9141.96±11.490.858白蛋白/(g/L)31.98±15.1717.67±2.7525.82±10.000.365注：同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著（P0.05），不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01）；表5与此同。2.4BcYC对固始鸡血清抗氧化指标的影响（见表5）由表5可知，日粮中添加400 mg/kg BcYC可以极显著提高74日龄固始鸡血清过氧化氢酶活性（P0.01），对谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛、超氧化物歧化酶、总抗氧化能力无显著影响（P0.05）。与对照组相比，试验组98日龄固始鸡各血清抗氧化指标无显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.027.T006表5BcYC对固始鸡血清抗氧化指标的影响项目对照组200 mg/kg添加组400 mg/kg添加组P值74日龄谷胱甘肽过氧化物酶/(U/mL)1 359.49±19.361 370.73±50.481 333.06±57.540.432丙二醛/(μmol/L)1.50±0.741.40±0.491.48±0.340.948超氧化物歧化酶/(U/mL)35.58±3.5638.15±2.0337.84±3.050.287过氧化氢酶/(U/mL)3.28±0.38B3.52±0.55B4.62±0.61A0.004总抗氧化能力/(mmol/L)1.34±0.391.32±0.511.33±0.280.99598日龄谷胱甘肽过氧化物酶/(U/mL)1 081.42±191.021 147.64±258.53928.91±218.530.270丙二醛/(μmol/L)3.08±1.762.74±1.622.56±0.600.811超氧化物歧化酶/(U/mL)36.56±3.3237.63±2.7035.13±2.580.348过氧化氢酶/(U/mL)1.97±0.761.81±0.872.00±1.370.953总抗氧化能力/(mmol/L)2.34±0.552.30±0.302.10±0.360.5892.5BcYC对固始鸡血清免疫球蛋白的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，日粮中添加400 mg/kg BcYC可以极显著提高74日龄固始鸡血清免疫球蛋白G含量（P0.01），添加200 mg/kg可以显著提高98日龄固始鸡血清免疫球蛋白G含量（P0.05），极显著提高免疫球蛋白M含量（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.027.T007表6BcYC对固始鸡血清免疫球蛋白的影响项目74日龄98日龄免疫球蛋白G免疫球蛋白M免疫球蛋白A免疫球蛋白G免疫球蛋白M免疫球蛋白AP值0.0010.5790.8610.0470.0020.685对照组0.55±0.15B1.35±0.2920.38±0.620.54±0.18b2.94±0.38B21.25±0.54200 mg/kg添加组0.57±0.05B1.44±0.2120.40±0.780.87±0.41a3.50±0.06A20.96±0.91400 mg/kg添加组1.25±0.42A1.52±0.3120.22±0.400.49±0.08b2.81±0.33B20.93±0.56g/L3讨论3.1BcYC对固始鸡生长性能的影响YC含有β-葡聚糖、甘露寡糖、核苷酸等活性物质，可作为饲料添加剂，具有改善动物生长性能和健康状况等潜在益处[7]。B. coagulans是应用较广的益生菌，可以提高肉仔鸡ADG和饲料转化率[8]。本试验中，BcYC对固始鸡生产性能无显著影响，但试验组ADG、ADFI优于对照组（P0.05），与马友彪等[9]在肉仔鸡日粮中使用酿酒酵母培养物结果类似。Zhang等[6]发现，B. coagulans对肉仔鸡ADFI、F/G无显著影响。动物生长性能是影响养殖效益的重要条件，受品种、性别、饲料营养水平、环境、疾病等因素的影响，饲料添加剂的添加剂量也是影响其作用效果的重要因素。有研究表明，AA肉仔鸡饲料日粮中添加超过0.03%的YC会显著降低其ADG和1~21日龄氮素沉积率，显著降低肉仔鸡生长性能[10]。本研究中，试验后期400 mg/kg BcYC添加组ADG低于200 mg/kg添加组3.67%，F/G高出对照组5.99%。试验组和对照组F/G均高于正常值可能因为试验期环境温度较低，机体维持代谢增加所致[11]，同时雌性固始鸡生长性能遗传潜质较差，改善潜力较小[12]。有报道称女贞子[13]、茶叶粉[14]、杜仲提取物[15]对固始鸡的生长性能改善效果也不理想。因此，BcYC对固始鸡生长性能的改善效果还需要进一步验证。3.2BcYC对固始鸡屠宰性能的影响屠宰性能是衡量肉用性能的重要指标，是营养物质靶向沉积能力的体现。关于YC和B. coagulans影响肉禽屠宰性能的报道较少。但是，大多研究表明，两者分别使用可以改善屠宰性能，提高全净膛率、胸肌率、腿肌率及降低腹脂率，可能与其能够改善动物肠道健康，促进营养物质消化吸收有关[16-17]。本试验中，BcYC对固始鸡全净膛率、胸肌率、腿肌率无显著影响，与曹广军等[18]、周建明等[19]分别使用B. coagulans和YC对肉鸡屠宰性能的影响结果类似。但是，本试验中，98日龄400 mg/kg BcYC添加组全净膛率有下降趋势（0.05≤P0.10），可能因为添加剂量过高氮素沉积下降所致[10]。3.3BcYC对固始鸡血清生化指标的影响TP、ALB主要由肝脏合成，对动物机体营养物质运输、渗透压和酸碱平衡维持等具有重要作用。吴正可等[20]发现，B. coagulans可以显著提高AA肉仔鸡血清TP、ALB含量，与赵娜等[21]结果基本一致。有研究表明，YC对反刍动物血清TP、ALB影响不显著[22-23]。但是，鲜有关于YC对家禽血清生化的影响的报道。本试验中，未见BcYC对74日龄和98日龄固始鸡血清TP、ALB有显著影响。HDL-C、LDL-C、TG、TC在动物脂类物质代谢、合成、运输中发挥重要作用，在一定程度上可以反映动物机体胆固醇及脂类物质代谢吸收能力。研究表明，B. coagulans可以增加肉仔鸡血清中TG和TC含量，利于脂质在机体内的代谢循环[20]。本试验中，添加400 mg/kg BcYC极显著提高74日龄固始鸡血清LDL-C含量，同时TG含量较对照组有提高趋势，说明高剂量BcYC对固始鸡脂质代谢具有一定影响，可能与高BcYC添加水平影响肝脏功能及饲粮脂肪含量、缺乏运动有关。UA是嘌呤核苷酸代谢分解的产物，与动物肾功能息息相关，在家禽中常用来诊断痛风病。本试验中，98日龄200 mg/kg添加组UA含量与对照组相比有提高趋势，具体原因需要进一步探究。3.4BcYC对固始鸡血清抗氧化指标的影响动物机体持续发生氧化反应，以满足正常生命活动物质代谢的需要，但当活性氧（ROS）和活性氮（RNS）自由基水平超过机体降解能力上限后，会造成氧化应激，危机动物健康状况，影响生产效益[24]。GSH-Px、SOD、CAT是维护动物机体氧化还原稳态的主要生物酶，其活性可以反映机体的抗氧化能力；MAD是脂质氧化的产物，MDA含量升高意味着机体存在氧化损伤，可能处于氧化应激状态；T-AOC能够全面反映机体的抗氧化能力。孙强东等[25]发现，YC能够显著提高仔猪血清中T-AOC和GSH-Px活性，显著降低MDA含量。林丽花等[26]发现，B. coagulans可以显著提高黄羽肉鸡血清T-AOC、SOD、CAT活性，显著降低MAD含量，表明YC和B. coagulans能够改善畜禽抗氧化能力。本试验中，添加400 mg/kg BcYC极显著提高CAT活性，表明BcYC增强了固始鸡对过氧化氢的降解能力。本研究中，其余抗氧化指标均无显著变化，与大多数报道结果不一致，可能由饲养水平、品种、生理阶段差异所致。此外，本试验发现，随着日龄增加，固始鸡抗氧化酶水平有所下降，但T-AOC有所提高，说明随着机体非酶类抗氧化物水平变高。3.5BcYC对固始鸡血清免疫球蛋白的影响免疫球蛋白作为动物机体的免疫物质，能够特异性消除病原体，在维护动物健康中发挥重要作用。IgG主要在体液中发挥作用，为全身免疫提供保障；IgA主要保护黏膜免受病原体损害。仝亚广等[27]发现，YC可以提高产蛋期海兰褐蛋鸡血清IgM、IgG、IgA含量，表明YC可以在一定程度上增强机体免疫能力。本试验发现，添加400 mg/kg BcYC可以极显著提高74日龄固始鸡血清IgG含量，98日龄200 mg/kg添加组固始鸡血清IgG、IgM含量分别得到显著和极显著提高，与孙喆等[28]在AA肉仔鸡日粮中添加YC得到的结果类似，说明BcYC可以改善固始鸡的免疫能力。4结论固始鸡日粮中添加200 mg/kg BcYC可以显著增强免疫功能，但对其生长性能、屠宰性能、血清生化指标及抗氧化功能改善效果不显著，具体原因需要深入研究。因此，BcYC在地方家禽中的应用推广仍需要进一步研究验证，同时需要进一步探究益生菌和酵母培养物配伍对其单体生物活性的影响。