凡纳滨对虾（Penaeus vannamei）是世界上养殖量最大的对虾品种之一[1]。日粮品质能够影响凡纳滨对虾的成长。氨基酸不仅影响水产动物的生长，而且对水产动物具有重要的免疫作用。甘氨酸对凡纳滨对虾生长和血液免疫指标的影响较为明显[1-3]。甘氨酸最早作为诱食剂在水产行业中广泛应用[4]，能够提高抗氧化能力，还可以保持日粮的新鲜度。本试验研究日粮中添加不同水平甘氨酸对凡纳滨对虾生长、消化酶、抗氧化和免疫性能的影响，为优化凡纳滨对虾日粮配方提供参考。1材料与方法1.1试验饲料试验采用单因素试验设计，在基础日粮基础上分别添加2.0%（对照组）、2.4%、2.8%、3.2%、3.6%、4.0%的甘氨酸，配制成6组饲料，以丙氨酸调节氮平衡。试验日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.014.T001表1试验日粮组成及营养水平项目D1(2.0%)D2(2.4%)D3(2.8%)D4(3.2%)D5(3.6%)D6(4.0%)原料组成进口鱼粉24.0024.0024.0024.0024.0024.00豆粕18.0018.0018.0018.0018.0018.00花生粕12.0012.0012.0012.0012.0012.00面粉17.8517.8517.8517.8517.8517.85虾粉5.005.005.005.005.005.00谷朊粉3.003.003.003.003.003.00鱿鱼膏5.005.005.005.005.005.00磷酸二氢钙2.002.002.002.002.002.00盐0.200.200.200.200.200.20鱼油3.003.003.003.003.003.00氯化胆碱0.500.500.500.500.500.50多维0.100.100.100.100.100.10多矿0.200.200.200.200.200.20VC酯0.100.100.100.100.100.10磷脂2.002.002.002.002.002.00羧甲基纤维素1.001.001.001.001.001.00三氧化二钇0.050.050.050.050.050.05甘氨酸2.002.402.803.203.604.00丙氨酸4.003.603.202.802.402.00合计100.00100.00100.00100.00100.00100.00营养水平粗蛋白39.1639.1639.1639.1639.1639.16粗脂肪8.428.428.428.428.428.42注：1.多维和多矿购自帝斯曼（中国）有限公司。2.营养水平均为计算值。%所有饲料原料粉碎，过80目筛，混匀，加入鱼油、鱿鱼膏和水，搅拌混匀，制成直径1.5 mm的硬颗粒日粮，自然冷却风干，装入密封袋中，置于4 ℃冰箱中保存，备用。1.2试验动物和饲养管理养殖试验在天津市西青区畜牧水产局养殖示范基地进行，凡纳滨对虾由该基地提供。选取健康、平均体重为（4.2±0.4）g的凡纳滨对虾720尾，随机分成6组，每组3个重复，每个重复40尾，随机分配到18个网箱（1 m×1 m×1.5 m）中进行养殖。试验开始前，进行7 d的驯化。每天8：00和17：00投喂2次，投饲率3%~5%，试验期42 d。每天9：30和18：30测量水温、pH值和溶解氧并观察对虾的健康状况，水温24.9~30.6 ℃，pH值7.59~8.88，溶解氧9.26~9.88 mg/L。1.3样品采集养殖试验结束后，凡纳滨对虾空腹24 h，对每个网箱的对虾进行计数并测量体长、称重。围心腔采血，抗凝剂EDTA与血液按体积比1∶1混合，4 ℃条件下5 000 r/min离心10 min，取上清液，在-80 ℃保存，待测。采血后取肝胰腺。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能成活率(SR)=(Nt/N0)×100%(1)增重率(WGR)=[(Wt-W0)/W0]×100%(2)特定生长率(SGR)=[(lnWt-lnW0)/t]×100%(3)饵料系数(FCR)=F/(Wt-W0)(4)肥满度(CF)=(Wb/L3)×100%(5)式中：Nt为试验末虾数量；N0为试验初虾数量；F为投饵量的干质量（g）；Wt为末体均重；W0为初体均重；t为试验天数；Wb为每尾虾末体重；L为每尾虾末体长。1.4.2生理生化指标检测凡纳滨对虾血清酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、溶菌酶（LSZ）、超氧化物歧化酶（SOD）、酚氧化酶（PPO）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）活性以及丙二醛（MDA）含量。检测凡纳滨对虾肝胰脏淀粉酶（AMS）、胰蛋白酶（TRY）、脂肪酶（LPS）、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）。所有指标均根据南京建成生物工程研究所相应的试剂盒操作说明书进行测定。1.5数据统计与分析采用SPSS 19.0软件对试验数据进行统计，并进行单因素方差分析，采用Duncan's法进行组间多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1日粮中添加不同水平甘氨酸对凡纳滨对虾生长性能的影响（见表2）由表2可知，D5、D6组的增重率和特定增长率显著高于对照组（D1）（P0.05），且D5组的增重率和特定增长率最高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.014.T002表2日粮中添加不同水平甘氨酸对凡纳滨对虾生长性能的影响组别W0/gWt/gSR/%WGR/%SGR/(%/d)FCRCF/%D1（2.0%）4.59±0.0217.70±0.3385.00±3.81ab285.40±5.65a3.21±0.04a0.77±0.020.63±0.06D2（2.4%）4.50±0.0918.57±0.1489.00±1.50b317.08±4.31ab3.40±0.03ab0.71±0.000.62±0.01D3（2.8%）4.29±0.1218.40±1.2678.50±2.08a328.03±21.60ab3.46±0.12ab0.72±0.060.63±0.03D4（3.2%）3.99±0.2318.64±1.2589.30±2.05b369.12±35.97ab3.67±0.18ab0.70±0.050.62±0.04D5（3.6%）4.00±0.2519.97±1.0187.00±4.54ab400.81±23.49b3.83±0.11b0.64±0.040.63±0.04D6（4.0%）3.98±0.2619.61±0.9187.83±2.60ab399.05±47.37b3.81±0.24b0.65±0.050.63±0.05注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2日粮中添加不同水平甘氨酸对凡纳滨对虾免疫指标的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，D2、D6组凡纳滨对虾血清ACP活性显著降低（P0.05）；血清中LSZ活性和血清中AKP活性在D5组达到最大值，但差异不显著（P0.05）。肝胰腺ACP活性在D5组达到最大值，在D3组为最小值；肝胰腺AKP活性在D4组达到最大值，在D3组为最小值，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.014.T003表3日粮中添加不同水平甘氨酸对凡纳滨对虾免疫指标的影响组别血清肝胰腺LSZ/(mg/L)ACP/(金氏单位/L)AKP/(金氏单位/L)ACP/(金氏单位/g)AKP/(金氏单位/g)D1（2.0%）0.72±0.263.35±0.67c2.32±0.3633.74±4.3313.68±2.04D2（2.4%）0.69±0.210.81±0.21a1.89±0.1422.69±3.7412.49±0.59D3（2.8%）0.76±0.202.49±0.33bc2.39±0.1020.87±6.0310.24±0.29D4（3.2%）0.79±0.273.18±0.66c1.97±0.2921.33±3.3816.86±0.80D5（3.6%）0.90±0.283.02±0.45c2.41±0.9029.22±1.9816.80±0.49D6（4.0%）0.75±0.271.51±0.12ab1.73±0.3727.15±4.3013.84±0.972.3日粮中添加不同水平甘氨酸对凡纳滨对虾肝胰腺消化酶的影响（见表4）由表4可知，与对照组（D1）相比，D4、D5组中胰蛋白酶活性显著升高（P0.05），在D4组达到最大值。D2组胰淀粉酶活性显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.014.T004表4日粮中添加不同水平甘氨酸对凡纳滨对虾肝胰腺消化酶的影响组别蛋白酶淀粉酶脂肪酶D1（2.0%）1 261.90±336.60a84.25±21.60a0.06±0.02D2（2.4%）1 445.58±53.13a178.97±40.37b0.05±0.02D3（2.8%）1 397.96±113.63a87.10±7.72a0.05±0.01D4（3.2%）3 051.02±132.78b102.25±11.20a0.10±0.02D5（3.6%）2 088.44±593.87b97.47±17.41a0.11±0.02D6（4.0%）2 166.67±70.29ab114.40±2.31a0.10±0.04U/mg prot2.4日粮中添加不同水平甘氨酸对凡纳滨对虾血清抗氧化指标的影响（见表5）由表5可知，与对照组相比，D3、D4、D5组凡纳滨对虾血清GSH-Px活性显著升高（P0.05），且在D4组达到最大值；D2和D5组凡纳滨对虾血清CAT活性显著降低（P0.05），D3和D4组的CAT活性显著升高（P0.05）；D2、D5、D6组凡纳滨对虾血清SOD活性显著降低（P0.05），且在D6组达到最小值。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.014.T005表5日粮中添加不同水平甘氨酸对凡纳滨对虾抗氧化指标的影响组别PPO/(U/mL)GSH-Px/(U/mL)CAT/(U/mL)MDA/(μmol/L)SOD/(U/mL)D1（2.0%）40.00±4.48ab6.00±0.13a1.14±0.07b7.57±2.2450.75±8.23cD2（2.4%）38.56±4.43ab6.95±0.38ab0.51±0.04a4.89±0.4719.20±3.90abD3（2.8%）42.44±0.59ab9.42±0.73c2.91±0.11d4.76±2.4036.93±12.42bcD4（3.2%）44.89±0.44b9.48±0.29c1.49±0.09c5.83±1.6338.73±12.30bcD5（3.6%）35.00±0.88a8.28±0.32bc0.53±0.05a2.69±0.3317.17±6.68abD6（4.0%）41.44±2.75ab6.38±0.44ab1.03±0.08b3.20±1.446.65±2.35a3讨论3.1日粮添加不同水平甘氨酸对凡纳滨对虾生长性能的影响甘氨酸能够诱导动物摄食并促进生长[5]，饮食中添加甘氨酸能够显著提高养殖牲畜的日增重和体重[6-9]。金艳等[10]研究发现，甘氨酸能促进草鱼幼鱼生长。Xie等[11]研究发现，甘氨酸能提高凡纳滨对虾的特定生长率和增重率，最优含量为2.56%。但本试验中，凡纳滨对虾的增重率与特定生长率在日粮甘氨酸水平为2.0%~3.2%之间时无显著差异，在甘氨酸水平为3.6%~4.0%时显著提高。本研究结果与Xie等[11]的结果相差较大，可能是使用的日粮配方不同。本试验中，各处理组存活率方面无显著差异，与Xie等[11]、潘孝毅等[12]的研究结果一致。关洪斌等[4]报道，甘氨酸能够显著降低锦鲤的饵料系数。本试验甘氨酸添加含量对饵料系数的影响虽不显著，但也有降低的趋势。3.2日粮中添加不同水平甘氨酸对凡纳滨对虾消化酶活性的影响水产动物对日粮的消化依靠消化器官中的消化酶，而且消化酶与日粮中蛋白水平存在一定适应性。蛋白水平在一定范围内与机体蛋白酶活性呈正相关[13]。但是，关于作为蛋白质组分的甘氨酸对消化酶影响的研究较少。在本试验中，试验组的胰淀粉酶和胰蛋白酶活性与对照组有显著差异，甘氨酸含量3.2%组胰蛋白酶活性（3 051.02 U/mg prot）和2.4%组淀粉酶活性（178.97 U/mg prot）较高，而对脂肪酶活性没有显著影响，与叶陈静等[5]的研究结果基本一致。3.3日粮中添加不同水平甘氨酸对凡纳滨对虾抗氧化指标的影响SOD对机体的氧化与抗氧化平衡有重要作用，SOD活性与生物免疫水平密切相关[14]。MDA是脂质过氧化与氧化损伤的重要产物，MDA的含量降低代表机体抗氧能力的提高。MDA与SOD均是表现机体抗氧化能力的重要指标[15-16]。潘孝毅等[12]研究发现，甘氨酸水平在2.75%时显著提高大黄鱼的CAT和SOD活性，并显著降低MDA含量。冯国强等[7]研究发现，甘氨酸降低了鸡体内的MDA含量。本试验中，甘氨酸对CAT和SOD活性的影响与上述研究相同，但对MDA含量的影响与上述研究不同，原因可能是因为饲养动物种类、饲料蛋白和丙氨酸含量不同所致。甘氨酸是机体内抗氧化系统中的内源性抗氧化剂还原型谷胱甘肽（GSH）的组成氨基酸，其抗氧化作用可能通过提高GSH的合成量实现，而GSH的活性与GSH-Px活性密切相关，二者共同参与体内自由基的代谢调节[4,17]。Sheth等[18]研究表明，甘氨酸对机体氧化损伤的保护机制可能是甘氨酸受体被激活，引发氯离子的内流和随后的膜超极化，从而维持细胞的能量生成，降低了氧化损伤。目前，甘氨酸在虾类中的相关研究甚少，应进一步深入研究。4结论本试验条件下，凡纳滨对虾饲料中甘氨酸的适宜添加量为3.6%。