猪圆环病毒（PCV）自20世纪70年代被发现以来，已在全世界广泛传播，对养猪事业造成巨大影响[1]。PCV-2有较强的致病性[2-3]，在我国断奶仔猪多系统衰竭综合征对猪致病性较明显且影响较大[4]。随着国产PCV-2灭活苗的推广应用，该病发病率呈明显下降趋势，但仍有部分地区有PCV-2感染的报道[5-6]。为了解苏中地区PCV-2感染情况及疫苗免疫效果，本研究对2020年9~12月期间收集到的苏中地区15家猪场的363样本进行检测，以期为苏中地区不同规模猪场防控PCV-2提供参考。1材料与方法1.1试验材料1.1.1样本采集（见表1）2020年9~12月期间，根据养殖规模在苏中地区选择15个均免疫接种过PCV-2灭活苗的猪场，其中大型猪场4个（存栏量≥5 000头）、中型猪场5个（存栏量1 000~5 000头）、小型猪场6个（存栏量≤1 000头）。根据猪场实际情况，共采集363份血清样本与363份疑似PCV2病料组织样本，-20 ℃保存。样本具体数量见表1。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.12.018.T001表1苏中地区不同规模猪场样本采集数量Tab.1Number of samples collected from different pig farm in Central Jiangsu猪场规模猪场数量/个病料数量/份血清数量/份合计15363363大型猪场4103103中型猪场5127127小型猪场61331331.1.2试剂与耗材基因组DNA提取试剂盒、DNA胶回收试剂盒、Taq DNA 聚合酶、6×DNA Loading Dye、10×PCR Buffer、dNTPMix、25 mmol/L MgCl2等，均购自生工生物工程（上海）股份有限公司；pMD18-T载体，购自上海宝生物工程有限公司；ELISA试剂盒，购自瑞普生物药业有限公司。1.1.3试验仪器普通PCR仪（Thermo公司，TCA5020）、荧光定量PCR循环仪（ABI公司，7500）、分析天平（Sartorius公司）、全自动样本快速研磨仪（上海净信实业发展有限公司）、台式冷冻微量高速离心机（Thermo公司，Micro7R）、移液器（Thermo公司，Finnpipette F）、多功能酶标仪（Molecular Devices公司）等。1.2试验方法1.2.1荧光定量PCR抗原检测方法猪病料样本检测采用荧光定量PCR法，按照病毒DNA提取试剂盒说明书操作，进行PCR扩增。参考引物序列文献[7]，利用美国国家生物技术信息中心引物设计软件进行设计，委托苏州金唯智科技有限公司合成PCV2特异性引物，使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对引物进行纯化。Pig-GAPDH-F：5'-TCGGAGTGAACGGATTTGGC-3'；Pig-GAPDH-R：5'-TGACAAGCTTCCCGTTCTCC-3'。荧光定量PCR反应体系（20 μL）：2X Real time PCR Master Mix（SYBR Green）10 μL、模板1 μL（cDNA稀释10倍）、引物MIX（F/R各为10 μmol/L）2 μL、0.1%DEPC水7 μL。荧光定量PCR反应条件：94 ℃变性30 s，55 ℃复性30 s，72 ℃延伸60 s，共30个循环；扩增结束取PCR扩增产物电泳，产物大小为1 767 bp。1.2.2间接ELISA抗体检测方法[8]采用间接ELISA法检测猪血清样本中的PCV2抗体[9-10]。具体操作分为4个步骤：向每个ELISA板孔中加入100 μL特异性抗原，37 ℃温育1 h，4 ℃保存16 h，洗涤去除未结合的抗原；取100倍稀释血清样本与阳性对照、阴性对照各100 μL，分别加入ELISA板孔中，37 ℃孵育1 h，洗涤并除去游离物；ELISA板的每个孔中再加入100 μL酶标抗体，37 ℃孵育1 h，洗涤并去除未反应的酶标抗体；每孔添加100 μL底物，15 min后添加50 μL终止液，30 min后用微孔板阅读器观察显色结果。通过显色结果定性判断猪血清样本PCV2抗体情况，定量分析抗体数量。2结果与分析2.1苏中地区猪病料病原学检测结果（见表2、表3）由表2可知，猪病料样本PCV2阳性率为10.7%，其中大、中、小型猪场病料PCV2阳性率分别为4.9%、7.1%、18.8%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.12.018.T002表2苏中地区不同规模猪场猪病料病原学检测结果Tab.2Etiological results of diseased feed from different pig farm in Central Jiangsu项目病料检测数量/份阳性数量/份阳性率/%合计3633910.7大型猪场10354.9中型猪场12797.1小型猪场1332518.8由表3可知，仔猪、母猪、育肥猪组织病料PCV2阳性率分别为2.3%、9.4%、16.9%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.12.018.T003表3苏中地区不同年龄段猪病料病原学检测结果Tab.3Etiological results of pig disease feeds of different age in Central Jiangsu项目病料检测数量/份阳性数量/份阳性率/%合计3633910.7仔猪8822.3母猪127129.4育肥猪1482516.92.2苏中地区猪血清学检测结果（见表4、表5）由表4可知，363份猪血清样本通过间接ELISA抗体检测，其中328份PCV2抗体检测呈阳性，阳性率达到90.4%。大、中、小型猪场PCV2抗体阳性率分别为94.1%、89.6%、88.2%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.12.018.T004表4苏中地区不同规模猪场血清学检测结果Tab.4Serological results of pig farms of different sizes in Central Jiangsu项目血清检测数量/份阳性数量/份阳性率/%合计36332890.4大型猪场1029694.1中型猪场12511289.6小型猪场13612088.2由表5可知，仔猪、母猪、育肥猪血清样本PCV2抗体阳性率分别为80.0%、92.6%、95.1%，育肥猪PCV2抗体阳性比例最高，仔猪最低。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.12.018.T005表5苏中地区不同年龄段猪血清学检测结果Tab.5Serological results of pigs of different age in Central Jiangsu项目病料检测数量/份阳性数量/份阳性率/%合计36332890.4仔猪1058580.0母猪948792.6育肥猪16415695.13讨论结果表明，苏中地区的猪场有少数猪感染PCV2，小型猪场感染阳性率最高，大型猪场感染阳性率最低，这可能与猪场管理规范程度、生物安全防控水平以及疫苗免疫程序有密切关系[11]。一般情况下，无论是否免疫PCV2疫苗，8~10周龄左右猪体内的PCV2抗体处于最低值[12]，期间极易感染病毒，因此育肥猪感染率最高比较合理；仔猪感染率最低，可能与获得母猪的母源抗体有一定的关系。通过血清学抗体检测，免疫接种过PCV-2灭活苗的猪抗体阳性率超过农业农村部规定的最低70%免疫合格标准[13]，说明猪群免疫效果较好，但不能区分是感染阳性还是免疫阳性。PCV2能引起猪群发病或隐性感染，使猪群免疫受到抑制，降低猪群免疫力和疫苗的免疫效果[14]，因此全部接种PCV2疫苗的猪群抗体阳性率并未达到100%。由本试验结果可知，极少数猪体内PCV2病原与抗体同时存在[15]，疫苗产生的特异性免疫抗体并不能完全消除猪体内的PCV2病原。4结论通过对猪圆环病毒2型感染情况及免疫效果调查，苏中地区猪群通过疫苗预防并未达到理想的效果，仍少量猪群感染。做好常规免疫工作的同时，还要做好生物安全措施，提高饲养管理水平。