太子参是石竹科植物孩儿参的干燥块根，具有益气健脾、生津润肺的功效，临床常用于治疗脾虚体倦、食欲不振、病后虚弱等[1]。太子参中含有皂苷、多糖、氨基酸以及多种微量元素[2]，其中多糖具有心肌保护[3]、抗应激[4]、抗氧化[5]、降血糖血脂[6]、增强免疫力[7]等多种生物活性功能，其药理作用及机制是相关研究的热点和难点[8]。本试验研究太子参原药材和太子参多糖对脾虚大鼠免疫功能的影响，探讨其健脾功效，为太子参多糖的作用机制研究及其相关制剂的开发应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验动物SPF级SD大鼠雄性，体重180~220 g，共60只，购置于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物许可证号：SCXK（湘）2019-0004，试验动物使用许可证号：SYXK（渝）2014-0002。饲养于西南大学药学院实验动物中心，动物试验符合中国《试验动物管理条例》。1.1.2药品与试剂太子参（福建贝迪药业有限公司）、利血平（天津金耀药业有限公司）；大鼠细胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α及免疫球蛋白SIgA、IgG、IgM等ELISA试剂盒（武汉圣洛捷生物技术有限公司）。1.2试验方法1.2.1药物准备太子参原药材：取太子参适量，除杂，60 ℃恒温干燥24 h，粉碎过四号筛即得。太子参多糖：取太子参适量，加入10倍量水，90 ℃回流提取3次，每次2 h，减压浓缩至80%醇沉3次，冷冻干燥即得。苯酚硫酸法测得其总糖含量为56.83%，DNS法测得其还原糖含量为3.17%，计算得其多糖含量为53.66%，多糖得率为19.75%，每0.20 g太子参多糖相当于太子参原药材1.00 g。1.2.2模型复制试验动物适应性饲养1 w后，随机分为2组。模型组50只按1.0 g/kg皮下注射利血平注射液[9-10]，正常对照组10只大鼠注射等体积生理盐水，每日1次，连续给药7 d。1.2.2.1模型成功的判断标准根据全国中西医结合虚证老年病防治学术会议制定的“中医虚证参考标准”及北京师范大学的脾虚模型复制标准[11-13]：消瘦、体重减轻，食少纳呆，大便溏泄，神态萎靡、毛色无光泽，蜷缩聚堆，易疲劳。第2、3项为主症，第1、4、5、6项为兼项，具备2项主症或1项主症2项兼症即为脾虚造模成功。1.2.2.2动物给药量的确定SD大鼠与人按照体表面积折算，等效剂量的换算因子为6.3∶1[14]。根据2020年版《中国药典》[1]，太子参原药材用量为9~30 g/d，因此设定原药材组每日剂量为2.0 g/kg（19.5 g/人·d/60 kg×6.3=2.0 g/kg）；每2.0 g太子参中可提取太子参多糖0.4 g，取其0.5、1.0、2.0倍为太子参多糖组给药剂量，设定太子参多糖低、中、高剂量组每日剂量分别为0.2、0.4、0.8 g/kg。1.2.3试验设计模型组造模成功的大鼠随机分为模型对照组、太子参原药材组和太子参多糖低、中、高剂量组5组，每组10只大鼠。各组均以1.5 mL/100 g灌胃给药，连续7 d。动物分组及处理方法详见表1。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.10.012.T001表1动物分组及处理方法Tab.1Animal grouping and treatment methods组别给药正常对照组生理盐水模型对照组生理盐水原药材组太子参粉末2.0 g/kg低剂量组太子参多糖0.2 g/kg中剂量组太子参多糖0.4 g/kg高剂量组太子参多糖0.8 g/kg1.2.4测定指标及方法1.2.4.1临床体征观察每日同一时间观察并记录大鼠体重、饮食、大便情况、精神状态、皮毛色泽等临床体征。1.2.4.2免疫器官指数末次给药24 h，各组大鼠精确称重，腹主动脉取血后处死大鼠，分离脾脏和胸腺，分别称重计算脾脏指数与胸腺指数。1.2.4.3免疫球蛋白及细胞因子末次给药24 h，腹主动脉取血，静置离心，分离血清，-20 ℃保存备用。严格按照试剂盒说明书测定脾虚大鼠血清中细胞因子IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α和免疫球蛋白SIgA、IgG、IgM的含量。1.3数据统计与分析数据采用SPSS 25.0统计分析软件进行差异显著性分析，结果以“平均值±标准差”表示。P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1太子参原药材或多糖对脾虚大鼠体重的影响（见表2）与正常对照组相比，造模后大鼠出现体重下降等特征症状，表明造模成功。给药后的各组大鼠与模型对照组相比，情况明显好转。由表2可知，造模后大鼠体重极显著降低（P0.01）。给药7 d后，各组体重均稍有所回升。太子参原药材组和太子参多糖中、高剂量组大鼠体重极显著高于模型对照组（P0.01）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.10.012.T002表2太子参原药材或多糖对脾虚大鼠体重的影响Tab.2Effect of Radix Pseudostellariae and polysaccharide on body weight of spleen deficiency rats组别造模前体重造模后体重给药后体重正常对照组227.3±2.58260.4±8.81316.5±12.33模型对照组230.4±4.09165.3±10.46##219.6±7.99##原药材组236.6±5.97161.4±5.68##244.4±12.90##**低剂量组230.9±1.17164.4±3.48##231.6±14.99##中剂量组228.3±4.39163.1±3.13##245.9±8.50##**高剂量组233.0±6.28160.3±2.21##250.6±3.69##**注 ：与正常对照组相比，#表示差异显著（P0.05），##表示差异极显著（P0.01）；与模型对照组相比，*表示差异显著（P0.05），**表示差异极显著（P0.01）；下表、图同。g2.2太子参原药材或多糖对脾虚大鼠免疫器官指数的影响（见表3）由表3可知，模型对照组免疫器官指数均极显著低于正常对照组（P0.01）；与模型对照组相比，太子参多糖低、高剂量组脾脏指数升高（P0.05），而中剂量组极显著升高（P0.01）。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.10.012.T003表3太子参原药材或多糖对脾虚大鼠免疫器官指数的影响Tab.3Effect of Radix Pseudostellariae and polysaccharide on immune organ index of spleen deficiency rats组别脾脏指数胸腺指数正常对照组2.49±0.181.82±0.10模型对照组2.09±0.12##1.19±0.14原药材组2.30±0.121.38±0.10低剂量组2.44±0.12*1.46±0.30中剂量组2.50±0.41**1.44±0.18高剂量组2.40±0.16*1.41±0.172.3太子参原药或多糖对脾虚大鼠细胞因子及免疫球蛋白水平的影响2.3.1太子参原药或多糖对脾虚大鼠细胞因子水平的影响（见图1）由图1可知，与正常对照组相比，模型对照组大鼠IL-2、IL-6和IFN-γ水平极显著降低（P0.01）；与模型对照组相比，各给药组IL-2、IL-6水平均极显著升高（P0.01），太子参多糖低、中剂量组IFN-γ水平极显著升高（P0.01），中、高剂量组TNF-α水平极显著升高（P0.01）。图1太子参原药或多糖对脾虚大鼠细胞因子水平的影响Fig.1Effect of Radix Pseudostellariae and polysaccharide on the levels of cytokine in the serum of spleen deficiency ratsXX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.10.012.F1a1XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.10.012.F1a22.3.2太子参原药或多糖对脾虚大鼠免疫球蛋白水平的影响（见图2）由图2可知，与正常对照组相比，模型对照组大鼠血清中SIgA水平均显著降低（P0.05），IgG、IgM水平极显著降低（P0.01）；与模型对照组相比，原药材组SIgA、IgM水平，低剂量组SIgA水平，中剂量组SIgA、IgG、IgM水平，高剂量组IgG、IgM水平极显著升高（P0.01）；低剂量组IgG、IgM水平显著升高（P0.05）。图2灌胃子参原药或多糖对脾虚大鼠免疫球蛋白水平的影响Fig.2Effect of Radix Pseudostellariae and polysaccharide on the levels of Immunoglobulin in the serum of spleen deficiency ratsXX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.10.012.F2a1XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.10.012.F2a23讨论利血平主要通过与肾上腺素能神经末梢囊泡膜上的Mg2+-ATP结合，耗竭体内的单胺类递质（NE、DA、5-HT），使动物产生类似脾虚的临床体征，是制备脾气虚模型的经典方法之一[15-16]。本试验采用利血平造模，大鼠出现体重下降、饮食减少、大便溏泄、毛色枯黄等情况，表明脾虚模型复制成功；免疫器官指数、免疫球蛋白和细胞因子水平显著降低，表明脾虚证可引起免疫功能下降[17]。给药后，太子参多糖中、高剂量组大鼠恢复情况更好，表明太子参多糖可明显改善大鼠脾虚症状。机体淋巴细胞分化、成熟和定居的主要场所是脾脏和胸腺，其指数的高低是评价机体免疫功能的重要指标[18]。本试验结果表明，太子参原药材及其多糖均可提高脾虚大鼠的脾脏指数，且太子参多糖较太子参原药材效果更为明显；治疗后各组胸腺指数与模型对照组相比均无显著增加，说明太子参多糖只能缓解利血平对大鼠胸腺造成损伤。细胞因子IL-2可促进淋巴细胞生长、增殖、分化；IL-6诱导B细胞和T细胞的增殖分化；IFN-γ具有促进抗原呈递、提高NK细胞、巨噬细胞和溶酶体活性的作用；TNF-α可杀伤抑制肿瘤细胞[19]。SIgA是肠道黏膜免疫的主要抗体，对内源和外源病原体都具有一定抵抗作用[20]，IgG是免疫蛋白的主要成分，也是体液免疫的主要抗体，具有抗病毒、抗肿瘤等活性；IgM在体液免疫初期防御中至关重要。太子参原药材及太子参多糖均可显著提高IL-2、IL-6、SIgA、IgM的水平，以中剂量组效果最为明显，结果表明，太子参及太子参多糖有利于脾虚大鼠的细胞免疫、黏膜免疫和体液免疫功能的恢复。4结论太子参及太子参多糖均可改善大鼠脾虚症状，提高大鼠免疫功能，其中太子参多糖疗效更为明显，表明太子参多糖为太子参益气健脾、调节免疫的主要有效成分。