锦鲤（Cyprinus carpio haematopterus）是主要生活在亚热带和温带区的淡水观赏鱼类[1]。黄粉虫（Tenebrio molitor）又称面包虫，蛋白质含量可达40%~60%，黄粉虫中含有多种微量元素，是替代鱼粉的优质蛋白饲料源[2]。随着人们对水产动物的需求量增加，水产养殖业迅速发展，因此，对水产饲料的需求量激增。鱼粉是为鱼类提供营养的重要来源[3]。但是，由于鱼粉资源的紧缺，寻找新型的营养源成为亟待解决的问题[4]。昆虫类蛋白源具有高蛋白、高脂、来源丰富、价格低廉的优势[5]。黄粉虫的氨基酸组成相对均衡，且含有丰富的亚油酸，对鱼类生长发育起到重要的作用。黄粉虫是可以利用生物废弃物生长的资源昆虫[6]，在水产动物饲料中应用的潜力巨大，是替代鱼粉的最佳选择。本试验以黄粉虫替代鱼粉，测定黄粉虫对锦鲤非特异性指标、抗氧化指标及抗炎因子指标的影响，探究黄粉虫在锦鲤饲料中替代鱼粉的可行性，为黄粉虫在锦鲤饵料中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验锦鲤由天津市精武镇观赏鱼示范区提供，运至学校后消毒处理，暂养1 w，使其适应环境。选取体重（55.49±2.28）g、体长（114.127±4.06）cm的试验锦鲤。黄粉虫干虫由天津市水产研究所里自沽农场提供。1.2试验设计锦鲤经过暂养、测量外部指标，选出健康、规格基本一致的360尾锦鲤，随机分为6组，每组3个重复，每个重复20尾鱼。各组黄粉虫替代鱼粉比例为0（G1组）、20%（G2组）、40%（G3组）、60%（G4组）、80%（G5组）、100%（G6组）。饲养56 d。基础饵料购自天津市宝坻晨辉工厂，试验饵料组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.013.T001表1试验饵料组成及营养水平（风干基础）项目G1组G2组G3组G4组G5组G6组原料组成褐鱼粉15.012.09.06.03.00黄粉虫03.06.09.012.015.0虾粉7.07.07.07.07.07.0小麦7.36.45.54.73.93.5豆粕25.527.028.530.031.532.5面粉10.010.010.010.010.010.0谷朊粉12.012.012.012.012.012.0淀粉2.02.02.02.02.02.0豆油3.22.62.01.30.60多维1.01.01.01.01.01.0多矿4.04.04.04.04.04.0菜籽9.09.09.09.09.09.0玉米4.04.04.04.04.04.0合计100.0100.0100.0100.0100.0100.0营养水平粗蛋白50.850.250.450.650.350.7粗脂肪17.118.218.018.217.417.1灰分7.98.08.18.07.98.0水分23.923.123.123.024.024.0注：1.多维、多矿购自天津市晨辉饲料有限公司。2.营养水平均为实测值。%饵料投饲率为2%~3%，每天投喂2次，每天换水1/3~1/2，水温控制在（28.5±1）℃。1.3样品采集每组选取15尾锦鲤，尾柄取血，4 ℃、4 000 r/min离心10 min，-80 ℃冰箱保存，待检测。低温下进行解剖收集锦鲤肝脏，-80 ℃冰箱保存。测定组织样品时使用电动匀浆机研磨，其肝脏与生理盐水比例为1∶9，把匀浆液倒入离心管中，4 ℃、2 000 r/min离心10 min，吸取上清液进行指标测定。血浆可直接进行检测。1.4测定指标及方法测定血浆与肝脏中过氧化氢酶（CAT）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、溶菌酶（LZM）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT），试剂盒均购自南京建成科技有限公司；测定血浆前列腺素F2a（PGF2a）、前列腺素E2（PGE2）、补体C5a受体（C5aR）、补体C3受体（C3a）、白介素-6（IL-6）含量，试剂盒均购自南京建成科技有限公司。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel及SPSS 17.0进行分析处理，对所有数据进行单因素方差分析（One-way ANOVA），使用Duncan's法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1黄粉虫对锦鲤血浆及肝脏非特异性免疫指标的影响（见表2）由表2可知，随着黄粉虫替代鱼粉含量的增加，肝脏中ACP、AKP活性先升高后下降，G2组的AKP和ACP活性显著高于其他组（P0.05）。血浆中的ACP、AKP活性先升高后下降，G3组ACP活性显著高于其他组（P0.05），G2组AKP活性显著高于其他组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.013.T002表2黄粉虫对锦鲤血浆及肝脏非特异性免疫指标的影响项目G1组G2组G3组G4组G5组G6组血浆AST/(U/L)22.30±2.2016.22±2.5018.75±2.5019.40±3.5019.46±3.5020.86±3.20ALT/(U/L)12.93±1.20a6.83±0.50cd6.11±1.10cd7.52±1.10c7.95±1.10c9.82±1.50bAKP/(金氏单位/100 mL)17.67±0.41c27.78±0.20a24.42±0.15b24.25±0.10b23.27±0.20b20.19±0.15bACP/(金氏单位/100 mL)15.79±0.24c22.43±0.24b27.89±0.29a24.20±0.20b21.32±0.20b20.23±0.21bLZM/(U/L)1.43±0.70c1.82±0.30b2.12±0.20a1.77±0.10b1.70±0.10b1.66±0.10b肝脏AST/(U/g prot)13.42±1.4011.71±1.4010.93±1.3811.47±1.6611.98±0.6012.98±0.85ALT/(U/g prot)63.17±0.85a53.46±0.68b44.26±0.57c53.80±1.00b55.78±0.60b57.68±0.60bAKP/(金氏单位/g prot)37.54±1.09b41.37±0.18a32.44±0.17b26.41±0.20c25.82±0.13c25.20±0.39cACP/(金氏单位/g prot)24.22±2.73b29.60±2.71a14.60±0.12c13.99±0.15c13.84±0.28c13.83±0.08c注：同行数据肩标字母不同表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；表3与此同。血浆及肝脏中，G1组ALT活性显著高于其他组（P0.05），各组的AST活性均无显著差异（P0.05）；血浆中LZM活性先上升后下降，G1组LZM活性显著低于其他各组（P0.05）；G3组LZM活性显著高于其他各组。2.2黄粉虫对锦鲤血浆及肝脏抗氧化的影响（见表3）由表3可知，血浆及肝脏中，G1组、G2组的SOD活性显著高于其他各组（P0.05）。G3、G4、G5、G6组的CAT活性均显著低于G1、G2组（P0.05）。肝脏中，GSH-Px活性的变化趋势为先升高后降低，G2组的GSH-Px活性显著高于其他各组（P0.05）；血浆中，G2组的GSH-Px活性显著高于G1、G6组（P0.05）。血浆中，G2组的MDA含量显著低于G1组，显著高于G3、G4、G5、G6组（P0.05）；肝脏中，G1、G2组的MDA含量显著低于其他各组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.013.T003表3黄粉虫对锦鲤血浆及肝脏抗氧化的影响项目G1G2G3G4G5G6血浆SOD/(U/mL)84.86±1.10b117.3±4.70a64.34±6.80c63.32±3.80c62.43±3.80c61.76±4.10cMDA/(μmol/L)14.69±0.20a12.03±0.50b11.6±0.60c11.44±0.30c11.39±0.40c11.31±0.20cCAT/(U/mL)22.45±0.30a21.13±0.30a19.04±0.40b18.07±0.50b17.93±0.40b16.58±0.40bGSH-Px/(mmol/L)266.90±2.90c380.8±2.50a378.27±1.40a376.81±0.10a367.37±2.90a347.03±2.50b肝脏SOD/(U/mg prot)26.38±1.00a26.52±0.20a14.18±0.10b14.10±0.20b14.5±0.20b13.99±0.60bMDA/(μmol/g prot)1.37±0.40b1.33±0.10b1.41±0.10a1.43±0.10a1.62±0.20a1.65±0.20aCAT/(U/mg prot)6.03±0.60a4.16±0.40a2.09±0.20b1.99±0.20b1.98±0.70b1.88±0.20bGSH-Px/(μmol/g prot)177.20±5.10b235.60±1.60a177.20±3.10b176.20±2.90b176.40±1.90b175.80±1.90b2.3黄粉虫对锦鲤血浆的抗炎因子的影响（见表4）由表4可知，随着黄粉虫替代鱼粉含量的增加，血浆中PGF2a含量呈现下降趋势，G1组显著高于其他各组（P0.05）；血浆中G5、G6组C5aR含量显著低于其他各组（P0.05）；血浆中G1组C3a含量显著高于其他各组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.013.T004表4黄粉虫对锦鲤血浆抗炎因子的影响组别PGF2a/(ng/L)PGE2/(ng/L)C5aR/(μg/L)C3a/(μg/L)IL-6/(ng/L)G1组145.05±1.30a301.43±1.404.28±1.89a38.87±9.67a19.30±6.27G2组76.22±4.00b346.30±1.604.30±1.40a25.23±7.31b20.30±11.30G3组75.53±1.60b434.25±2.904.61±2.20a24.98±2.13b20.53±4.30G4组64.42±2.80b355.68±1.303.73±0.97a24.03±6.63b21.42±4.10G5组38.53±1.60b292.37±1.700.69±0.16b23.13±8.76b20.53±3.40G6组37.98±9.70b270.34±1.100.55±0.13b22.97±3.16b19.50±2.45注：同列数据肩标字母不同表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）。3讨论3.1黄粉虫对锦鲤血浆及肝脏非特异性免疫的影响AST、ALT是判断鱼类肝功能有无疾病和生理状况是否健康的主要标志，肝脏受损时，ALT、AST活性明显提高[7-8]。本试验中，40%黄粉虫替代鱼粉的锦鲤，血浆和肝脏中ALT活性显著低于其他组，各组AST无显著性变化，表明肝脏健康状况有所好转，与黄旺[9]得出的基础饵料中添加50%黄粉虫替代鱼粉不会对鱼类的肝脏造成影响的结果一致。AKP是一种水解酶，能够把鱼类体内的各种细菌消除降解，有助于鱼类对葡萄糖、钙的吸收[10-11]。ACP称为酸性磷酸酶，不仅参与磷酸酯的代谢，还参与其他的生长代谢[12]。本试验中，G2组血浆和肝脏中的AKP活性最高；G3组血浆中ACP活性最高，G2组肝脏中ACP活性显著高于其他组。本研究表明，添加20%~40%黄粉虫可以提高血浆和肝脏中ACP和AKP活性，增强锦鲤的非特异性免疫力。曹振杰等[13]研究发现，添加黄粉虫虫粉及虫壳可提高南美白对虾ACP和AKP活力。白燕等[14]研究表明，在刺参基础饵料中添加黄粉虫能够显著增强刺参的生长性能。上述研究均与本试验研究结果相似。原因可能与黄粉虫中含有抗菌肽[15]及免疫活性因子对免疫系统的调控起重要的作用[16]。LZM是一种不耐热的碱性蛋白质，能够破坏和消除入侵体内的异物令病毒失活[17]。本试验中，血浆中的LZM随黄粉虫替代鱼粉含量的增加，出现先增高后降低的趋势，G2、G3、G4、G5、G6组显著高于G1组，且G3组LZM活性最高。黄粉虫体内除了含有丰富的常规营养物质以外，还含有大量的甲壳素[2]。甲壳素及其衍生物壳聚糖具有降血脂、提高免疫力、避免炎症发生[18]的优点，说明添加黄粉虫中的甲壳素可提高溶菌酶的活力。3.2黄粉虫对锦鲤血浆和肝脏抗氧化功能的影响CAT、SOD和GSH-Px是3种在抗氧化平衡中不可或缺的酶[19]。SOD活性是间接说明抗氧化和氧化平衡的标志，SOD活性的高低也能说明机体自身的清除自由基的能力，预防细胞与机体受到伤害[20]。CAT可以通过H2O2的催化反应，使其分解成H2O和O2从而将机体中多余的H2O2剔除出去[21]。GSH-Px是1种在机体内广泛存在的酶，主要作用是催化过氧化氢分解、稳定细胞膜的结构及维护巯基酶的活性。MDA是天然的脂质过氧化物氧化分解而来的产物。机体受到的损伤程度及细胞间接被自由基攻击的程度和MDA的含量呈正相关性[22]。本试验中，黄粉虫替代鱼粉的含量增加，血浆和肝脏中的CAT活性和SOD活性显著下降（除G2组），说明20%黄粉虫替代鱼粉不会对鱼体的健康造成影响，与唐扬等[23]研究的黄粉虫替代鱼粉对牛蛙机体造成损伤的结果一致。血浆中的GSH-Px含量显著上升，说明不同比例的黄粉虫替代鱼粉后，会提高细胞中氧自由基等生物活性因子的含量和抗氧化酶的浓度，使GSH-Px活性提高[24]。血浆中的MDA含量和肝脏中G2组MDA含量显著下降，说明黄粉虫可有效地增强机体抗氧化能力，对生物膜结构的完整具有重要的保护作用。胡俊茹[25]在以黑水虻幼虫粉替代鱼粉的研究中也得到同样结果。肝脏中的MDA含量显著升高，说明锦鲤机体内脂质过氧化物质的积累量增多，细胞膜受到不同程度的损伤，影响鱼体自身抗氧化能力。3.3黄粉虫对锦鲤血浆的抗炎因子的影响前列腺素PGF2a是前列腺素类的代谢产物，存在于血浆及各体液中[26]。前列腺素PGF2α呈现升高的趋势，会导致肌肉疼痛、血管收缩，并伴有痉挛性疼痛[27]。本试验结果表明，血浆中前列腺素PGF2a随黄粉虫替代鱼粉的含量增加呈下降的趋势，说明黄粉虫会使鱼类体内脂肪酸减少导致PGF2a浓度降低[28]。前列腺素E2（PGE2）有利于鱼体血管的舒张及血液流通，有很好的免疫防御和抗炎功能。补体受体C3a和C5a主要分布在肥大细胞、单核巨噬细胞和内皮细胞中，对补体的吞噬作用、免疫调控作用和激活炎症效应发生介导[29]。本试验中，补体受体C3a、C5a含量随黄粉虫取代鱼粉的含量的增加，血浆中G1、G2、G3、G4组的C5a含量无显著性差异，但从G5组显著下降；血浆中G2、G3、G4、G5、G6组C3a含量显著低于G1组，说明黄粉虫代替鱼粉过量会引起补体浓度下降，不利于补体免疫调控作用和激活炎症效应。本试验与郭志强等[30]和刘莉如[31研究的抗菌肽可提高公鸡和肉兔中C3、C5补体的活性的结果不同，可能是黄粉虫的不饱和脂肪酸过高抑制了抗菌肽的表达[32]。白细胞介素在鱼体免疫反应应答方面起到重要作用。在激活抗炎细胞和分化免疫细胞具有调节作用[33]。本试验中，鱼体血浆中白细胞介素IL-6未显示出各组间差异显著性，说明黄粉虫代替鱼粉对鱼体白细胞介素IL-6无太大的影响。4结论本试验通过黄粉虫对锦鲤血浆和肝脏的非特异性、抗氧化以及抗炎因子的影响结果，得出黄粉虫替代20%~40%的鱼粉较为适宜。