近年来，养殖业高速发展，动物的生产性能得到广泛关注。酶解蛋白肽是一种通过酶解蛋白原料产生大量活性小分子肽、游离氨基酸和生物活性因子的产品[1]。目前，家畜日粮中添加酶解蛋白肽的研究较多[2-4]。张迪等[2]研究表明，酶解毛血蛋白肽对保育猪的生产性能无明显影响，但能够降低饲料成本。尼玛等[3]研究发现，在基础日粮中添加3%蛋白肽A90能够提高放牧断奶藏猪仔猪生长性能，降低腹泻率和死亡率。Pan等[4]研究表明，用酶解羽毛粉替代保育猪日粮中的动物蛋白来源能够提高猪的日增重，改善肠道形态。酶解蛋白肽作为1种新型绿色饲料添加剂的研究较多，但关于酶解蛋白肽对断奶仔猪养分消化率的研究较少。因此，本试验分别以体内法和体外法研究酶解蛋白肽替代饲料中不同含量的豆粕对断奶仔猪日粮养分消化率的影响，为动物生产中酶解蛋白肽的合理应用提供参考。1材料与方法1.1试验设计试验在沈阳博睿科研猪场进行，选取150头体重相近的21日龄健康“杜×长×大”三元杂交断奶仔猪，随机分为5组（公、母各半），每组5个重复，每个重复6头猪。对照组仔猪饲喂基础日粮，试验组分别在基础日粮中添加2%、4%、6%和8%的酶解蛋白肽。基础日粮按照NRC（1998）标准配制，各组日粮均为等氮等能。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.004.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.0玉米46.0消化能/(MJ/kg)41.51小麦次粉4.5干物质/%88.00面粉4.0粗蛋白/%18.64酶解蛋白肽（CP45%）0粗脂肪/%5.50豆粕（CP46%）9.0粗纤维/%2.55膨化大豆8.0粗灰分/%5.75发酵豆粕4.6钙/%0.79进口鱼粉3.0总磷/%0.66代乳粉5.0赖氨酸/%1.20酵母2.5蛋氨酸/%0.37白糖2.5苏氨酸/%0.75乳清粉4.0色氨酸/%0.21沸石粉0.9石粉0.8磷酸氢钙1.2豆油1.0预混料3.0注：1.预混料为每千克日粮提供：铁80 mg、铜12 mg、锌75 mg、锰10 mg、碘0.35 mg、硒0.30 mg、VA 1 500 IU、VD 33 300 IU、VE 60 IU、VK 36.0 mg、VB12 0.03 mg、核黄素6.2 mg、烟酸60 mg、D－泛酸18.0 mg、生物素0.46 mg。2.营养水平为计算值。酶解蛋白肽购自辽宁康普利德生物科技有限公司，以高蛋白豆粕为原料，采用组合异步酶解技术加工而成，含有16%小肽。酶解蛋白肽成分分析见表2。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.004.T002表2酶解蛋白肽成分分析成分粗蛋白质酸溶蛋白粗纤维粗灰分钙总磷氯化钠赖氨酸水分保证值≥45.00≥12.00≤8.00≤7.000.10~2.50≥0.250.01~1.80≥2.40≤12.00%1.2试验材料220 U/mL新鲜胃液：取22 mg胃蛋白酶（比活1∶300）溶于300 mL 0.2 mol/L HCl溶液中，现用现配。250 U/mL新鲜胰液：取13 mg胰蛋白酶（比活1∶250）溶于130 mL 0.6 mol/L NaOH溶液中，现用现配。胃蛋白酶和胰蛋白酶均购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司。1.3饲养管理预试期7 d，各组仔猪均饲喂基础日粮进行过渡（从粥料过渡到颗粒料）。正式试验期28 d。试验期间所有试验断奶仔猪于同一栋猪舍保育床上分栏饲养，舍内维持25~28 ℃，自由采食和饮水，按照猪场常规管理和免疫接种。记录仔猪每天采食和腹泻情况。1.4体外消化试验参照张宏福等[5-6]的试验方案，建立两步酶解法模拟仔猪胃液、小肠液消化环境，将各组试验日粮粉碎，称取2.50 g置于pH值3.3的新鲜胃液中，39 ℃消化3 h，测胃部消化液pH值。消化液中添加新鲜胰液至pH值6.8，39.5 ℃恒温摇床中消化6 h，测小肠消化液pH值。试验结束，在小肠消化液中加入适量20%浓度磺基水杨酸沉淀蛋白，抽滤得到的残渣，65 ℃烘箱中烘至恒重，称量残渣重量，计算各处理组干物质消化率；凯氏定氮仪测定粗蛋白含量，计算粗蛋白消化率。1.5测定指标及方法1.5.1生长性能分别于试验开始、结束对仔猪进行称重，记录每组仔猪每天的饲料供给和隔天余料情况，计算各组试验猪平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料重比（F/G）。试验期间每天观察并记录试验猪的腹泻情况，根据粪便情况给予评分：硬粪=1分；正常粪便=2分；软粪=3分，部分形成粪便；半液状=4分、糨糊状粪便；水样粪便=5分。将粪便得分为4分、5分者确定为腹泻，试验结束后计算每组腹泻率。平均日增重=(末重-初重)/试验天数(1)平均日采食量=总采食量/试验天数(2)料重比=总采食量/(末重-初重)(3)腹泻率=腹泻总头数/(仔猪总头数×试验天数)×100%(4)1.5.2血清生化指标试验第14 d和第28 d，每个重复选取1头体况良好、接近平均体重的仔猪，前腔静脉采血，离心分离血清，-20 ℃保存。使用试剂盒检测血清中总蛋白（TP)、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、尿素氮（BUN）含量。试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，按照说明书规定方法操作。1.5.3营养物质表观消化率测定试验第16~18 d，每个重复选取1头健康状况良好、体重中等的仔猪，利用二氧化钛指示剂法，各组试验日粮加入4% TiO2，连续3 d以不完全收粪法采集粪便。粪样加10% H2SO4 20 mL以固氮，-20 ℃保存。每天采集各组饲料样品，混匀，制备成分析式样，待测。检测日粮及粪便中干物质（DM）、粗蛋白（CP）、粗脂肪（EE）、钙（Ca）和磷（P）的含量。采用105 ℃烘箱法测干物质含量；采用凯氏定氮法测定粗蛋白含量；使用索氏抽提法测定粗脂肪含量；采用高锰酸钾滴定法测定钙含量；采用分光光度计比色法测定总磷含量。根据测定出日粮和粪便中对应养分及指示剂含量计算各营养物质表观消化率。营养物质表观消化率=[1－(日粮中TiO2含量/排泄物中TiO2含量)×(排泄物中养分含量/日粮中养分含量)]×100%(5)1.6数据统计与分析采用Excel对数据进行整理，SPSS 17.0软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），采用Tukey's法进行统计分析，Pearson进行相关性分析。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1酶解蛋白肽对体外模拟21日龄断奶仔猪小肠相关指标的影响（见表3）由表3可知，酶解蛋白肽对体外模拟21日龄断奶仔猪胃部消化液和小肠消化液pH值无显著影响（P0.05）。添加8%酶解蛋白肽组断奶仔猪小肠残渣的干物质消化率和粗蛋白消化率显著高于对照组（P0.05），其他各组间均无显著差异（P0.05)。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.004.T003表3酶解蛋白肽对体外模拟21日龄断奶仔猪相关指标的影响项目胃部消化液pH值小肠消化液pH值干物质消化率/%粗蛋白消化率/%对照组3.416.7678.64b66.38b2%酶解蛋白组3.406.7978.48b67.65ab4%酶解蛋白组3.426.8077.76b67.85ab6%酶解蛋白组3.386.7780.96ab69.44ab8%酶解蛋白组3.376.7982.16a70.58aSEM值0.020.020.991.10P值0.1760.2690.0280.022注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P＜0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），字母相同或无字母表示差异不显著（P＞0.05）；下表同。2.2酶解蛋白肽对断奶仔猪生长性能的影响（见表4）由表4可知，6%和8%酶解蛋白肽组断奶仔猪的ADFI和ADG均极显著高于对照组（P0.01）。6%酶解蛋白肽组断奶仔猪的F/G显著低于对照组（P0.05）。6%和8%酶解蛋白肽组断奶仔猪腹泻率均极显著低于对照组（P0.01），且6%酶解蛋白肽组断奶仔猪的腹泻率最低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.004.T004表4酶解蛋白肽对断奶仔猪生长性能的影响项目初重/kg末重/kgADFI/gADG/gF/G腹泻率/%对照组6.9716.03Cd507.95Bc323.57Bb1.57a5.21Bb2%酶解蛋白组6.9816.20Bc512.38Bc329.29Bb1.56a7.38Aa4%酶解蛋白组7.1116.28Bc514.26Bc327.50Bb1.57a6.69Aa6%酶解蛋白组7.0918.21Ab551.07Ab397.14Aa1.39b2.09Dd8%酶解蛋白组7.0418.32Aa578.50Aa402.86Aa1.44ab2.83CcSEM值0.230.8312.3119.320.370.11P值0.8360.0010.0010.0060.0280.0012.3酶解蛋白肽对断奶仔猪血清生化指标的影响（见表5）由表5可知，试验第14、28 d，与对照组相比，各酶解蛋白肽组断奶仔猪的血清尿素氮含量均极显著降低（P0.01），且随着酶解蛋白肽添加量升高而下降，其中8%酶解蛋白肽组断奶仔猪血清尿素氮含量最低。与对照组相比，试验第14 d，6%和8%酶解蛋白肽组断奶仔猪的血清总蛋白含量显著升高（P0.05）；试验第28 d，2%、6%和8%酶解蛋白肽组断奶仔猪的血清总蛋白含量均极显著升高（P0.01）。试验第14 d，2%和6%酶解蛋白肽组断奶仔猪血清白蛋白含量均极显著高于对照组（P0.01）；试验第28 d，各酶解蛋白肽组断奶仔猪血清白蛋白含量均极显著高于对照组（P0.01）。试验第14和28 d，酶解蛋白肽组断奶仔猪血清球蛋白含量均极显著高于对照组（P0.01），其中8%酶解蛋白肽组含量最高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.004.T005表5酶解蛋白肽对断奶仔猪血清生化指标的影响项目尿素氮/(mmol/L)总蛋白/(g/L)白蛋白/(g/L)球蛋白/(g/L)14 d28 d14 d28 d14 d28 d14 d28 d对照组6.13Aa7.09Aa43.02Bc46.06Cd16.44Cc16.97Dd19.15Dd24.18Dd2%酶解蛋白组4.20Bb6.44Bb43.66Bbc48.94Aa16.91BCb19.71Aa25.67Bb25.61Cc4%酶解蛋白组4.04Bb6.35Bb43.59Bbc46.65Cc18.19Aa17.72Cc24.87Cc25.40Cc6%酶解蛋白组2.71Cc4.83Cc43.89Bb47.61Bb17.10Bb19.95Aa24.65Cc26.79Bb8%酶解蛋白组1.88Dd3.73Dd44.80Aa48.57Aa16.77BCbc18.51Bb26.83Aa28.23AaSEM值0.080.040.200.160.130.170.170.14P值0.0010.0010.0010.0010.0010.0010.0010.0012.4酶解蛋白肽对断奶仔猪营养物质表观消化率的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，8%酶解蛋白肽组断奶仔猪干物质表观消化率显著提高（P0.05）；6%和8%酶解蛋白肽组断奶仔猪粗蛋白表观消化率均极显著提高（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.004.T006表6酶解蛋白肽对断奶仔猪营养物质表观消化率的影响项目干物质粗蛋白粗脂肪钙磷对照组82.06b67.23Bc66.5558.1047.122%酶解蛋白组81.92b67.80Bbc65.4757.8047.334%酶解蛋白组81.52b68.26Bbc65.6557.8644.016%酶解蛋白组83.89ab69.68Ab66.4058.6747.938%酶解蛋白组84.53a71.99Ac66.2160.3348.14SEM值0.670.681.031.651.59P值0.0190.0010.9300.8070.388%2.5体内消化率与体外消化率关系（见表7）由表7可知，体外消化率和体内消化率间存在较强相关性，干物质消化率相关系数0.906，粗蛋白消化率相关系数0.864，说明可以利用体外模拟消化技术得到的体外消化率来预测动物体内消化率。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.004.T007表7体内消化率与体外消化率关系项目干物质粗蛋白体外体内体外体内对照组78.6482.0666.3867.232%酶解蛋白组78.4881.9267.6567.804%酶解蛋白组77.7681.5267.8568.266%酶解蛋白组80.9683.8969.4469.688%酶解蛋白组82.1684.5370.5871.99SEM值0.990.671.100.68相关系数0.9060.864%3讨论3.1酶解蛋白肽对断奶仔猪生长性能的影响酶解蛋白肽中抗营养因子含量大幅度降低，大分子蛋白质、多糖等被分解成小分子寡肽、游离氨基酸和寡糖等，有利于动物胃肠道对饲料养分的消化利用，从而提高动物的平均日增重和采食量，降低腹泻率等[7]。崔家军等[8]研究发现，在日粮中添加1.796%酶解蛋白肽后可提高生长育肥猪生长性能，降低料重比。Ma等[9]研究发现，使用酶解小肽部分替代豆粕饲喂断奶仔猪，可以降低断奶仔猪的腹泻率，提高生长性能。本试验结果表明，断奶仔猪日粮中添加酶解蛋白肽的最适添加量为6%~8%，可以明显提高仔猪平均日采食量和平均日增重，降低料重比和腹泻率。3.2酶解蛋白肽对断奶仔猪血清生化指标的影响血清蛋白在仔猪体内转运营养物质，保持组织蛋白的动态平衡，能够在机体紧急需要时提供能量，具有维持血液pH值等功能，是仔猪健康生长的必要因素。血清蛋白由白蛋白与球蛋白共同组成，其中血清白蛋白参与血清素能、免疫和内分泌系统之间的多向相互作用，血清球蛋白则对调节身体免疫系统至关重要[10-11]。崔家军等[12]研究发现，在生长育肥猪的低蛋白日粮中添加酶解蛋白肽，可提高猪血清白蛋白和球蛋白含量，降低血清尿素氮含量。武艳军等[13]在公猪日粮中添加2种水平小肽，结果表明，添加0.5%小肽明显提高血清中的总蛋白及球蛋白含量。本试验在日粮中添加酶解蛋白肽后，血清总蛋白、白蛋白、球蛋白含量均有明显提升，表明酶解蛋白肽可以促进仔猪血清蛋白质合成。血清尿素氮与机体内氨基酸平衡以及蛋白质的利用率高度相关[14]。本试验在日粮中添加酶解蛋白肽后，血清尿素氮含量明显降低，并呈现剂量依赖性降低，表明仔猪体内蛋白质的代谢、吸收和利用随酶解蛋白肽添加量增加而更加旺盛。酶解蛋白肽中富含的小肽吸收速率快，能够促进机体内蛋白质合成及代谢[15]。刘卫东等[16]在育成猪日粮中添加不同水平大米蛋白肽后，血清中尿素氮含量明显减少，蛋白质代谢率明显升高。3.3酶解蛋白肽对断奶仔猪营养物质表观消化率的影响本研究表明，无论是体外还是体内试验，饲料中添加酶解蛋白肽均可提高仔猪体内干物质和粗蛋白表观消化率，且具有较强的相关性。原因可能是饲料中增加了更多的小肽。等量条件下，小肽的吸收速度比游离氨基酸更快，机体内蛋白质的消化吸收也大多以小肽形式进行[15,17]。本试验结果表明，酶解蛋白肽更有利于提高仔猪蛋白质沉积率和蛋白质消化利用率，从而提升饲料利用率和生长性能。此外，断奶仔猪蛋白消化率的提升也部分解释了血清蛋白质合成代谢指标变化的原因。本试验结果表明，在断奶仔猪日粮中添加酶解蛋白肽对粗脂肪消化率及钙、磷消化率均无明显差异。崔家军等[18]研究发现，在日粮中添加体外胃蛋白酶消化率分别为80%和90%的蛋白肽，发现80%消化率的蛋白肽添加1％时明显提高干物质、粗蛋白质和钙的表观消化率；随着90%消化率的蛋白肽添加量的增加，干物质、粗蛋白质表观消化率有降低的趋势。陈宇光[19]研究表明，大豆肽对山羊的粗脂肪消化率无明显影响。因此，在动物日粮中添加小肽不一定会提高饲料各营养物质表观消化率，可能是营养物质表观消化率还受饲料组成或添加成分本身消化率等因素的影响。目前，酶解蛋白肽对仔猪养分消化率影响的相关研究和文献较少，酶解蛋白肽对饲料营养物质表观消化率的作用效果仍需进一步研究。4结论断奶仔猪日粮中添加酶解蛋白肽的添加量为6%~8%时，可以明显改善断奶仔猪的生长性能，提升血清蛋白质合成代谢指标，提高干物质和蛋白质的表观消化率。