柚子（Citrus grandis）是柚树的果实[1]。我国柚子资源丰富，主要分布在东南沿海、华南和西南地区[2]。柚子因皮厚而耐贮藏，一般自然存放3个月还可以食用。柚子皮约占柚子总质量30%，我国柚子年产量达200万t，每年约产生柚子皮60万t。柚子皮废弃后容易造成环境污染和资源浪费。近年来，很多学者对柚子皮的综合利用做出探索与研究[3-9]，但这些利用仅限于试验阶段，并未形成规模化生产。柚皮中含有多种有益健康的活性成分[10-15]和营养成分[16-17]。我国人畜争粮矛盾日益严重，充分开发柚子皮等非常规饲料资源有助于畜牧业持续发展。发酵料具有酸化剂、微生态制剂特性以及类似抗生素的功能，其在畜禽养殖生产中应用广泛。前人对柚子皮的研究主要集中在食品或提取物方面，鲜有关于柚子皮用作饲料的研究报道，更未有对柚子皮发酵处理后饲喂肉鸡方面的研究。本试验研究柚子皮发酵饲料替代部分基础日粮的可行性，并探索柚子皮发酵饲料对肉鸡生长性能、血清生化指标和抗氧化性能的影响，为柚子皮发酵饲料在肉鸡生产中的推广应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料柚子皮发酵料（简称试验料Ⅰ）加工方法：鲜柚子皮→专用搓揉粉碎机粉碎→原辅料根据配方配制后投进“BY生物质发酵机”中→75 ℃高温灭菌+熟化+搓揉3 h→冷却至45 ℃→添加厌氧菌种（BY-S-Y）+矿物营养→转入厌氧袋中厌氧发酵21 d→用于喂养试验。柚子皮发酵+中草药料（简称试验料Ⅱ）加工方法：鲜柚子皮→专用搓揉粉碎机粉碎→原辅料根据配方配制后投进“BY生物质发酵机”中→75 ℃高温灭菌+熟化+搓揉3 h→冷却至45 ℃→添加厌氧菌种（BY-S-Y）+矿物营养+中草药（黄芪黄连、黄檗等）搅拌均匀→转入厌氧袋中进行厌氧发酵21 d→用于喂养试验。柚子皮发酵料营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.011.T001表1柚子皮发酵料营养水平（风干基础）营养水平含量粗蛋白/%19.50粗纤维/%5.74酸性洗涤纤维/%10.49中性洗涤纤维/%18.55粗灰分/%5.94粗脂肪/%4.68总能/(MJ/kg)18.331.2试验设计试验在中国农业科学院麻类研究所沅江动物房进行。试验选择480只14日龄、体重（443.07±16.16）g生长发育正常的白羽AA肉鸡，随机分为3组，每组10个重复，每个重复16只鸡，公、母各半。试验期28 d。对照组肉鸡饲喂基础日粮，试验Ⅰ组和试验Ⅱ组分别使用10%试验料Ⅰ、10%试验料Ⅱ替代部分基础日粮。所有日粮均为颗粒料。试验参照NRC（1994）、中国鸡饲养标准（NY/T 33—2004）及《中国饲料成分及营养价值表》（2016），并结合《AA肉仔鸡饲养管理手册》配制玉米-豆粕型基础日粮。基础日粮组成及营养水平见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.011.T002表2基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米55.16代谢能(MJ/kg)3.14次粉8.00粗蛋白/%18.78豆粕（43%）20.00钙/%0.89玉米蛋白粉（60%）3.00总磷/%0.54棉粕（46%）3.00非植酸磷/%0.33菜粕（36%）2.00亚油酸/%3.73蛋氨酸（98.5%）0.18粗脂肪/%6.90赖氨酸盐酸盐（78%）0.54赖氨酸/%1.28苏氨酸（98.5%）0.18蛋氨酸/%0.49石粉1.39半胱氨酸/%0.78磷酸氢钙1.00苏氨酸/%0.92食盐0.25色氨酸%0.24预混料1.00小苏打0.10豆油4.20注：1.预混料为每千克基础日粮提供：VA 12 000 IU、VD3 2 500 IU、VE 20 mg、VK3 3 mg、VB1 3 mg、VB2 8 mg、VB6 7 mg、VB12 0.03 mg、D-泛酸20 mg、烟酸50 mg、生物素0.1 mg、叶酸1.5 mg、铜9 mg、锌110 mg、铁100 mg、锰100 mg、硒0.16 mg、碘0.6 mg。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理试验鸡采取地面平养，按照正常免疫程序进行免疫，舍内温度保持在22~24 ℃。采用连续光照、自然通风、自由采食和自由饮水的管理方式。定期清理打扫鸡舍卫生并消毒，每天冲洗饮水器。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能以重复为单位记录每天耗料量，每日观察鸡群的生长、发病及死亡状况，记录死淘数。在饲养试验结束当天8：00以重复为单位称空腹体重（提前8 h停料）。计算42日龄肉鸡平均体重（ABW）、平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）等生长性能指标。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/(试验天数×鸡只数)(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)1.4.2血清生化指标试验结束时，各重复随机抽取体重相近的健康肉鸡1只，颈静脉采血10 mL，静置15 min，4 000 r/min离心5 min，取上层血清于1.5 mL离心管中，-20 ℃冷冻保存，待测。采用BS-480全自动生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）测定外周血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、葡萄糖（GLU）、总胆固醇（TC）及甘油三酯（TG）、免疫球蛋白（IgG）的含量，计算球蛋白（GLB）和白球比（A/G）。1.4.3抗氧化指标采用UV-2600分光光度计（岛津）测定血清中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）活性、总抗氧化能力（T-AOC）及丙二醛（MDA）含量。所有试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。具体检测步骤参考试剂盒说明书。1.5数据统计与分析利用Excel 2003软件进行数据整理，采用SPSS 21.0统计软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），并采用Duncan氏法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1柚子皮发酵料对肉鸡生长性能的影响（见表3）由表3可知，试验Ⅱ组肉鸡的末重和平均日增重显著高于对照组和试验Ⅰ组（P0.05），试验Ⅰ组肉鸡平均日采食量显著低于对照组和试验Ⅱ组（P0.05）。柚子皮发酵料对肉鸡的料重比和死淘率影响不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.011.T003表3柚子皮发酵料对肉鸡生长性能的影响组别初重/g末重/g平均日增重/g平均日采食量/g料重比死淘率/%对照组441.81±18.012 043.53±104.20b57.20±3.25b132.55±5.38a2.32±0.071.96±3.16试验Ⅰ组442.67±15.792 002.62±105.73b55.71±3.70b125.69±4.84b2.26±0.142.00±8.58试验Ⅱ组444.72±16.222 163.91±109.84a61.40±3.84a135.68±12.44a2.21±0.192.67±3.44注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；表5与此同。2.2柚子皮发酵料对肉鸡血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，试验Ⅱ组肉鸡血清ALB含量、A/G值、GLU、TG含量显著高于对照组和试验I组（P0.05）；试验Ⅱ组肉鸡血清GLB含量显著低于对照组和试验I组（P0.05）；试验Ⅰ组肉鸡血清ALT活性显著低于对照组和试验Ⅱ组（P0.05）；试验Ⅱ组肉鸡血清BUN含量显著高于对照组（P0.05）；试验Ⅱ组肉鸡血清IgG含量显著高于对照组和试验Ⅰ组（P0.05）。柚子皮发酵料对肉鸡血清TP含量、AST活性和TC含量无显著影响（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.011.T004表4柚子皮发酵料对肉鸡血清生化指标的影响项目对照组试验Ⅰ组试验Ⅱ组TP/(g/L)26.28±4.7224.25±3.3425.31±2.43ALB/(g/L)13.92±3.10b14.05±3.16b19.15±2.90aGLB/(g/L)12.36±3.22a10.20±0.89a6.62±2.41bA/G1.19±0.39b1.39±0.31b3.59±1.61aALT/(U/L)4.65±0.55a3.19±0.89b4.46±0.76aAST/(U/L)179.77±46.00171.05±34.43209.72±32.93BUN/(mmol/L)0.53±0.22b0.95±0.19ab1.08±0.19aGLU/(mmol/L)9.84±1.53b10.08±1.71b13.21±2.35aTG/(mmol/L)0.24±0.08b0.29±0.14b0.45±0.08aTC/(mmol/L)5.33±0.925.44±1.106.19±0.60IgG/(g/L)3.19±0.97b3.61±0.65b5.19±1.16a注：同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）。2.3柚子皮发酵料对肉鸡抗氧化性能的影响（见表5）由表5可知，试验Ⅰ组和试验Ⅱ肉鸡血清GSH-Px活性显著高于对照组（P0.05）；试验Ⅱ组肉鸡血清CAT活性、T-AOC显著高于对照组和试验Ⅰ组（P0.05）；试验Ⅰ组和试验Ⅱ组肉鸡血清MDA含量显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.011.T005表5柚子皮发酵料对肉鸡抗氧化性能的影响组别SOD/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)CAT/(U/mL)T-AOC/(mmol/L)MDA/(μmol/L)对照组84.91±18.95253.61±57.07b0.98±0.25b0.66±0.08b5.19±0.74a试验Ⅰ组101.81±12.73371.97±53.40a1.04±0.22b0.68±0.13b4.22±0.63b试验Ⅱ组94.02±12.60397.80±58.24a1.34±0.26a1.11±0.18a3.71±0.59b3讨论3.1柚子皮发酵料对肉鸡生长性能的影响柚子皮中含有多种生物活性成分，具有消食、化痰、止咳、平喘等功效；柚子皮含有很多诸如维生素、矿物质、果胶等营养成分。因此，柚子皮经益生菌发酵后，可作为一种新型饲料或饲料添加剂应用于畜牧业。本研究结果表明，添加10%柚子皮和中药发酵料能够显著提高肉鸡末重和平均日增重，改善生长性能。研究表明，添加一定量的发酵料能够改善肉鸡的生长性能。Chen等[18]发现，饲喂枯草芽孢杆菌和酿酒酵母菌结合发酵的日粮可以显著提高肉鸡平均日采食量、平均日增重和总能利用率。祁瑞雪等[19]使用3%、6%和9%的发酵豆粕替代普通豆粕饲喂肉鸡，结果显示，与对照组相比，饲喂6%发酵豆粕能够提高肉鸡生长性能，极显著降低料重比。夏素银等[20]研究发现，使用发酵蛋白饲料替代豆粕30%能够显著降低肉仔鸡直肠内大肠杆菌数量和腹泻率。吴东等[21]使用发酵菜籽粕替代豆粕饲喂23 d黄羽肉鸡，发现发酵菜籽粕能够降低肉鸡胸肌的失水率，降低血清中ALT活性，提高TP含量。张金龙等[22]研究发现，在基础日粮中添加2%发酵桑叶粉可以显著提高肉鸡的平均日增重、平均日采食量及42 d腿肌率、器官重、空肠和回肠的绒毛高度及隐窝深度等，改善肠道形态结构，促进肠道健康。殷海成等[23]研究发现，与对照组相比，在日粮中添加苜蓿草粉或发酵苜蓿草粉可以显著改善鹅的生长性能，提高血清抗氧化酶和消化酶活性，且日粮中添加发酵苜蓿草粉比未发酵苜蓿草粉效果更佳。Cao等[24]研究发现，日粮中添加发酵银杏叶可以改善肉鸡抗氧化能力，提高血清中α-生育酚的含量，改善鸡肉品质。陈昭琪等[25]研究发现，发酵菜籽粕等氮替代日粮中15%的豆粕对肉鸡生长性能无负面影响，同时可以促进肉鸡对营养物质的消化吸收，并改善肉品质。本研究中，柚子皮加中草药混合发酵料饲喂肉鸡效果优于单一柚子发酵料。原因可能是发酵可以促进柚子皮和中草药的细胞壁裂解，从而促进活性成分的释放，并且将黄酮、多糖、苷类等大分子物质降解为易被吸收利用的小分子，从而提高日粮中生物活性成分含量和利用率。3.2柚子皮发酵料对肉鸡血清生化指标的影响血液生化指标可以反映动物机体生理状态及健康状况。血清蛋白含量反映机体对蛋白质的消化吸收状况和机体的免疫力。血清中蛋白含量升高表明机体代谢活动旺盛。血清GLU浓度可以反映动物活力；TG和TC含量反映动物机体脂质代谢状况；BUN含量可以反映动物体内蛋白质代谢和氨基酸平衡的状况；ALT和AST是反映肝脏功能的重要指标；IgG是血清中主要的抗体成分，约占血清免疫球蛋白含量的75%，是大多数抗菌、抗病毒产生的抗体类型，能够有效预防相应的感染性疾病。本试验结果表明，添加10%柚子皮和中药发酵料能显著提高肉鸡血清中ALB、BUN、GLU、TG、A/G值及IgG含量，降低肉鸡血清中GLB含量，说明该组肉鸡对日粮中蛋白、葡萄糖和脂类的消化吸收利用有所加强，增强了肉鸡免疫力；添加10%柚子皮发酵料显著降低肉鸡血清中ALT活性，说明添加柚子皮发酵料对肝细胞膜有保护作用；肉鸡血清TP、TC的含量及AST活性无明显变化，表明10%柚子皮发酵料替代全价日粮有利于肝脏合成蛋白能力及肝脏功能正常的发挥，维持体内蛋白质、脂质代谢及氨基酸平衡。但发酵饲料对动物的血清生化指标的影响不一致，可能是由于发酵饲料时菌种、原料等不同所致，具体原因需进一步研究。3.3柚子皮发酵料对肉鸡抗氧化性能的影响T-AOC是衡量机体抗氧化系统功能状况的综合指标，可以反映机体抗氧化酶系统及机体自由基代谢状况[26]。SOD、GSH-Px、CAT等是机体清除自由基的主要抗氧化酶[27-28]。MDA含量可以反映机体内脂质过氧化程度，间接反映细胞损伤程度[29]。牛玉等[30]研究发现，发酵银杏叶能够提高肉鸡的抗氧化功能。本研究结果显示，发酵柚子皮饲料替代10%基础日粮均能显著提高血清中T-AOC、CAT、GSH-Px活性，并降低肉鸡血清中MDA含量，且柚子皮和中草药混合发酵料效果优于柚子皮发酵料，说明相同条件下添加发酵中草药，更能增强肉鸡的抗氧化功能。本试验虽与牛玉等[30]所用发酵饲料种类不同，但研究结果一致，进一步说明发酵饲料能够提高肉鸡的抗氧化性能，增强免疫功能，促进其生长。4结论10%柚子皮发酵料替代部分基础日粮有利于肝脏合成蛋白能力及肝脏功能正常的发挥，维持体内蛋白质、脂质代谢及氨基酸平衡，增强肉鸡的抗氧化功能，从而改善肉鸡的生长性能。在相同条件下，添加适量的中草药效果更佳。