麒麟鸡是广东粤西地域特有的优质地方家禽品种。麒麟鸡因为第33号染色体KRT75L4基因cds区15 bp（chr:33:1295046-1295060）缺失出现卷羽性状，也被称为卷毛鸡、翻毛鸡[1]。麒麟鸡肉含有丰富的牛磺酸[2]与氨基酸[3]，味道鲜美纯正[4]，颇具风味。麒麟鸡胆固醇含量低，具有较高的营养价值，是1种适宜在热带高温地区饲养的优质鸡种。但麒麟鸡规模化养殖时间短，大多数生产实践中的日粮配方均参照地方鸡种和肉鸡饲养规范，针对性不强。因此，本试验研究饲粮不同蛋白水平对麒麟鸡肠道发育的影响，为确定麒麟鸡适宜的蛋白水平提供参考。1材料与方法1.1试验材料200只1日龄同批孵化的体重相似健康麒麟母鸡，随机分为5组，每组4个重复，每个重复10只鸡，各组试验饲粮能量水平均为12.40 MJ/kg，蛋白水平分别为15%、17%、19%、21%、23%，试验期12 w。试验饲粮依据NRC（1994）家禽营养需要和中国黄羽肉鸡饲养标准（NY/T—2004）为基准配制，基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.16.006.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）项目1组2组3组4组5组原料组成/%玉米69.9264.9660.0454.8349.38豆粕20.1626.1431.5635.7839.97大豆蛋白粉000.501.502.50麸皮2.751.810.330.110.08豆油2.062.503.003.504.05磷酸氢钙2.132.061.931.711.50石粉1.701.411.711.701.69食盐0.300.300.300.300.30蛋氨酸0.150.140.100.070.03赖氨酸0.330.180.030.000.00预混料0.500.500.500.500.50合计100.00100.00100.00100.00100.00营养水平代谢能/(MJ/kg)12.4012.4012.4012.4012.40粗蛋白质/%15.2717.3119.0221.2622.75钙/%1.151.151.151.151.15总磷/%0.690.690.700.690.69有效磷/%0.490.490.490.490.49赖氨酸/%1.051.051.051.161.31蛋氨酸+胱氨酸/%0.720.720.720.750.76注：1.预混料为每千克日粮提供Cu 8 mg、Fe 80 mg、Zn 60 mg、Mn 100 mg、Se 0.17 mg、I 0.4 mg、VA 8 330 IU、VD 1 440 IU、VE 30 IU、VB1 2.0 mg、VB2 8 mg、VB6 1.2 mg、VB12 0.03 mg、叶酸2.0 mg、烟酸40 mg、泛酸20 mg、氯化胆碱750 mg。2.营养水平中粗蛋白质、钙和总磷为实测值，其余均为计算值。1.2饲养与管理试验鸡采用三层垂直叠式鸡笼进行笼养。试验期间自由采食和饮水，控制鸡舍温度、湿度和光照，鸡舍内定时打扫、定期消毒，常规免疫。1.3样品的采集与制备试验鸡饲养至4 w和12 w屠宰，屠宰前禁食12 h，禁水8 h，从各重复中取2只体重接近平均值的鸡颈静脉放血屠宰，按照解剖部位分离十二指肠、空肠、回肠。采用直尺测量各段肠道自然长度，生理盐水冲洗肠道，滤纸吸干，称取各肠段的质量；取2.5 cm肠段置于10%中性甲醛溶液固定，后续用于组织形态的切片制作和测定。1.4肠道发育指标测定肠道长度（cm）：各肠段自然长度；肠道质量（g）：去除内容后肠段质量。肠道相对长度=各肠段长度(cm)/活重(kg)(1)肠道相对质量=肠段质量(g)/活重(kg)(2)绒毛长度/隐窝深度(V/C)=绒毛长度(µm)/隐窝深度(µm)(3)1.5肠道组织形态处理与测定固定后的各肠段，一系列脱水后包埋于石蜡中，削去组织周围过多的石蜡块，切成薄片，常规染色，制成切片，使用荧光倒置显微镜观察，使用TCapture images软件测定绒毛高度和隐窝深度，计算绒毛高度/隐窝深度的比值。1.6数据统计与分析试验数据采用Excel进行初步整理，SPSS 25.0软件进行One way-ANOVA统计分析，采用Duncan氏法多重比较，结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1饲粮不同蛋白水平对4 w麒麟母鸡肠道发育的影响2.1.1　饲粮不同蛋白水平对4 w的麒麟母鸡肠道物理性状发育的影响（见表2）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.16.006.T002表2饲粮不同蛋白水平对4 w的麒麟母鸡肠道物理性状发育的影响项目1组（15%）2组（17%）3组（19%）4组（21%）5组（23%）SEMP值4 w活体重/g222.29c294.99b318.41ab315.85ab333.37a8.960.032肠道长度/cm十二指肠16.4816.8317.8318.0717.800.210.068空肠28.52b31.10ab32.21a32.53a32.88a0.640回肠25.38b26.61b26.84b31.35a30.78a0.540相对长度/(cm/kg)十二指肠74.14a57.05b56.07b57.18b53.45b0.270.023空肠128.309a105.43b102.44b102.94b98.74c0.300.036回肠114.18a90.20bc84.400c99.21b92.43b0.960.038肠道质量/g十二指肠1.01c1.18bc1.29b1.44a1.48a0.050.018空肠1.04c1.27c1.64a1.45b1.36bc0.090.023回肠0.95b1.13a1.16a1.15a1.15a0.040.020相对质量/(g/kg)十二指肠4.544.004.064.564.440.130.325空肠4.684.315.164.594.080.200.214回肠4.273.833.653.643.450.190.116注：同行数据肩标字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05），字母不同表示差异显著（P0.05）；下表同。由表2可知，随着饲粮蛋白水平的增加，4 w麒麟母鸡的各组活体重增加，5组的麒麟鸡活体重显著高于1组和2组（P0.05）。1组麒麟母鸡的空肠长度显著低于3组、4组、5组（P0.05）；4组和5组麒麟母鸡的回肠长度显著高于其他3组（P0.05）。1组麒麟母鸡的十二指肠、空肠、回肠的相对长度显著高于其他4组（P0.05）；5组麒麟母鸡的空肠相对长度显著低于2组、3组和4组（P0.05）；3组麒麟母鸡的回肠相对长度显著低于4组和5组（P0.05）。1组麒麟母鸡的十二指肠肠道质量显著低于3组、4组和5组（P0.05），3组麒麟母鸡的十二指肠肠道质量显著低于4组和5组（P0.05）；3组麒麟母鸡的空肠肠道质量显著高于其他各组（P0.05），4组麒麟母鸡的空肠肠道质量显著高于1组和2组（P0.05）；1组麒麟母鸡的回肠质量显著低于其他各组（P0.05）。2.1.2饲粮不同蛋白水平对4 w的麒麟母鸡肠道组织形态发育的影响（见表3）由表3可知，在十二指肠组织形态上，3组麒麟母鸡的绒毛长度和V/C比值显著高于其他各组（P0.05），4组和5组麒麟母鸡的绒毛长度显著高于1组和2组（P0.05）；4组麒麟母鸡的V/C值显著高于1组和2组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.16.006.T003表3饲粮不同蛋白水平对4 w的麒麟母鸡肠道组织形态发育的影响项目1组（15%）2组（17%）3组（19%）4组（21%）5组（23%）SEMP值十二指肠绒毛长度/µm930.69c924.51c1 181.02a1 064.99b1 048.94b21.760隐窝深度/µm153.93145.39151.12143.87153.392.490.632绒毛高度/隐窝深度（V/C）6.10c6.37c7.87a7.41ab6.85b0.180.002空肠绒毛长度/µm645.20b652.00b721.20a716.40a704.80a15.150.005隐窝深度/µm157.40a159.20a154.40a140.40b156.80a2.230.037绒毛高度/隐窝深度（V/C）4.11c4.11c4.69ab5.12a4.49bc0.100.001回肠绒毛长度/µm470.22b529.82ab592.50a552.33a542.26a12.050.014隐窝深度/µm124.09a130.08a114.03ab100.58b115.97ab3.190.026绒毛高度/隐窝深度（V/C）3.87b4.11b5.28a5.51a4.73ab4.700.011在空肠的组织形态上，3组、4组和5组麒麟母鸡的绒毛长度显著高于1组和2组（P0.05），4组麒麟母鸡的隐窝深度显著低于其他4组（P0.05），4组麒麟母鸡的空肠V/C比值显著高于1、2、5组（P0.05），3组麒麟母鸡的V/C比值显著高于1组和2组（P0.05）。在回肠组织形态上，1组麒麟母鸡的绒毛长度显著低于3组、4组和5组（P0.05）；1组和2组麒麟母鸡的隐窝深度显著高于4组（P0.05）。3组和4组麒麟母鸡的V/C值显著高于1组和2组（P0.05）。2.2饲粮不同蛋白水平对12 w麒麟母鸡肠道组织形态的影响2.2.1饲粮不同蛋白水平对12 w的麒麟母鸡肠道物理性状发育的影响（见表4）由表4可知，在12 w麒麟鸡的活体重上，3组、4组和5组的活体重显著高于1组和2组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.16.006.T004表4饲粮不同蛋白水平对12 w的麒麟母鸡肠道物理性状发育的影响项目1组（15%）2组（17%）3组（19%）4组（21%）5组（23%）SEMP值12 w活体重/kg1.25b1.36ab1.40a1.39a1.40a0.030.045肠道长度/cm十二指肠23.3725.3324.0324.5623.370.490.700空肠44.5049.7048.3745.3749.431.130.489回肠36.0045.1046.7744.5342.101.400.229相对长度/(cm/kg)十二指肠18.7018.2217.1618.0616.690.640.671空肠35.6035.7634.5533.3635.311.360.295回肠28.8032.4533.4132.7430.071.150.612肠道质量/g十二指肠2.502.772.962.962.590.380.617空肠4.465.815.555.045.141.290.305回肠3.494.924.883.985.050.320.466相对质量/(g/kg)十二指肠2.001.992.112.181.850.250.523空肠3.574.183.963.713.670.190.116回肠2.793.543.492.933.610.260.7982.2.2饲粮不同蛋白水平对12 w的麒麟母鸡肠道组织形态发育的影响（见表5）由表5可知，2组和3组十二指肠的绒毛长度和V/C显著高于1组、4组和5组（P0.05）。2组空肠V/C的比值显著高于1组和5组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.16.006.T005表5饲粮不同蛋白水平对12 w的麒麟母鸡肠道组织形态发育的影响项目1组（15%）2组（17%）3组（19%）4组（21%）5组（23%）SEMP值十二指肠绒毛长度/µm1 242.60b1 406.40a1 408.40a1 238.60b1 246.60b24.590.014隐窝深度/µm250.40212.60221.40236.20234.805.840.301绒毛高度/隐窝深度5.05b6.68a6.37a5.28b5.36b0.180.002空肠绒毛长度/µm1045.801131.401061.401074.001012.4017.240.283隐窝深度/µm186.80165.00175.20179.60186.603.630.298绒毛高度/隐窝深度5.63b6.88a6.10ab6.02ab5.46b0.160.034回肠绒毛长度/µm701.80742.20730.20732.00708.008.590.560隐窝深度/µm158.60165.00173.40174.60169.203.940.732绒毛高度/隐窝深度4.454.584.304.244.220.120.8863讨论蛋白质是生命活动的主要承担者[5]，蛋白质供应不足或过量会影响动物的器官发育，进而影响生长性能。家禽消化器官发育与饲粮营养含量密切相关[6-8]。小肠的长度及质量的变化与营养物质吸收密切有关[9]，肠道长度增加可以延长营养物质在消化道中停留的时间、提高饲粮消化吸收率、加快肉鸡生长发育[10]；肠道质量能够反映黏膜和肌层的发达程度[11]，肠壁数量越多，消化吸收能力越强[12]。在正常生理范围内评估器官和组织的相对长度，相对质量越高，器官和组织的发育越完善，功能越强大[13]。小肠完整性与功能性一般通过绒毛高度和隐窝深度进行评定。绒毛不断伸展和收缩，营养物质进入较深层次的血管和淋巴管，越长的绒毛拥有越多的成熟上皮细胞，营养物质和刷状缘之间拥有更大的接触面积[14]，小肠吸收和运输能力更突出[15]。细胞的生成率由隐窝深浅衡量，绒毛上皮细胞由隐窝基部的细胞迁移、分化形成，可以增补绒毛上皮的常规脱落[16]，过深的隐窝深度带来的是吸收能力的下降。V/C比值可以综合性地衡量小肠的功能状态，V/C比值越大代表肠道黏膜结构越完善，功能越强大[17]。3.1饲粮不同蛋白水平对4 w麒麟母鸡肠道发育的影响在本试验中，饲粮不同蛋白水平对4 w麒麟母鸡活体重和肠道发育均产生显著性影响，原因可能是4 w麒麟母鸡处于生长早期，消化系统发育较快[18]，对饲粮蛋白水平反应灵敏，摄入的饲粮蛋白优先满足胃肠道发育的需求。因此，小肠发育指数随饲粮蛋白质水平的变动而变动。Bach等[19]研究表明，家禽主要将营养用在肠、肝等消化器官的生长发育。本试验中，蛋白15%水平下，4 w肠道发育并不理想，肠道长度和质量均显著低于其他组，原因可能是低蛋白所提供的氨基酸达不到麒麟母鸡生长需求，肠道发育受阻。燕磊等[20]研究表明，日粮蛋白水平过低导致肠道黏膜受损，降低消化吸收功能和生长性能。本试验中，低蛋白水平组4 w肠道组织形态结构性和完整性均显著低于中高蛋白组证实了这一观点。综合肠道发育指标来看，4 w空肠和回肠长度增长较快的饲粮蛋白质水平转折点为19%和21%，肠道质量显著增长的转折点为19%和17%，19%水平的4 w肠道组织形态与21%、23%组差异不显著，显著高于15%和17%水平组。因此，4 w麒麟母鸡的最适饲粮蛋白质水平为19%~21%，与戈冰洁[21]的研究结果一致。3.2饲粮不同蛋白水平对12 w麒麟母鸡肠道发育的影响在本试验中，饲粮不同蛋白水平对12 w麒麟母鸡活体重和十二指肠组织形态影响显著，对12 w小肠发育指标和空肠、回肠组织形态影响不显著。原因可能是12w麒麟母鸡消化系统发育基本成熟，对营养物质的分配转为建设身体其余部分，其生长性能得到改善是生理功能完善的结果。因此，本试验的高蛋白水平组的母鸡生长性能、肠道功能与低蛋白水平组的鸡相似，与张学余等[22]的研究结果一致。郭亚[23]研究表明，家禽对蛋白质的酸化能力较弱，过高的蛋白质容易造成代谢负担，降低生长性能。红雷等[24]研究表明，肉仔鸡饲料蛋白水平下调不会影响其肠道绒毛形态。因此，综合各小肠段指标的结果分析，后期可以适当降低饲粮蛋白水平，12 w麒麟母鸡的蛋白水平以17%~19%效果较好，与陈彩文[25]的研究结果一致。4结论饲料不同蛋白水平对4 w麒麟鸡肠道长度、相对长度、肠道质量和相对质量以及肠道组织形态影响显著，对12 w麒麟母鸡各肠段发育影响不显著。以肠道发育性状和组织形态作为衡量指标，麒麟母鸡生长前期日粮适宜中蛋白质水平为19%~21%，后期为17%~19%。