米糠资源是1种具有高附加价值的饲料原料。作为米糠资源的主要加工副产物之一，米糠蜡的高附加值成分普利醇主要由二十二烷醇、二十四烷醇、蜡醇、二十八烷醇及三十烷醇等几种高级脂肪伯醇组成，具有促进动物生长、改善脂质代谢、提高机体代谢率等功能[1]。毒理学研究发现，普利醇对小白鼠、大鼠的急性经口LD50在10 g/kg以上，属实际无毒物质；遗传毒性试验（Ames试验）、小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸变试验均为阴性，表明普利醇无致突变作用[2-3]。研究表明，普利醇可以改善断奶仔猪的生长性能，调节机体能量代谢[3]，改善蛋鸡的生产性能、蛋品质和脂质代谢[4-6]，改善肉鸡的生长性能、饲料利用率和屠宰性能[7]，调节水产动物的血脂、免疫力和耐缺氧能力[8]。鸡蛋蛋黄胆固醇含量达200~300 mg，长期过量食用容易造成高血脂、动脉粥样硬化、冠心病和高血压等心血管疾病。因此，研究开发低胆固醇鸡蛋具有重要意义。目前，国内外关于普利醇对鸡蛋胆固醇含量方面的影响鲜有报道。本试验旨在研究添加不同水平普利醇对绿壳蛋鸡生产性能、蛋品质及鸡蛋胆固醇水平的影响，为米糠资源在蛋禽养殖中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料普利醇：自制，以米糠蜡为原料，经皂化、精馏分离等工艺制备而成[9]，二十八烷醇气相色谱含量为64.16%。将普利醇辅以乳化剂、包埋剂，经过微胶囊化、喷雾干燥后，制得3%普利醇微胶囊。胆固醇标准品购自sigma公司，纯度≥99%。1.2试验动物及日粮试验选取21周龄的绿壳蛋鸡，由安义县利邦绿色农业有限公司提供。参照美国NRC（1998）蛋鸡的营养需要配合成全价料。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.19.012.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米62.70代谢能/(MJ/kg)11.09大豆粕26.30粗蛋白质/%16.61石粉8.50钙/%3.61DL-蛋氨酸0.10总磷/%0.50磷酸氢钙1.00有效磷/%0.35氯化胆碱（50%）0.10蛋氨酸/%0.35食盐0.30赖氨酸/%0.85预混料1.00注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 7 715 IU、VD3 2 755 IU、VE 8.8 IU、VK3 2.2 mg、VB1 0.55 mg、VB2 4.41 mg、VB12 0.01 mg、烟酸19.8 mg、叶酸0.28 mg、Mn 50 mg、Fe 25 mg、Cu 2.5 mg、Zn 50 mg、I 1.0 mg、Se 0.15 mg。2.营养水平均为计算值。1.3试验设计及饲养管理选取75只周龄相同、产蛋率相近、平均体重（1.15±0.09）kg的21周龄蛋鸡，随机分为3组，每组5个重复，每个重复5只蛋鸡。对照组蛋鸡饲喂基础日粮，试验Ⅰ和Ⅱ组在基础日粮中分别添加10、30 mg/kg普利醇。预试期6 d，正式试验期56 d。采用封闭式鸡舍，2层阶梯笼养，每笼5只蛋鸡。同组的各个重复在鸡舍中均匀分布。鸡舍保持适宜温度和良好通风，采取自然光照明，鸡舍温度为20~30 ℃，湿度为50%~75%。试验鸡日粮采用粉料，自由饮水。每天15：00收蛋，按时清扫鸡舍和刮板清理粪便。1.4测定指标及方法1.4.1生产性能每天观察蛋鸡健康状况，称量记录蛋重、产蛋数、投料量、剩余料量、存栏鸡数，计算平均日采食量（ADFI）、产蛋率（LR）、平均产蛋量（AEM）、平均蛋重（AEW）、料蛋比（F/E）。ADFI(g)=(投料量-剩余料量)/每组存栏鸡数(1)LR(%)=(日产蛋数/存栏鸡数)×100%(2)AEM(g)=日总蛋重/每组存栏鸡数(3)F/E=平均日采食量/(平均蛋重×产蛋率)(4)1.4.2蛋品质正式试验期第1、14、28、42、56 d，每个重复随机选取1枚蛋，称量蛋重（EW）、蛋黄重量（YW），计算平均蛋黄重量（AYW）和蛋黄比例（YP），测量蛋白高度（AH）、蛋黄颜色（YC），计算哈夫单位（HU）。蛋白高度采用蛋白高度测定仪（TENOVO EQ-1A）测量；蛋黄颜色分光测色计（日本MINOLTA CM-2300d）测定。YP=YW/EW×100%(5)HU=100×lg(H-1.7W0.37+7.6)(6)式中：H为蛋白高度；W为蛋重。1.4.3鸡蛋胆固醇含量样品预处理：正式试验期第1、28、56 d，每个重复取1枚鸡蛋称重，除去蛋清，称取蛋黄重。将蛋黄置于烧杯中打匀，精密称取蛋黄约5 g（m），置于50 mL（V0）容量瓶中，加去离子水溶解定容至50 mL，混合均匀，得蛋黄稀释液。精确吸取蛋黄稀释液1.00 mL（V1）于10 mL离心管中，加入无水乙醇1.0 mL，充分振荡摇匀。加入乙醚2.5 mL，混匀，加入石油醚2.5 mL，振荡混匀，15 ℃、4 000 r/min离心5 min，移取上层有机相液，常温下氮气吹干，加入无水乙醇2.00 mL（V2）溶解残余物，使用0.45 μm有机微孔滤膜过滤进样。每个样2次平行。标准溶液配制：精确称取胆固醇标准品20 mg，用色谱级无水乙醇配制浓度为1 g/L的标准液，取标准液稀释成400、450、500、550、600 mg/L，以浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标绘制标准曲线。胆固醇标准曲线见图1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.19.012.F001图1胆固醇标准曲线色谱条件：利用岛津LC-20A高效液相色谱仪；色谱柱为岛津InertSustain C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为乙腈-异丙醇；流速为0.6 mL/min；梯度程序为乙腈初始75 %，10 min内升至80%，保持10 min；柱温为35 ℃；检测波长为210 nm；进样量为5 μL。根据色谱分析结果，采用外标法分析样品中胆固醇含量。计算蛋黄胆固醇（YCC）、全蛋胆固醇（WECC）。YCC(mg/g)=色谱浓度×V2×V0/(V1×m)(7)WECC(mg)=蛋黄胆固醇×蛋黄重(8)1.5数据统计与分析采用Excel 2019对数据记录整理，采用SPSS 20.0统计软件进行单因素方差分析，采用Duncan's法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示。P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1普利醇对蛋鸡生产性能的影响（见表2）由表2可知，1~56 d，试验Ⅰ、Ⅱ组的平均蛋重均显著高于对照组（P0.05）。1~28 d，试验Ⅱ组的平均日采食量显著低于对照组（P0.05）；1~56 d，试验Ⅱ组的平均日采食量显著低于对照组（P0.05）。1~28 d和1~56 d，试验Ⅱ组的料蛋比显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.19.012.T002表2普利醇对蛋鸡生产性能的影响组别产蛋率/%平均蛋重/g平均日产蛋量/(g/只)平均日采食量/(g/只)料蛋比1~28 d1~56 d1~28 d1~56 d1~28 d1~56 d1~28 d1~56 d1~28 d1~56 d对照组56.04±8.4755.95±7.6447.95±4.0247.99±4.15b26.87±3.9926.85±3.6680.02±2.03a79.78±1.96a2.98±0.04a2.98±0.11a试验Ⅰ组56.12±12.9354.63±11.2948.38±4.2848.72±4.33a27.15±6.4426.62±5.6079.53±1.38ab77.60±2.52ab2.96±0.36ab2.94±0.27ab试验Ⅱ组58.29±10.0655.20±10.4648.47±4.3848.82±4.41a28.19±5.0526.88±5.1077.26±1.66b75.26±2.58b2.73±0.06b2.80±0.15b注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），同行数据肩标不同大写字母表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2普利醇对鸡蛋品质的影响（见表3）由表3可知，试验1~28 d，试验Ⅱ组的平均蛋黄重显著高于对照组（P0.05）；试验1~56 d，试验Ⅰ组的平均蛋黄重显著高于对照组（P0.05）。试验1~56 d，试验Ⅱ组的蛋黄比例显著高于对照组（P0.05），且蛋黄比例与普利醇存在剂量依赖性。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.19.012.T003表3普利醇对鸡蛋品质的影响组别平均蛋黄重/g蛋黄比例/%蛋白高度/mm蛋黄颜色哈夫单位1~28 d1~56 d1~28 d1~56 d1~28 d1~56 d1~28 d1~56 d1~28 d1~56 d对照组16.57±1.15b16.68±1.11b38.76±5.3937.64±4.51b5.56±0.315.74±0.365.00±0.335.33±0.4579.9±2.9580.5±2.76试验Ⅰ组17.55±1.40ab17.80±1.19a42.92±7.6739.20±6.71ab5.72±0.376.08±0.555.03±0.295.37±0.4881.7±0.9382.3±2.05试验Ⅱ组18.21±1.98a17.53±2.01ab44.39±10.8942.27±8.61a5.83±0.205.93±0.305.06±0.115.43±0.4382.3±2.5282.8±2.222.3普利醇对鸡蛋胆固醇的影响（见表4）由表4可知，试验第28和56 d，试验Ⅱ组的蛋黄胆固醇含量均显著低于对照组（P0.05）。试验第56 d，试验Ⅱ组的全蛋胆固醇含量显著低于对照组（P0.05）。随着试验周期的延长，试验Ⅰ组的全蛋胆固醇含量呈逐渐降低的趋势，试验Ⅱ组的蛋黄及全蛋胆固醇含量逐渐降低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.19.012.T004表4普利醇对鸡蛋胆固醇含量的影响组别蛋黄胆固醇/(mg/g)全蛋胆固醇/mg第1 d第28 d第56 d第1 d第28 d第56 d对照组11.83±0.1411.86±0.03a11.93±0.12a197.54±10.73192.47±11.06189.17±8.31a试验Ⅰ组11.59±0.0911.61±0.09ab11.62±0.14a198.87±6.86A192.83±8.57A179.95±5.59Bab试验Ⅱ组11.80±0.06A11.12±0.19Bb10.58±0.10Cb193.51±8.42A182.79±7.08B170.29±7.57Cb3讨论3.1普利醇对蛋鸡生产性能的影响Long等[5]研究发现，在75和77 w末，日粮中添加5 mg/kg以上普利醇（二十八烷醇纯度92%以上）可以显著提高海兰褐蛋鸡的产蛋率，降低料蛋比，但对平均日采食量和平均蛋重无影响。在整个饲养周期，添加量为5 mg/kg的试验组效果优于10 mg/kg试验组。Peng等[4]研究发现，日粮中添加18、27 mg/kg的普利醇（二十八烷醇含量53.7%）可以显著提高海兰褐蛋鸡的产蛋率、平均蛋重和平均日产蛋量，有效降低料蛋比，而对平均日采食量无影响。Wardany等[6]研究发现，日粮中添加16 mg/kg以上的二十八烷醇能够显著降低夏季银色蒙塔扎蛋鸡的料蛋比，且添加24 mg/kg的二十八烷醇能够显著提高产蛋率和日产蛋量，不同添加水平对平均日采食量和平均蛋重均无影响。研究表明，在相同养殖条件下，不同含量二十八烷醇的以及不同添加量的普利醇对蛋鸡的生产性能影响不同[4-5]。本试验结果表明，日粮中添加10、30 mg/kg的普利醇（二十八烷醇含量64.16%）均可以显著提高绿壳蛋鸡的平均蛋重，与Long等[5]研究结果一致；30 mg/kg的普利醇可以显著提高绿壳蛋鸡的平均日采食量和降低料蛋比，但10 mg/kg对平均日采食量和料蛋比无影响；试验组对产蛋率和产蛋量均无影响。本试验结果与上述研究略有差异，原因可能与蛋鸡品种、普利醇的使用剂量及其各高级脂肪醇含量配比不同密切相关，具体原因有待深入研究。3.2普利醇对鸡蛋品质的影响蛋黄比例是衡量鸡蛋品质的一项重要指标。蛋黄含有全面丰富的维生素、微量元素，以及胆碱、类胡萝卜素、多不饱和脂肪酸、卵磷脂、DHA等保健成分。蛋黄加工制品的产量和质量也受蛋黄含量的影响，蛋黄中含有多种活性成分，广泛应用于医药，化妆品和纺织等行业[10]。因此，提高蛋黄比例既能够满足鸡蛋加工业的需求，又能够为非食品业的生产提供优质的原料。蛋黄比例随着鸡蛋中干物质含量的升高而提高。与鸡蛋干物质含量相比，蛋黄比例更容易记录，且不良相关性较低，更适合商品选择[11]，可作为蛋鸡育种指标。本试验结果表明，日粮中添加30 mg/kg的普利醇（二十八烷醇含量64.16%）可以有效提高绿壳蛋鸡的蛋黄比例，从而提高鸡蛋的营养价值，满足食品加工业的需求并有利于蛋鸡的选育，但相关机制还需进一步验证。3.3普利醇对鸡蛋胆固醇的影响蛋鸡每天胆固醇的合成量约300 mg，其中在蛋中沉积约200 mg[12]，经肠道排泄的有10 mg[13]。鸡蛋胆固醇90%以上以游离（非酯化）形式存在，主要来源于极低密度脂蛋白（VLDL）。胆固醇在肝脏合成，先以VLDL形式入血液后转运至卵母细胞，再经胞吞作用被卵母细胞吸收形成蛋黄[14]。VLDL分为内核和外壳，甘油三酯（TG）和胆固醇酯是内核的主要成分，外壳的主要成分为蛋白质、磷脂和胆固醇[15]。VLDL为蛋黄提供95%的胆固醇[16]和60%的干物质[17]。VLDL是TG的主要载体，而家禽的脂肪沉积及蛋黄的形成由血液TG水平决定[18]。因此，通过调节肝脏胆固醇的合成和血液TG的水平可以调控蛋黄的胆固醇含量。研究表明，二十八烷醇含量为60%~70%的普利醇通过激活腺苷酸激酶（AMP-kinase）途径，调节羟甲基戊二酰辅酶A（HMG-CoA）的活性来抑制机体肝脏胆固醇（TC）的合成[19-20]。二十八烷醇含量为50%~70%的普利醇可以有效降低机体的血清总胆固醇、TG和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量[4,19-20]；而二十八烷醇含量为18%或90%以上的普利醇对机体血液TC和TG水平均无显著影响[8,21]。本试验结果表明，日粮中添加30 mg/kg的普利醇（二十八烷醇含量64.16%）可以显著降低蛋黄和全蛋的胆固醇含量。原因可能是普利醇通过发挥各高级脂肪烷醇的协同作用，降低血浆TG的水平来控制蛋鸡VLDL的含量，进而调控蛋黄的胆固醇含量，但具体机制还有待进一步研究。4结论饲料中添加二十八烷醇含量为64.16%的普利醇可以有效提高蛋鸡的平均蛋重，降低蛋鸡的平均日采食量和料蛋比，提高蛋黄比例并降低蛋黄胆固醇和全蛋胆固醇水平。