天然牧草是草原牧区草食家畜粗饲料的主要来源，其营养价值是影响畜产品质量和家畜生长发育的关键因素，对牧区畜牧业的可持续发展具有重要意义[1-4]。草原牧区调制天然干草易受降雨、光照、机械设备等因素影响[5]，会影响天然干草的饲用价值和适口性[6]。将天然牧草调制成青贮饲料，能够保存牧草营养物质，延长饲草保存时间[7]，是1种高效的牧草加工利用和贮藏方式[8]。天然牧草青贮的研究主要集中在刈割时期、牧草含水量、青贮密度、牧草切割长度等方面[9]；天然牧草青贮添加剂的研究主要集中在乳酸菌、酶制剂和营养性添加剂等方面[10]。乳酸菌作为青贮发酵中的有益菌，能够降低青贮pH值，抑制有害菌繁殖生长[11-12]。天然牧草表面乳酸菌附着量少，常在制作青贮时添加乳酸菌来增加其表面的乳酸菌数量，提高天然牧草青贮发酵品质[13]。糖蜜是1种营养型添加剂，可以为青贮饲料发提供发酵底物[14]，青贮过程中添加糖蜜可以加速青贮饲料的发酵进程[15]。研究发现，添加乳酸菌和糖蜜可以不同程度的改善和提高食叶草、燕麦秸秆、羊草和全珠构树的发酵品质和体外干物质消化率[16-19]。本试验以天然打草场牧草为研究对象，旨在探讨添加乳酸菌和糖蜜对天然牧草青贮发酵品质及营养价值的影响，为牧区优质天然牧草青贮饲料的生产提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验材料以内蒙古赤峰市天然打草场牧草为主，试验地主要牧草群落组成概况见表1。天然牧草于2020年7月下旬人工刈割，留茬高度2~5 cm，含水量晾晒至55%~60%，利用铡刀切短至1~2 cm，将添加剂均匀地喷洒到切短的天然牧草上，混匀。对照组添加蒸馏水，依次装入标记好号码真空包袋，每袋中填充150 g，真空处理，置于避光、干燥且温度稳定的室温保存。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.020.T001表1试验地主要牧草群落组成概况序号植物名称拉丁学名科属重要值1羊草Leymus chinensis禾本科17.992大针茅Stipa grandis禾本科14.933达乌里胡枝子Lespedeza davurica豆科12.924扁穗冰草Agropyron cristatum禾本科8.755蒙古韭Allium mongolicum百合科8.226香青兰Dracocephalummoldavica唇形科6.017芦苇Phragmites australi禾本科4.128中华隐子草Cleistogenes chinensis禾本科3.499并头黄芩Scutellaria scordifolia唇形科3.3310岩败酱Patrinia rupestris败酱科2.9411扁蓿豆Melissilus ruthenicus豆科2.5112黄芪Astragalus membranaceus豆科2.2913糙隐子草Cleistogenes squarrosa禾本科2.0514欧李Cerasus humilis蔷薇科2.0115甘草Glycyrrhiza uralensis豆科1.9716麻花头Serratulacentauroides菊科1.8517冷蒿Artemisia frigida菊科1.6818猪毛蒿Artemisia scoparia Waldst菊科1.3619大花飞燕草Delphiniumgrandiflorum毛茛科0.9320苦参Sophora flavescens Ait豆科0.431.2试验设计试验设置4个组：对照组（无添加剂）、单独添加乳酸菌剂组（添加量3% FW）、单独添加糖蜜组（添加量4% FW）和混合添加乳酸菌剂和糖蜜组（3% FW＋4% FW）。青贮添加剂的添加量均为鲜重基础，每组3个重复，乳酸菌剂由日本畜产草地研究所提供，糖蜜购自山东鑫泓越化工有限公司。青贮60 d后开袋测其相关指标。1.3测定指标及方法1.3.1营养成分干物质（DM）含量采用烘干法进行测定，将青贮样品置于鼓风干燥箱65 ℃烘干48 h，准确称量，计算干物质含量；粗蛋白质（CP）含量采用全自动凯氏定氮仪进行测定；粗灰分（Ash）利用灼烧法进行测定；可溶性碳水化合物（WSC）采用蒽酮-硫酸比色法进行测定；酸性洗涤纤维（ADF）和中性洗涤纤维（NDF）含量采用ANKOM纤维分析系统进行测定。1.3.2发酵品质在无菌环境下，称取10 g青贮样品置于90 mL无菌蒸馏水中摇匀，过滤，滤液置于离心管内，用于pH值、有机酸和氨态氮的测定。pH值采用便捷式ST3100 pH计进行测定；有机酸采用高效液相色谱仪测定；氨态氮采用苯酚-次氯酸钠比色法测定。1.3.3微生物采用平板计数法计数，将上述滤液按10倍稀释法依次稀释为10-1、10-3、10-5，测定青贮饲料中乳酸菌（lactic acid bacteria）、霉菌（molds）、酵母菌（yeasts）、一般好氧性细菌（aerobic bacteria）和大肠杆菌（coliform）数量。1.4数据统计与分析数据前期采用Excel 2010软件进行处理，采用SAS 9.0软件进行数据分析，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1原料的营养成分含量及微生物组成（见表2）由表2可知，原料中天然牧草的DM含量为37.72%、CP含量为10.83%、Ash含量为5.48%、NDF含量为62.98%、ADF含量为36.58%、WSC含量较低为4.31%；原料中的一般性好氧细菌数量较高为8.75 lgCFU/g，酵母菌和大肠杆菌数量分别为6.35 lgCFU/g和5.82 lgCFU/g，乳酸菌数量最少为5.11 lgCFU/g，霉菌未检出。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.020.T002表2原料的营养成分含量及微生物组成项目含量营养组成/%DM37.72CP10.83Ash4.58NDF62.98ADF36.58WSC4.31微生物组成/(lgCFU/g)乳酸菌5.11一般好氧细菌8.75大肠杆菌5.82酵母菌6.35霉菌ND注：ND表示未检出；下表同。2.2添加剂对天然牧草青贮营养品质的影响（见表3）由表3可知，L组和L+M组的DM含量极显著高于对照组和M组（P0.01），各试验组的CP含量显著高于对照组（P0.05），其中L+M组的DM和CP含量最高，分别为35.96%和12.21%。M组和L+M组的WSC含量均极显著高于L组和对照组（P0.01）；L组、M组、L+M组的ADF、NDF含量均显著低于对照组（P0.05）；各组间的Ash含量无显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.020.T003表3添加剂对天然牧草青贮营养品质的影响组别DMCPAshNDFADFWSC对照组34.26±0.40Bc10.21±0.15Cc5.96±0.5562.11±1.61Aa34.45±1.02Aa1.15±0.12BcL组35.59±0.34Aab11.32±0.52ABb6.14±0.8257.13±1.91Bbc31.58±1.99ABb1.35±0.31BcM组34.58±0.25Bbc10.92±0.41BCb5.92±0.4958.44±1.14ABb31.72±0.68ABb2.04±0.07AbL+M组35.96±0.59Aa12.21±0.28Aa5.66±0.5155.11±1.90Bc30.04±0.63Bb2.49±0.15Aa注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。%2.3添加剂对天然牧草青贮发酵品质的影响（见表4）由表4可知，各添加剂组的pH值和氨态氮含量均极显著低于对照组（P0.01），且L+M组的pH值和氨态氮含量最低，分别为3.94和14.53 g/kg；L+M组的乳酸含量极显著高于其他处理组（P0.01），为29.59 g/kg；L+M组的乙酸含量极显著低于其他处理组（P0.01），为11.66 g/kg；各处理组均检出少量丙酸，其中对照组的丙酸含量极显著高于其他处理组（P0.01）；各处理组中均未检出丁酸。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.020.T004表4添加剂对天然牧草青贮发酵品质的影响组别pH值氨态氮/(g/kg)乳酸/(g/kg)乙酸/(g/kg)丙酸/(g/kg)丁酸/(g/kg)对照组4.32±0.04Aa35.83±1.52Aa17.33±1.10Cd14.41±0.91Aa0.46±0.06AaNDL组4.03±0.01Bb20.42±2.11Bb25.78±0.45Bc13.80±0.54Aab0.19±0.01BbNDM组4.14±0.04Cc18.27±1.05Cc23.21±0.50Bb12.67±0.59ABbc0.21±0.09BbNDL+M组3.94±0.02Dd14.53±0.82Dd29.59±1.39Aa11.66±0.56Bc0.09±0.01BcND2.4添加剂对天然牧草青贮微生物组成的影响（见表5）由表5可知，L+M组乳酸菌数量极显著高于其他组（P0.01），为7.14 lgCFU/g；L+M组的一般好氧细菌和酵母菌数量均极显著低于其他各组（P0.01），分别为2.55 lgCFU/g和4.72 lgCFU/g；各处理组中均未检出大肠杆菌和霉菌。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.18.020.T005表5添加剂对天然牧草青贮微生物组成的影响组别乳酸菌一般好氧细菌大肠杆菌酵母菌霉菌对照组4.34±0.19Cc4.70±0.60AaND6.08±0.10AaNDL组6.43±0.10Bb3.72±0.41AbND5.57±0.49AbNDM组5.95±0.44Bb3.63±0.17AbND5.49±0.11AbNDL+M组7.14±0.45Aa2.55±0.15BcND4.72±0.14BcNDlgCFU/g3讨论3.1添加剂对天然牧草青贮营养品质的影响天然牧草青贮是我国牧区畜牧业稳定发展的重要保障，可以延长天然牧草保存时间，保障牧区家畜在冬季能够采食到鲜绿饲草，保留牧草营养价值。青贮饲料的营养价值直接影响家畜生长状况，CP、ADF和NDF含量是评价青贮饲料的重要指标[17]，优质青贮饲料一般具有较高的CP含量和较低ADF和NDF含量[18]。天然牧草因特殊的生长环境和生物特性，乳酸菌数量附着较少、WSC含量较低、含水量较低、缓冲能值较高，直接青贮很难成功[20]。本研究发现，添加单独或混合添加添加剂对天然牧草青贮的蛋白质含量均具有改善作用，可能因为添加剂的加入能够快速降低天然牧草青贮饲料pH值，抑制不良微生物对蛋白质的分解[21]；单独或混合添加乳酸菌和糖蜜均不同程度降低天然牧草ADF和NDF含量，混合添加时的效果最佳，因为混合添加乳酸菌和糖蜜为青贮饲料的发酵提供底物，同时，提供的乳酸菌能够在较短的时间利用发酵底物产生大量微生物酶分解纤维，加快植物中ADF和NDF的降解，与付锦涛等[19]和谢华德等[22]报道结果一致。3.2添加剂对天然牧草青贮发酵品质的影响pH值和氨态氮含量是评价青贮饲料发酵品质的重要指标。Mcdonald[23]研究表明，成功的青贮饲料pH值一般低于4.2，丁酸含量一般低于2.0 g/kg DM。本研究发现，单独或混合添加乳酸菌和糖蜜能够有效降低青贮饲料中氨态氮含量，主要因为加入添加剂降低pH值，酸性环境抑制氨基酸和蛋白质的分解程度，导致氨态氮含量下降，与侯美玲等[13]研究结果一致。添加糖蜜可以在青贮早期增加发酵底物，减少营养物质的耗损，加快乳酸菌的繁殖，与李龙兴等[24]研究结果一致。本试验研究发现，混合添加乳酸菌和糖蜜时，天然牧草青贮中乳酸含量最高，青贮效果最好，因为添加糖蜜为青贮饲料提供乳酸菌发酵所利用的底物，乳酸菌添加剂的加入能够加快乳酸发酵进程，乳酸含量增加，使pH值控制在4.2以下，与付锦涛等[19]研究结果一致。因此，混合添加乳酸菌和糖蜜可以有效提高天然牧草发酵品质。3.3添加剂对天然牧草青贮微生物组成的影响饲料原料附着的乳酸菌含量是决定青贮能否成功的关键，原料中乳酸菌附着含量大于105 CFU/g FM时，青贮更容易成功[25]。天然牧草原料附着的乳酸菌较少，本试验研究发现，添加乳酸菌和糖蜜可以有效提高青贮乳酸菌含量，主要原因是pH值下降，青贮的酸性环境抑制其他杂类菌生长，与周天荣等[26]研究结果一致。各处理均未检测到大肠杆菌和霉菌，表明各处理天然牧草青贮质量较好，未发生霉变腐败现象。4结论本试验研究表明，单独或组合添加乳酸菌、糖蜜添加剂均能够不同程度的提高天然牧草青贮品质，降低不良微生物的产生，单独添加乳酸菌组的发酵品质优于单独添加糖蜜组，混合添加乳酸菌和糖蜜对天然牧草青贮效果最佳，可以在草原牧区进行示范推广。