布鲁氏菌病（brucellosis，简称布病）是由布鲁氏杆菌（Brucella）引起的严重危害人类健康和畜牧业发展的人兽共患传染病[1]，是《中华人民共和国传染病防治法》法定二类传染病，并列入《国家中长期动物疫病防治规划（2012~2020年）》优先防治的病种[2]。近年来，活畜调动较为频繁，局部地区时有布病发生，关于牛场布鲁氏杆菌病的报道越来越多[3]。布鲁氏菌呈短杆状或球杆状，无芽孢以及鞭毛，革兰染色呈阴性[4]。布氏杆菌会导致全身性的网状内皮细胞增生，可能引起关节炎及脓毒血症[5]。布病主要传染源为染疫的家畜，特别是牛、羊、猪等，家畜感染布病后可导致流产、产弱死犊、不孕、睾丸炎，使动物的生产性能大幅度下降[6]。本试验通过3种不同的试验方法，对新疆阿克苏地区某规模化奶牛场2020~2021年间采集的血清样品进行感染情况调查，并对调查结果进行统计与分析，旨在了解该规模化奶牛场布病流行情况，为防控奶牛布病提供参考。1材料与方法1.1试验样本本试验于新疆阿克苏地区某规模化奶牛场采集血样，每份血样3~4 mL。2020年间采集血样共1 671份，其中成母牛883份、青年牛201份、育成牛367份、犊牛220份；2021年间采集血样共1 582份，其中成母牛525份、青年牛122份、育成牛633份、犊牛302份。试验共采集血样3 253份。1.2试剂与仪器试剂：虎红平板凝集试验抗原、试管凝集试验抗原与布鲁氏菌病国家标准阳性血清，均购自中国兽医药品监察所；牛布鲁氏杆菌病抗体快速检测卡（胶体金法）试剂盒购自河北帝准生物技术有限公司（生产批号20200509）。仪器：KZ04273/KZ01448/JZ35758微量移液器（Eppendorf公司）、TDZ5-WS多管架自动平衡离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）、HVE-50高压灭菌锅（日本平山制作所株式会社）。1.3样本预处理血样采集后，于多管架自动平衡离心机中3 000 r/min离心10 min，微量移液器吸取1 mL上层血清分装于1.5 mL干净无菌的EP管中，将其编号后置于－20 ℃保存，待检。1.4检测方法检测前，将待检血清与试剂取出并恢复至室温，采用虎红平板凝集试验和牛布鲁氏杆菌病抗体快速检测卡（胶体金法）试验分别进行初步检测，并将上述2种方法初检中1项或2项均为阳性的样品采用试管凝集试验进行再次检测，最终判断其布病感染情况。1.4.1虎红平板凝集试验虎红平板凝集试验的操作及结果判定严格按照《动物布鲁氏菌病诊断技术 GB/T 18646—2018》进行[7]。1.4.2牛布鲁氏杆菌病抗体快速检测卡（胶体金法）试验严格按照牛布鲁氏杆菌病抗体快速检测卡（胶体金法）试剂盒说明书测试步骤进行操作。阳性：C线显示红色色带，T线不显示红色色带。阴性：C线显示红色色带，T线显示红色色带，无论颜色深浅，均判为阴性。无效：C线不显示红色色带，无论T线是否显示红色色带，均判为无效结果，需重新检测。1.4.3试管凝集试验上述2种方法初检中1项或2项均为阳性的样品采用试管凝集试验进行再次检测。试管凝集试验的操作及结果判定严格按照《动物布鲁氏菌病诊断技术 GB/T 18646—2018》进行[7]。2结果与分析2.12020年虎红平板凝集试验结果（见表1、表2）由表1可知，2020年间分离血清共1 671份，其中成母牛883份，青年牛201份，育成牛367份，犊牛220份，共检出阳性样本0份，总阳性率为0。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.11.016.T001表12020年虎红平板凝集试验检测结果Tab.1Tiger Red plate agglutination test results in 2020项目样品数/份个体阳性数/份个体阳性率/%合计1 67100成年母牛88300青年牛20100育成牛36700犊牛22000由表2可知，2021年间分离血清共1 582份，共检出阳性样本26份，其中成年母牛9份（个体阳性率为1.71%），青年牛10份（个体阳性率为8.20%），育成牛7份（个体阳性率为1.11%），犊牛0份（个体阳性率为0），总阳性率为1.64%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.11.016.T002表22021年虎红平板凝集试验检测结果Tab.2Tiger Red plate agglutination test results in 2021项目样品数/份个体阳性数/份个体阳性率/%合计1 582261.64成年母牛52591.71青年牛122108.20育成牛63371.11犊牛302002.2牛布鲁氏杆菌病抗体快速检测卡（胶体金法）试验结果（见表3、表4）由表3可知，2020年间分离血清共1 671份，其中成母牛883份，青年牛201份，育成牛367份，犊牛220份，共检出阳性样本0份，总阳性率为0。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.11.016.T003表32020年牛布鲁氏杆菌病抗体快速检测卡（胶体金法）试验检测结果Tab.3Bovine brucellosis antibody rapid test card (colloidal gold method) test results in 2020项目样品数/份个体阳性数/份个体阳性率/%合计1 67100成年母牛88300青年牛20100育成牛36700犊牛22000由表4可知，2021年间采集血样共1 582份，成年母牛5份（个体阳性率为0.95%），青年牛4份（个体阳性率为3.28%），育成牛3份（个体阳性率为0.47%），犊牛0份（个体阳性率为0），总阳性率为0.76%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.11.016.T004表42021年牛布鲁氏杆菌病抗体快速检测卡（胶体金法）试验检测结果Tab.4Bovine brucellosis antibody rapid test card (colloidal gold method) test results in 2021项目样品数/份个体阳性数/份个体阳性率/%合计1 582120.76成年母牛52550.95青年牛12243.28育成牛63330.47犊牛302002.3试管凝集试验结果（见表5、表6）由表5、表6可知，对于2021年间分离的1 582份血清，采用虎红平板凝集试验和牛布鲁氏杆菌病抗体快速检测卡（胶体金法）试验分别检测出阳性样本26份和12份，然后对其进行试管凝集试验。结果显示，对虎红平板凝集试验检出的阳性样本，再次进行试管凝集试验检测出的阳性率为46.15%，对牛布鲁氏杆菌病抗体快速检测卡（胶体金法）试验检出的阳性样本，再次进行试管凝集试验检测出的阳性率为100.00%。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.11.016.T005表52021年虎红平板试验阳性样本试管凝集试验检测结果Tab.5Tiger Red plate test positive sample test tube agglutination test results in 2021项目样品数/份个体阳性数/份个体阳性率/%合计261246.15成年母牛9555.56青年牛10440.00育成牛7342.86犊牛000XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.11.016.T006表62021年牛布鲁氏杆菌病抗体快速检测卡(胶体金法)试验阳性样本试管凝集试验检测结果Tab.6Bovine brucellosis antibody rapid test card (colloidal gold method) test positive sample test tube agglutination test results in 2021项目样品数/份个体阳性数/份个体阳性率/%合计1212100.00成年母牛55100.00青年牛44100.00育成牛33100.00犊牛0003讨论近年来，在新疆政府部门出具的防控布病文件[8]的指导下，新疆防控布鲁氏杆菌病的工作力度逐年加大，防控措施取得有效结果，但受到牛、羊市场交易越发频繁、基层防疫体系薄弱等因素影响，布鲁氏杆菌病的防控工作仍然面临着较大的困难和压力[9]。为做好牛布鲁氏杆菌病防控工作，应遵循“预防为主”的方针，在预防方面加大力度，使奶牛场工作人员更加了解布鲁氏杆菌病的防治知识及具备自我防范的技能。如奶牛接产时应注意个人防护，穿戴好防护服、口罩及橡胶手套[10]等；消毒工作也是开展防控工作中重要的一环，应该安排专门人员对奶牛场进行周期性的彻底消毒[11]，避免有害病菌的产生；加强奶牛场的引种管理[12]，以避免外来牛只对奶牛场可能的污染，因此新购进的奶牛必须隔离30 d以上，并在混群之前还需要进行进一步的检测；接种疫苗是一种较为常用的防控措施[13-14]，应严格按照国家规定的牛布病疫苗接种措施进行操作。牛布鲁氏杆菌病的疫苗种类较多，效果较好且较常使用的是19号布鲁菌苗和流产布氏菌素45/20仿剂苗，这2种菌苗能提高奶牛的抗感染能力，在许多养殖场被应用。因而在养殖中必须做好该病的防治工作，以防该病出现大范围的暴发。本试验结果表明，2020~2021年间阿克苏地区该规模化奶牛场中，2020年布病阳性率为0，2021年布病阳性率为0.76%。牛布病阳性率低于国家控制区标准（牛1.00%）[8]。该规模化奶牛场对布鲁氏杆菌病的防控做得比较好，但是仍有不足之处。尚无针对牛布鲁氏杆菌病的特效药，该病主要呈慢性经过，且具有广泛的传播渠道，早期感染不易发现，一旦发生不仅损害奶牛场的经济效益，还会影响人体健康[15]。因此，布鲁氏杆菌病的防控对于该奶牛场的生产来说仍是重中之重。本试验中，虎红平板凝集试验检测结果与试管凝集试验检测结果不符，可能是由于虎红平板凝集试验受到非特异性抗体的干扰，也可能是纤维蛋白原与虎红试剂发生非特异性凝集反应，产生的非特异性凝集[16]，出现假阳性结果。因此，在布病检测的实际临床应用中，应需2种或2种以上的方法相互配合使用[17]，通过对不同检测方法的结果进行比较分析，综合判断样品的检测结果。4结论本试验结果表明，阿克苏地区该规模化奶牛场2020~2021年度布病防控总体良好，但仍有不足之处，应注意布鲁氏杆菌病的防控。