绿原酸是1种多酚类物质，主要存在于山银花、金银花、咖啡豆中，具有多种生物学功能，如抗炎、抑菌、抗病毒、抗氧化等[1-6]。绿原酸作为绿色、高效、无残留的饲料添加剂，可以显著缓解动物机体的炎症反应及胃肠道氧化应激，改善肠道健康、提高机体免疫力、促进生长等功能[7-8]。仔猪断奶时会产生严重的断奶应激，此时仔猪胃肠道功能尚未完全建立，会出现仔猪绒毛萎缩、黏膜通透性增强现象，使仔猪对营养物质的消化吸收利用率严重降低、腹泻率升高，进而阻碍其生长[9-10]。绿原酸具有很好的抗应激功能。因此，本试验研究绿原酸对断奶仔猪生长性能、免疫力、抗氧化功能的影响，为绿原酸在断奶仔猪日粮中的合理应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料绿原酸添加剂购自四川九章生物化工科技发展有限公司，其有效生物活性成分含量大于80%。1.2试验设计选择600头体重（8.60±0.15）kg、健康的断奶仔猪。按照单因素随机设计，将断奶仔猪分为4组，每组5个重复，每个重复30头仔猪。对照组仔猪饲喂基础日粮，试验组仔猪分别饲喂含有200、400、800 mg/kg绿原酸的基础日粮。预试期7 d，正式试验期28 d。试验断奶仔猪的饲料根据NRC（2012）规定的仔猪营养的标准进行配制。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.009.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米27.98消化能/(MJ/kg)14.18膨化玉米24.00粗蛋白/%20.35膨化大豆13.00钙/%0.97豆粕（44%）18.00有效磷/%0.38乳清粉8.00赖氨酸/%1.09鱼粉3.80苏氨酸/%0.78豆油1.50蛋氨酸＋半胱氨酸/%0.73食盐0.30DL-蛋氨酸0.10L-赖氨酸（98%）0.08磷酸氢钙0.87石粉1.37预混料1.00注：1.预混料购自信阳希望饲料有限公司。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理试验开始前，对仔猪试验猪舍进行清洗消毒、通风、干燥。预试期时，所有试验仔猪饲喂基础日粮。正式试验期时，对照组仔猪饲喂基础日粮，试验组饲喂添加不同剂量绿原酸的日粮。试验期间，每日观察记录断奶仔猪腹泻的情况，所有仔猪自由采食，自由饮水，各种疫苗的免疫根据猪场日常管理进行。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验开始和试验结束时，所有仔猪禁食12 h，准确称量体重，准确记录试验周期内的各组仔猪的总采食量，观察记录每组腹泻的仔猪数量，计算平均日增重、平均日采食量、料重比、腹泻率。平均日增重=(末重-初重)/试验周期(1)平均日采食量=总的采食量/(试验周期×仔猪头数)(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)腹泻率=[总的腹泻头数/(仔猪头数×试验周期)]×100%(4)1.4.2免疫指标和抗氧化指标试验结束时，每个重复挑选2头空腹的断奶仔猪颈静脉采血10 mL，4 ℃静置3 h，3 500 r/min离心5 min，利用移液枪吸取上层血清，-20 ℃冰箱保存，用于检测断奶仔猪的免疫力指标和抗氧化指标。免疫指标主要检测仔猪免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）、补体3（C3）、补体4（C4）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等。抗氧化指标主要检测总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、抑制羟自由基能力（CIHR）、抗超氧阴离子自由基等。以上指标检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，测定方法参照试剂盒说明书进行。1.5数据统计与分析数据采用Excel进行简单整理，采用SPSS 20统计软件进行单因素方差分析，采用LDS法对数据进行多重比较，结果以平均值和总标准误表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同剂量绿原酸对断奶仔猪生长性能的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，试验2组和试验3组断奶仔猪的末重和平均日增重显著提高（P0.05）。与对照组相比，试验组断奶仔猪的料重比和腹泻率均显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.009.T002表2不同剂量绿原酸对断奶仔猪生长性能的影响项目初重/kg末重/kg平均日增重/(g/d)平均日采食量/(g/d)料重比腹泻率/%对照组8.5014.79b224.64b498.602.22a5.21a试验1组8.5715.10ab233.21ab500.122.14b3.82b试验2组8.6415.80a255.71a502.721.97b2.30c试验3组8.6815.70a250.71a503.422.01b1.94cSEM1.402.524.606.030.370.93P值0.7390.0330.0400.8420.0160.001注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同剂量绿原酸对断奶仔猪免疫指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，试验2组和试验3组断奶仔猪血清IgG含量显著升高（P0.05），IL-6含量显著降低（P0.05）。试验1组断奶仔猪血清IgG有提高趋势，IL-6有降低趋势，但未达到显著水平（P0.05）；试验组断奶仔猪TNF-α含量均显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.009.T003表3不同剂量绿原酸对断奶仔猪免疫指标的影响项目IgA/(g/L)IgM/(g/L)IgG/(g/L)C3/(g/L)C4/(g/L)IL-6/(ng/L)IL-10/(ng/L)TNF-α/(ng/L)对照组0.970.232.68b0.530.06753.41a104.42197.34a试验1组1.030.232.94ab0.550.07049.47ab107.42178.30b试验2组1.080.253.19a0.560.07340.19b109.66163.01c试验3组1.100.243.20a0.580.07538.30b110.41157.29cSEM0.210.031.060.170.025.245.206.93P值0.4510.2190.0430.4100.1800.0120.9410.0252.3不同剂量绿原酸对断奶仔猪抗氧化指标的影响（见表4）由表4可知，与对照组相比，试验2组断奶仔猪的血清CAT活性显著升高（P0.05）；试验1组和试验3组断奶仔猪的血清CAT活性有提高趋势，但未达到显著水平（P0.05）。与对照组相比，试验2组和试验3组断奶仔猪的血清GSH-Px活性和CIHR显著升高（P0.05），MDA含量显著降低（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.15.009.T004表4不同剂量绿原酸对断奶仔猪抗氧化指标的影响项目T-AOC/(U/mL)SOD/(U/mL)CAT/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)MDA/(μmol/L)CIHR/(U/mL)抗超氧阴离子自由基/(U/L)对照组3.4894.203.74b420.27b3.73a376.30b216.23试验1组3.6298.174.93ab487.19ab3.32ab412.04ab224.28试验2组3.78104.365.69a548.15a2.64b496.27a235.05试验3组3.81110.194.98ab562.19a2.49b512.49a240.39SEM1.214.290.836.032.075.844.17P值0.6270.0690.0890.0070.0260.0210.0593讨论3.1不同剂量绿原酸对断奶仔猪生长性能的影响目前，绿原酸在断奶仔猪养殖生产中的研究较少。王宇等[11]研究发现，在断奶仔猪日粮中添加绿原酸对其平均日采食量和平均日增重无显著影响，添加1 000 mg/kg绿原酸可以显著降低仔猪料重比。赖星[12]研究表明，仔猪日粮添加绿原酸可以有效提高其平均日增重和平均日采食量，降低料重比。刘英等[13]研究却未发现绿原酸能够提高断奶仔猪的生长性能，其绿原酸添加量未达到300 mg/kg。刘静慧等[14]研究发现，日粮中添加2 000 mg/kg的绿原酸可以显著提高肉兔的试验末重和平均日增重。张纯等[15]研究发现，在建鲤饵料中添加200 mg/kg绿原酸可以提高增重率。本试验中，绿原酸对断奶仔猪的平均日采食量无影响；添加400、800 mg/kg绿原酸组断奶仔猪的试验末重和平均日增重显著高于对照组，200 mg/kg绿原酸组断奶仔猪的末重和平均日增重有比对照组提高的趋势；所有绿原酸组断奶仔猪的腹泻率均显著低于对照组。本试验研究结果与上述研究人员的结果略有不同，可能因为绿原酸的有效含量及添加剂量、动物品种、饲养环境等的原因。绿原酸提高动物的生长性能可能是因为其具有抗炎、抗菌、抗病毒功能，可以清除机体多余自由基，提高机体抗氧化功能。绿原酸还具有肾上腺素作用，可以提高消化道收缩能力，促进营养物质的消化吸收利用率。3.2不同剂量绿原酸对断奶仔猪免疫功能的影响动物机体内的免疫球蛋白、抗炎因子含量决定机体的免疫功能。本试验研究结果表明，400、800 mg/kg绿原酸组断奶仔猪的血清IgG含量显著升高，IL-6含量显著降低；200 mg/kg绿原酸组断奶仔猪血清IgG含量有提高趋势，IL-6含量有降低趋势；绿原酸组断奶仔猪TNF-α含量均显著降低。王宇等[11]研究发现，在断奶仔猪日粮中添加1 000 mg/kg绿原酸可以显著提高免疫球蛋白G含量，但对免疫球蛋白A和免疫球蛋白M含量无影响。Park等[16]研究发现，绿原酸可以靶向调节白细胞介素-1（IL-1）受体相关激酶4，抑制白细胞介素-1α（IL-1α）、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达，从而调节机体的免疫功能[16]。王多伽等[17]研究表明，獭兔日粮中添加0.21%的绿原酸可以显著提高血清白蛋白含量，增强溶菌酶活性，进而提高其免疫力。本试验研究结果与上述研究结果类似，说明绿原酸具有很好的免疫调节功能。绿原酸提高动物机体的免疫力可能因为绿原酸可以促进幼龄动物免疫器官的发育，激活钙调神经磷酸酶介导的信号通路，提高巨噬细胞的吞噬能力，促进B淋巴细胞和T淋巴细胞的增殖分化，进而增强机体的免疫功能[18-19]。3.3不同剂量绿原酸对断奶仔猪抗氧化功能的影响仔猪断奶时会出现断奶应激、氧化应激，影响仔猪的生长发育，甚至发生严重的腹泻导致死亡。当动物机体处于严重的氧化应激时，机体产生过多的氧自由基会影响机体DNA、蛋白质的代谢，使脂质氧化物丙二醛含量增多，对机体健康极为不利。本试验研究结果表明，400 mg/kg绿原酸组断奶仔猪血清CAT活性显著高于对照组；400、800 mg/kg绿原酸组断奶仔猪血清GSH-Px活性和CIHR显著高于对照组；MDA含量显著低于对照组。刘英等[13]研究发现，在断奶仔猪日粮中添加300 mg/kg的绿原酸可以显著提高CAT、GSH-Px活性，显著降低MDA含量。温安祥等[20]研究表明，在中华鳖日粮中添加200 mg/kg以上的绿原酸可以显著提高SOD、CAT、GSH-Px活性。上述研究结果表明，绿原酸可以提高动物体内的抗氧化酶活性来增强机体的抗氧化功能。绿原酸是酚类抗氧化剂，其抗氧化性高于维生素C、维生素E、阿魏酸等常见的抗氧化剂[21]。绿原酸可以通过抑制机体被黄嘌呤氧化酶活性、减少氧自由基的产生、提高抗氧化酶活性、降低脂质过氧化水平等方面提高机体的抗氧化功能[22]。4结论在日粮中添加不同水平的绿原酸可以显著提高断奶仔猪生长性能、免疫球蛋白含量，降低促炎因子和肿瘤坏死因子水平，提高抗氧化功能。综合各项指标及成本考虑，绿原酸在断奶仔猪日粮中的最适添加量为400 mg/kg。