金银花（Lonicera japonica Thunb.）是一种药用价值极高的植物，具有清热解毒、凉散风热的功效[1]。绿原酸和木樨草苷是金银花中最重要的活性成分[2]。绿原酸具有抗氧化、消炎抗菌和抗辐射等生物学功能[2-4]。木樨草苷属于黄酮类物质，具有抗氧化、抗菌、抗病毒等多种生物活性及药理作用[1-4]。金银花主要种植区域为中北部引黄灌区的中宁和沙坡头区[5-6]。金银花种植过程中产生大量金银花副产物如茎叶、枝条等，由于缺少科学有效处理与利用技术，利用率较低，造成环境污染和资源浪费。本试验研究不同添加剂对金银花枝条营养成分、活性成分及饲用价值评价的影响，为挖掘具有促进动物健康的中草药副产物饲料，提升中草药资源的利用效率提供参考。1材料与方法1.1试验材料金银花枝条为宁夏当地种植的金银花收获后的枝条。添加剂分别为乳酸菌、酵母菌、有机酸混合液（甲酸、乙酸和丙酸混合比例7∶1∶2）、纤维素酶、青贮专用复合酶。纤维素酶购自沧州夏盛酶生物技术有限公司；青贮专用复合酶购自沧州夏盛酶生物技术有限公司；甲酸、乙酸、丙酸均为分析纯，浓度99.7%，市售。秸秆发酵活干菌（主要成分为植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌等多种微生物的纯培养混合物），活菌保证值≥10×108个/g，酿酒酵母≥5.0×108个/g，枯草芽孢杆菌≥3×108个/g，植物乳杆菌≥2.0×108 CFU/g；秸秆青贮剂（主要成分乳酸菌、酵母菌、枯草芽孢杆菌等多种复合益生菌及生物酶），有效活菌总数≥2.0×109 CFU/g，均购自市场。1.2试验设计试验采用单因素设计，分为5个处理，每个处理5个重复。试验1组为金银花+纤维素酶，添加量为5 g/kg；试验2组为金银花+青贮专用复合酶，添加量为5 g/kg；试验3组为金银花+有机酸组合，添加量为6 mL/kg；试验4组为金银花+秸秆发酵活杆菌，添加量为3 g/kg；试验5组为金银花+秸秆青贮剂，添加量为10 g/kg。1.3青贮制作将金银花枝条粉碎至长度为2~3 cm，根据原料中水分含量，添加定量的水，控制水分含量为65%。乳酸菌和酵母菌使用前加入3 g的白糖和适量温水进行复活，使用100 mL水充分溶解，均匀洒在青贮原料上，均匀搅拌装入1 000 mL广口瓶中压实，盖好瓶盖，利用封口膜和胶带进行密封保存。45 d后进行感官评价及采样分析相关指标。1.4测定指标及方法1.4.1主要活性成分测定取样100 g进行感官评价，测定初水分，编号，装入自封袋送检。测定的主要活性成分为绿原酸和木樨草苷。绿原酸和木樨草苷含量的检测方法参考中国药典2020年版一部金银花LC-DAD。试验样品均委托通标标准技术服务有限公司进行检测。1.4.2感官评价45 d时的发霉程度不超过1/2即为发酵成功。参照《青贮饲料质量评定标准》[7]的方法，气味、质地、色泽由3人评分小组分别进行打分，取3人平均值，依据标准赋分。pH值和水分为实测值，依据标准进行赋分。76~100分为优等，51~75分为良好，26~50分为一般，25分以下为劣质。1.4.3挥发性脂肪酸含量取样200 g进行感官评价，编号，装入自封袋，-20 ℃保存，待检。主要测定pH值、有机酸（乳酸、乙酸、丙酸、丁酸）和氨态氮、总氮的含量。测定方法依据GB/T 23877—2009，所有试验样品均委托宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）检测。有机酸和氨态氮综合评分参照刘建新等[8-9]方法进行。1.4.4金银花枝条营养成分分别取约400 g金银花枝条原样和发酵样品，测定初水分，标记编号，装入自封袋，送检。测定粗蛋白（CP）、粗纤维（CF）、粗脂肪（EE）、粗灰分（Ash）、钙（Ca）、磷（P）、干物质（DM）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）含量。试验样品均委托具有饲料样品检测资质的宁夏昊标检测服务研究院（有限公司）进行检测。相对饲用价值（RFV）评价，参考李聚才[10]的方法。RFV=DMI(%BW)×DDM(%DM)/1.29(1)RFV分级标准参考李聚才等[10]、冀凤杰等[11]进行分级。等级分为5个等级，分别为特级RFV1.51、1级RFV为1.25~1.50、2级RFV为103~124、3级RFV为0.87~1.02、4级RFV为0.75~0.86、5级RFV0.75.1.5数据统计与分析数据采用SPSS 20.0统计软件进行分析，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1青贮添加剂对金银花枝条活性成分的影响（见表1）由表1可知，金银花枝条原样中均含有一定的绿原酸和木樨草苷，发酵后金银花枝条中均未能检出绿原酸和木樨草苷。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.017.T001表1青贮添加剂对金银花枝条活性成分的影响组别绿原酸（检测限0.05%）木樨草苷（检测限0.01%）试验1组NDND试验2组NDND试验3组NDND试验4组NDND试验5组NDND金银花枝条（原样）0.730 00.112 7注：ND表示未检出。%2.2金银花枝条发酵后感官评价（见表2）本研究中，试验1组、2组、3组青贮pH值测定值分别为4.12、4.30、4.09。由表2可知，试验1组、2组、3组青贮pH值得分为10~17分，属于良好；水分得分为14~16，属于优等。1组、2组色泽得分为14~18，属于优等；质地得分为8~9，属于优等。因此，试验1组青贮的感官评价得分最高，为优等，试验2组、3组均为良好等级。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.017.T002表2金银花枝条发酵后感官评价组别pH值/分水分/分气味/分色泽/分质地/分总分等级试验1组17.0016.0017.50±0.7118.05±0.719.00±1.4177.55±8.48优等试验2组10.0014.0017.50±0.7114.50±2.128.50±0.7164.00±4.24良好试验3组17.0014.007.50±0.717.00±0.005.50±0.7150.05±2.12良好试验4组5.008.0018.00±0.006.50±0.715.50±0.7143.00±1.41一般试验5组1.007.002.00±0.006.50±0.714.50±0.7121.00±2.12一般2.3不同青贮添加剂对金银花枝条青贮饲料挥发性脂肪酸含量的影响（见表3）由表3可知，试验1组、2组、5组青贮的乳酸含量显著高于试验3组、试验4组，乳酸占总酸比例分别为83.83%、80.69%和85.43%；试验1组、2组乙酸占总酸比例分别为16.26%、16.26%；试验各组的氨态氮/总氮比值≤5.0，试验1组、2组、5组的发酵质量评价等级均为优，发酵品质较好。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.017.T003表3不同青贮添加剂对金银花枝条青贮饲料挥发性脂肪酸含量的影响组别乳酸/(g/kg)乙酸/(g/kg)丙酸/(g/kg)异丁酸/(g/kg)丁酸/(g/kg)异戊酸/(g/kg)戊酸/(g/kg)氨态氮/总氮综合评分质量评价试验1组20.40*3.38ND0.120.140.150.154.2997.50优试验2组15.20*3.060.010.120.140.150.154.7797.50优试验3组ND1.391.09ND0.140.140.142.2872.50良试验4组3.321.480.27ND0.140.130.151.9490.00优试验5组13.10*1.330.030.120.460.140.152.4694.00优注：1.ND表示未检出。2.*表示差异显著（P0.05）；下表同。2.4金银花枝条青贮饲料营养品质分析及饲用价值评价结果（见表4）由表4可知，与金银花枝条原样相比，试验2组青贮的CP含量提高了13.14%（P0.05）；EE含量显著提高了168.42%（P0.05）。与金银花枝条原样相比，试验1组、3组、4组、5组青贮的Ash含量有降低趋势，CHO含量有升高趋势（P0.05）。金银花枝条原样RFV值最高，为Ⅳ级；其他组均为Ⅴ级。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.017.T004表4金银花枝条青贮饲料营养品质分析及饲用价值评价结果组别DM/%CP/%EE/%CF/%ADF/%NDF/%Ash/%碳水化合物(CHO)/%总能/(MJ/kg)RFV分级金银花枝条（原样）88.948.830.3836.2056.3049.708.9081.8916.3982.92Ⅳ级试验1组41.078.150.6445.6068.6057.706.7084.5116.8259.60Ⅴ级试验2组39.989.991.02*39.5069.6056.409.1079.8916.5860.10Ⅴ级试验3组36.447.680.6951.9068.0064.706.0085.6316.9352.67Ⅴ级试验4组35.357.800.5850.5070.3067.408.0083.6216.5448.16Ⅴ级试验5组30.448.310.6549.3071.2067.507.5083.5416.6847.45Ⅴ级注：计算时金银花枝条原样干物质为干样，其他试验组干物质为湿样计，其他成分为干样计。3讨论3.1青贮添加剂对金银花枝条发酵后活性成分的影响绿原酸是金银花重要的抗菌、抗病毒的药理成分。具有较好的抗氧化活性和较强的药理活性[3]。研究表明，绿原酸可以改善动物肠道菌群结构，缓解动物生产中各种应激，调控脂肪沉积，增加动物机体免疫力和抗感染力等，对提高动物生产效率和产品品质具有重要意义[12-13]。木樨草苷也是金银花中的1种黄酮类活性成分，具有很强的抗氧化性[14]。本试验研究表明，金银花枝条中含有一定的绿原酸和木樨草苷等活性成分，添加不同添加剂发酵明显降低绿原酸和木樨草苷的含量。陈志龙等[15]研究表明，枸杞枝条青贮后的枸杞多糖和黄酮含量降低，与本试验结果相似。因此，添加不同添加剂发酵能够影响金银花枝条发酵后功能性作用的发挥。发酵后金银花枝条中活性成分未能检出原因及作用机理，还待进一步研究。3.2不同青贮添加剂对金银花枝条青贮饲料品质的影响乳酸菌、纤维素酶等是较好的青贮发酵促进剂，青贮过程中适量添加可以改善饲料的消化率，保证青贮饲料质量[14,16]。本研究青贮后感官评价表明，试验各组青贮后均能够制作成功，其中添加纤维素酶后金银花枝条青贮感官评价为优等，添加青贮复合酶、有机酸混合后感官评价为良好等级，表明添加纤维素酶、青贮复合酶能够提高金银花枝条的青贮品质。陈志龙等[15]、曾燕霞等[17]研究表明，添加乳酸菌、纤维素酶及酵母菌可以改善枸杞枝条、葡萄枝条青贮品质，与本试验结果相似。从发酵后有机酸结果看，有机酸的组成主要包括乳酸、乙酸和丁酸，其含量可以反映青贮发酵过程及青贮质量[14,16]，通常以乳酸占总酸的68%~70%、乙酸占总酸0~20%和丁酸少的青贮发酵质量较好。添加纤维素酶组乳酸含量明显高于添加有机酸混合组、秸秆发酵活杆菌组，乳酸占总酸比例为83.83%，乙酸占总酸比例为16.26%；添加复合酶组乳酸比例为80.69%，乙酸比例为16.26%，添加秸秆青贮剂组乳酸比例为85.43%，乙酸比例为8.65%，这符合多数秸秆类、枝条类青贮发酵结果[15,18-19]。试验各组氨态氮/总氮比值均≤5.0，表明试验各组青贮质量较好，这与刘建新等[9]氨态氮、总氮比值越低，青贮品质越好结果一致。因此，纤维素酶组、复合酶组和秸秆青贮剂组有机酸和氨态氮综合评价质量等级为优，表明发酵品质较好。3.3金银花枝条青贮饲料营养品质分析及饲用价值评价原料的营养价值和发酵品质是青贮饲料的营养价值的决定因素[16]。本试验结果表明，添加不同青贮添加剂后，金银花枝条的营养成分总体没有明显变化。其中粗蛋白和粗纤维是重要的营养成分，试验2组的粗蛋白含量有增加的趋势，但未达到显著水平。试验各组NDF、ADF并未有所降低，饲用价值没有提高。曾燕霞等[17]研究表明，添加纤维素酶、乳酸菌和酵母菌可以提高葡萄枝条的饲用价值。陈志龙等[15]研究表明，添加维素酶、乳酸菌和酵母菌的组合均能够降低枸杞枝条的NDF和ADF含量，提高枸杞枝条青贮饲用价值。与本试验结果有所不同。试验1组、3组、4组、5组粗灰分含量与金银花枝条原样相比有降低趋势，说明金银花枝条青贮后能够提高其碳水化合物的含量。陈志龙等[15]研究表明，枸杞枝条青贮后能够较好保存其养分并能够提高有机物的含量，与本试验结果相似。4结论添加纤维素酶、复合酶可以有效改善金银花枝条的青贮品质，且感官评价、有机酸和氨态氮综合评价质量等级均为良好以上。但发酵后金银花枝条相对饲用价值未有提高，而且绿原酸和木樨草苷等主要活性物质的含量明显降低。金银花枝条青贮后降低了金银花的营养价值。因此，从促进动物健康及金银花枝条的保健功能开发利用方面考虑，金银花枝条不适宜青贮，未来可以挖掘金银花枝条的其他利用价值。