近年来,抗生素的不规范使用加速耐药菌株的出现和药物残留,严重威胁动物和人类健康。2006年1月1日起,欧洲联盟内部禁止使用抗生素生长促进剂[1]。2020年7月1日起,我国全面实施“禁抗令”[2]。因此,研究人员一直在寻找合适的替抗饲料添加剂,以提高动物生产性能。中链脂肪酸(MCFA)是指碳原子数为6~12的饱和脂肪酸,广泛存在于天然食物中。中链脂肪酸与甘油发生酯化反应形成中链脂肪酸甘油酯。与长链脂肪酸相比,MCFA不需要与脂肪酸结合蛋白、脂肪酸转运蛋白或脂肪酸转位酶(FAT)结合。中链脂肪酸特殊的化学和物理特性使中链脂肪酸与长链脂肪酸在消化、吸收和转运等方面存在较大差异[1]。中链脂肪酸因独特的生理生化功能和消化吸收特点,具有调节代谢、提高免疫力、抑菌杀菌等多种作用,是最具有潜力的抗生素替代品之一[3-4]。椰子油是从椰肉中提取出来的天然植物油脂。椰子油脂肪酸中的中短链脂肪酸的比例约为80%,其中含有约50%的月桂酸以及超过15%的其他中链脂肪酸,是低碳脂肪酸最丰富的来源[3]。椰子油中的月桂酸和单月桂酸甘油酯(GML)具有抗菌和抗病毒的功能[5-6]。单月桂酸甘油酯能够提高动物的生长性能,提高机体的抗氧化能力,改善肉品质和风味,促进机体免疫系统的发育。因此,本试验旨在研究饲喂不同剂量椰子油对羔羊血清指标和抗氧化性能的影响,为椰子油在黑山羊养殖生产中的应用与推广提供参考。1材料与方法1.1试验材料黑山羊羔羊由中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所海南黑山羊种羊场提供;代乳粉购自北京精准动物营养研究中心;椰子油购自海南品椰品实业有限公司。1.2试验设计试验选用24只10日龄、平均体重(2.05±0.16)kg、体质健康的海南黑山羊羔羊,随机分为4组,每组6个重复。Ctrl组为对照组,饲喂基础日粮;LCO组饲喂基础日粮+4 g/d椰子油;MCO组饲喂基础日粮+6 g/d椰子油;HCO组饲喂基础日粮+8 g/d椰子油。基础日粮组成为代乳粉+精料+鲜王草。精料由种羊场自配,精料组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.003.T001表1精料组成及营养水平(风干基础)原料组成含量/%营养水平合计100.00王草50.00干物质/%88.71玉米32.00有机物/%93.33豆粕9.00粗蛋白/%16.55麸皮4.90粗脂肪/%2.64贝壳粉0.70中性洗涤纤维/%38.50碳酸氢钠0.30酸性洗涤纤维/%24.80食盐0.70钙/%0.31碳酸钙0.40磷/%0.20预混料2.00消化能/(MJ/kg)13.5注:1.每千克预混料为日粮提供:VA 15 000 IU、VD 5 000 IU、铁9 mg、铜12.5 mg、锌100 mg、锰40 mg、碘0.5 mg。2.营养水平均为计算值。1.3饲养管理试验饲养周期90 d,分两个阶段进行,10~70日龄采用人工哺乳的方式专人负责定时投喂。代乳粉经温水溶解,饲喂量为羔羊体重的2%。椰子油通过一次性注射器直接饲喂到羔羊口中。精料和鲜草按照50∶50的组分(干物质基础)给羔羊自由采食,每日饲喂2次(7:00和17:00),自由饮水。70日龄断奶后,停止饲喂代乳粉,饲养管理同上。1.4样品采集90 d后,试验期结束,各组羔羊空腹进行颈静脉采血,每只羊15 mL,5 mL肝素抗凝处理,4 ℃保存,待测血液生理指标。10 min常温静置30 min,3 000 r/min离心15 min,制备血清,-20 ℃保存,待测血清生化、激素和抗氧化指标。1.5测定指标及方法1.5.1生理指标红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)、淋巴细胞(LYM)、血红蛋白(HGB)委托海南中心西部医院通过美国贝克曼LH 750全自动血细胞分析仪测定。1.5.2血清激素指标胰高血糖素(GLN)、胰岛素(INS)、生长激素(GH)、瘦素(LEP)和糖皮质激素(GC)含量采用双抗体夹心法通过酶标仪测定。ELISA试剂盒均购自上海泛柯实业有限公司,严格按试剂盒说明进行操作。1.5.3血清生化指标血清中总蛋白(TP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(Glu)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)的含量采用普朗PUZS-600b全自动生化仪测定。试剂盒均购自北京丹大生物技术有限公司。1.5.4血清抗氧化指标使用南京建成生物工程研究所试剂盒测定血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性以及总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量。所有试验步骤均严格按照试剂盒说明书操作。1.6数据统计与分析采用Excel软件整理数据,采用SPSS 18.0软件进行单因素方差分析,采用Duncan's法进行多重比较,P0.05表示差异显著,P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1椰子油对羔羊血液生理指标的影响(见表2)由表2可知,HCO和MCO组HGB含量显著高于对照组(P0.05),且HCO组血液中HGB含量最高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.003.T002表2椰子油对羔羊血液生理指标的影响项目CtrlLCOMCOHCOSEMP值RBC/(×1012/L)11.5512.3611.0112.491.030.11WBC/(×109/L)22.5322.4022.8821.120.670.13PLT/(×109/L)410.49423.00443.19405.8733.440.86LYM/(×109/L)11.2910.3510.749.751.060.77HGB/(g/L)92.30b94.61b104.83a107.42a4.580.03注:同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P0.05),不同大写字母表示差异极显著(P0.01),字母相同或无字母表示差异不显著(P0.05);下表同。2.2椰子油对羔羊血清生化指标的影响(见表3)由表3可知,LCO、MCO和HCO组的IgA、IgM的含量显著高于对照组(P0.05)。LCO、MCO和HCO组的LDL含量极显著高于对照组(P0.01)。HCO组的TG含量显著高于对照组(P0.05)。MCO和HCO组的HDL含量极显著高于对照组(P0.01)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.003.T003表3椰子油对羔羊血清生化指标的影响项目CtrlLCOMCOHCOSEMP值TP/(g/L)62.8563.6561.9865.851.250.55ALT/(U/L)26.0025.5023.7529.001.230.53AST/(U/L)82.2576.7582.0079.251.740.82TC/(mmol/L)3.693.493.864.200.170.26TG/(mmol/L)0.58b0.67ab0.75ab0.82a0.050.02Glu/(mmol/L)4.503.853.994.080.110.23HDL/(mmol/L)1.14B1.06B1.99A2.14A0.350.01LDL/(mmol/L)1.07C2.12B2.86A3.08A0.250.01IgM/(g/L)5.66b7.72a8.42a7.35a0.180.03IgA/(g/L)2.61b3.67a3.91a3.65a0.300.02IgG/(g/L)32.5534.4039.3036.633.570.862.3椰子油对羔羊血清抗氧化指标的影响(见表4)由表4可知,MCO组的SOD活性显著高于其他3组(P0.05)。HCO组血清中的MDA含量显著高于其他3组(P0.05)。LCO组和MCO组的CAT活性显著高于对照组(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.003.T004表4椰子油对羔羊血清抗氧化指标的影响项目CtrlLCOMCOHCOSEMP值GSH-Px/(U/mL)515.16476.64531.20483.6340.880.47SOD/(U/mL)73.20c86.55b99.10a89.42b4.990.02CAT/(U/mL)1.51b1.87a1.84a1.69b0.100.03T-AOC/(mmol/L)0.560.540.730.660.040.09MDA/(μmol/L)2.43b2.11b2.20b3.14a0.280.032.4椰子油对羔羊血清素的影响(见表5)由表5可知,MCO组血清中GH的含量显著高于对照组(P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.003.T005表5椰子油对羔羊血清激素的影响项目CtrlLCOMCOHCOSEMP值GLN/(ng/L)148.85150.26148.86156.183.980.61INS/(mIU/L)12.6413.3815.8415.320.880.22GH/(μg/L)5.60b6.59ab7.47a6.82ab0.270.04LEP/(μg/L)1.221.281.321.110.040.49GC/(ng/L)256.61270.22287.67262.805.580.453讨论3.1椰子油对羔羊血清抗氧化指标的影响椰子油具有抗氧化和抗炎症功效。Famurewa等[7]以小鼠为模型研究,发现饲粮中添加椰子油可以提高大鼠肾脏中SOD、CAT和GSH-Px的活性,降低MDA含量。SOD、CAT、GSH-Px活性与T-AOC、MDA含量可以作为衡量机体抗氧化能力的重要指标[8]。SOD和GSH-Px能够有效清除机体内多余的自由基,保护机体细胞免受自由基的损伤。MDA为脂质氧化的产物,其含量反映机体氧化损伤的程度,对动物产品品质有一定影响。CAT可以降解清除体内的过氧化氢,减少自由基对细胞的损害。王贺泽等[8]研究发现,饲粮中添加GML能够显著提高断奶羔羊血清中GSH-Px活性和T-AOC含量。刘梦芸等[9]在蛋鸡饲粮添加300 mg/kg和450 mg/kg的GML,发现GML可以提高蛋鸡产蛋率以及血清中SOD和GSH-Px的活性,显著降低血清中ALT的活性以及MDA、TC的含量。Zhao等[10]给海兰褐蛋鸡分别饲喂0.30和0.45 g/kg的GML,发现血清中SOD和GSH-Px活性显著升高,MDA含量显著降低。本试验中,饲喂不同水平的椰子油后,羔羊血清中的SOD活性显著升高,LCO组和MCO组的MDA含量有所降低,CAT活性显著提高,HCO组的MDA含量显著升高,可能与椰子油的饲喂量有关。3.2椰子油对羔羊血液生理和血清生化指标的影响血液生理生化指标是衡量动物机体营养物质代谢和健康状况的重要依据。本研究表明,饲喂椰子油对羔羊血液中HGB含量以及血清中TG、LDL、IgM、HDL含量以及GH均有显著影响。TC、TC、HDL和LDL含量可以反映动物机体脂类代谢状况。LDL是血液中胆固醇的载体,帮助转运体内的胆固醇,其含量的增加将会引发血液中TC和TG含量的增加,危害机体的健康[11]。林颖等[12]研究发现,饲粮中添加500 mg/kg月桂酸能够显著降低血清TC含量,提高脂蛋白脂肪酶、肝脂酶活性,对肉鸡的生长性能和血脂代谢能力有促进作用。李涛等[13]研究表明,饲粮中同时添加0.4%GML和1%椰子油能够显著提高断奶仔猪血清中TG含量。王贺泽等[8]研究发现,饲粮中添加GML能够显著降低断奶羔羊血清中TG含量,显著提高血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。Mustafa[14]研究发现,添加4 g/kg的GML能够改善肉鸡的生产性能,显著提高肉鸡血清中TG和LDL含量。本研究发现,与对照组相比,饲喂不同水平的椰子油可以极显著提高LDL含量;LCO、MCO组的TG含量有上升趋势,HCO组的TG含量明显提高,与上述研究结果类似。Wang等[15]研究表明,给白虾饲喂1 050 mg/kg的GML后,血清TG和LDL含量显著增加,HDL含量显著降低,这可能是由于补充高剂量的GML会导致脂肪过度堆积,从而诱发代谢综合征,降低对虾的HDL含量。血清中的免疫球蛋白含量可以反映机体对疾病的抵抗能力。免疫球蛋白(IgA、IgM和IgG)是免疫应答中发挥免疫功能最重要的分子。Fortuoso等[16]研究发现,添加300 mg/kg的GML可以显著提高血清中的球蛋白和总蛋白含量。汤佳宁[17]研究发现,在基础日粮中添加500 mg/kg的GML可以显著提高肉鸡血清中的IgM和IgG含量。本研究中,饲喂不同水平的椰子油可以显著提高IgM、IgA的含量,而对IgG的含量影响不显著。3.3椰子油对羔羊血清激素的影响本试验结果显示,饲喂不同水平的椰子油对羔羊血清中的GLN、INS、Glu、LEP和GC的含量有一定影响,但影响均不显著。Wieland等[18]研究表明,饲粮中添加板栗提取物和GML能够提高新生犊牛的存活率,显著降低血糖浓度、谷氨酸脱氢酶(GLDH)和AST的活性。莫秋芬等[19]研究发现,GML对INS、Glu和LEP等指标均无显著影响,与本研究结果相似。生长激素是腺垂体前叶分泌的一种肽类激素,对机体内大多数的蛋白质、脂肪和糖原的代谢均有影响。本研究中,饲喂不同水平的椰子油可以显著提高血清中GH的含量。对其他激素含量的影响不显著的原因可能是GH具有抗胰岛素作用,可促进脂肪细胞的增殖和沉积,还可激活脂肪分解,调节脂肪细胞内分泌,影响其他激素的含量[20]。4结论饲喂椰子油可以提高羔羊的机体抗氧化能力,提高免疫功能;推荐饲喂量为6 g/d。

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