随着我国渔业养殖业的蓬勃发展，对饵料的需求量逐年递增，而优质蛋白源鱼粉的短缺以及价格的不断高涨已成为全球性问题。因此，新型饵料蛋白原料替代鱼粉可以维持水产养殖业的可持续发展。餐厨垃圾能够通过生物转化技术转化为可利用的昆虫蛋白[1]。利用昆虫养殖技术可以实现餐厨垃圾的资源化利用，不仅具有经济的可行性，也在一定程度上缓解了生态环境的污染问题。黑水虻（Hermetia illucens），属双翅目水虻科，具有繁殖速度快、抗逆性强、食性广等优点。黑水虻能够将餐厨垃圾高效转化形成高质量的昆虫蛋白[2]。研究发现，黑水虻干虫粉的蛋白质和脂肪含量分别为42%~44%和31%~35%[3]。与优质的蛋白源鱼粉相比，黑水虻虫粉的蛋白含量明显偏低、脂肪含量偏高。因此，利用脱脂技术提高黑水虻虫粉的营养价值是实现黑水虻干虫替代鱼粉的有效途径。目前，有关脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉的报道相对较少。大口黑鲈（Micropterus salmoides），俗称加州鲈，鲈形目，太阳鱼科，黑鲈属，是我国淡水池塘养殖的主要肉食性鱼类之一，池塘养殖产量达20多万t[4]。Huang等[5]研究表明，大口黑鲈对饵料蛋白质的适宜需求量为480~520 g/kg，比Portz等[6]报道的436~470 g/kg的蛋白含量高。本研究采用脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉饲养大口黑鲈，研究脱脂黑水虻虫粉对鱼的生长性能、饵料利用、形态学参数和鱼体成分的影响，以期为脱脂黑水虻虫粉在饲料工业中的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验所用鱼粉、去皮豆粕、饲料级鸡肉粉、菜粕、棉粕、鱼油等饵料原料均购自浙江鸿利饲料有限公司。脱脂黑水虻虫粉购自浙江昆微农业科技有限公司，其营养组成为95.9%干物质、53%粗蛋白、11.8%粗脂肪、8.4%灰分。维生素和矿物质预混料购自帝斯曼（贸易）上海有限公司。试验对照组饵料根据加州鲈营养需求设计[7]。对照组饵料中含40%的鱼粉，使用脱脂黑水虻虫粉分别替代饵料中25%（R25）、50%（R50）和75%（R75）的鱼粉。所有试验饵料的粗蛋白和脂肪含量分别约为48%和8%。基础饵料组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.010.T001表1基础饵料组成及营养水平项目对照组R25组R50组R75组原料组成鱼粉40.030.020.010.0黑水虻虫粉011.022.433.2鸡肉粉6.06.06.06.0豆粕12.012.012.012.0棉粕4.04.04.04.0菜粕3.03.03.03.0血粉2.02.02.02.0谷朊粉2.52.52.52.5胆碱0.20.20.20.2淀粉2.02.02.02.0面粉16.917.816.518.3膨润土4.02.32.40磷酸二氢钙2.02.02.02.0预混料2.02.02.02.0鱼油3.43.23.02.8合计100.0100.0100.0100.0营养水平粗蛋白47.9148.6647.4048.98粗脂肪7.917.697.508.14粗灰分15.0412.1612.449.68磷1.931.621.761.53注：1.每千克预混料为饵料提供：VA 16 000 IU、VD3 3 000 IU、VE 200 mg、VK3 20 mg、VB1 13.4 mg、VB2 20 mg、VB6 30 mg、VB12 0.027 mg、D-泛酸钙80 mg、氯化胆碱1 200 mg、烟碱酸130 mg、生物素1 000 mg、叶酸6.6 mg、VC 200 mg、氯化胆碱1 200 mg、一水合磷酸二氢钙400 mg、乳酸钙1 000 mg、柠檬酸铁100 mg、七水合硫酸镁400 mg、磷酸氢二钾700 mg、一水合磷酸二氢钠250 mg、氯化锌60 mg、五水合硫酸铜30 mg、四水合硫酸锰20 mg、碘化钾20 mg。2.营养水平均为实测值。%将试验所用的饵料原料先经过粉碎，再过40目筛，以保证饵料原料颗粒均匀。根据个原料含量，由少到多依次称重各饵料原料放入容器内，逐批人工混匀，将所配饵料放入饵料搅拌机中，注入10%~15%自来水均匀混合20 min。使用单螺杆饵料膨化机（型号SLP-45）挤压成型制成粒径4 mm、长5 mm的慢沉性试验颗粒。试验饵料25 ℃下抽湿风干，密封于塑料袋，-20 ℃冷冻备用。1.2试验设计加州鲈幼鱼购自浙江省德清县当地的水产养殖场。选取健康、规格均一、初始体重为（11.42±0.25）g的加州鲈幼鱼240尾随机分至12个网箱（1 m×1 m×1.5 m），分成4组，每组3个重复，每个重复20尾幼鱼。预试期2 w，将幼鱼暂养在试验基地的水泥池（7 m×6 m×1.8 m），暂养期间，试验鱼早晚投喂对照组饵料2次。正式试验期42 d。1.3饲养管理养殖试验开始时，试验鱼分别以对照组饵料、试验组饵料R25、R50和R75饱食投喂2次，投喂时间为7：30和16：30。养殖水体24 h充气，自然光照，21~26 ℃自然水温，每2 w检测水质，溶氧含量大于7.3 mg/L，氨氮含量小于0.13 mg/L，每次换水30%。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能及饵料利用试验最后1 d，所有试验组鱼苗均禁食24 h以排空胃内食物残渣，将每个水槽中鱼依次捕出网箱，统计鱼苗总尾数并称重。末重=鱼总体重/鱼总尾数(1)增重率=(终末单尾鱼均重-试验初始单尾鱼均重)/试验初始单尾鱼均重×100%(2)摄食率=总摄食量/[(试验初总重+结束总重)/2×试验天数]×100%(3)饵料系数=总摄食量/(结束时总重-试验初总重)(4)1.4.2形态学参数每个网箱取3尾鱼，测量鱼体长度、体重和肝脏重，-20 ℃保存，用于分析试验组鱼体成分的样品。肥满度=鱼体重/鱼体长3×100(5)肝体指数=鱼肝重/末鱼体重×100%(6)空壳率=鱼空壳重/鱼体重×100%(7)1.4.3鱼体组成与氨基酸含量所有鱼样常温下化冻，120 ℃高压蒸汽灭菌锅蒸煮20 min，75 ℃烘箱烘干。根据AOAC[8]方法分析鱼样品的水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量。样品中磷含量主要采用钒钼酸铵法检测。使用氨基酸分析仪（Sykam-433；Sykam有限责任公司）测定鱼体氨基酸组成。1.5数据统计与分析数据采用SPSS 26.0软件单因素方差分析（One-way ANOVA），采用Duncan's法进行多重比较检验处理组间差异，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉对加州鲈生长性能及饵料利用的影响（见表2）由表2可知，与对照组相比，各试验组的初重、末重、增重率、摄食率和饵料系数均无显著差异（P0.05）。R25组的增重率和摄食率显著高于R50组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.010.T002表2脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉对加州鲈生长性能及饵料利用的影响组别初重/g末重/g增重率/%摄食率/%饵料系数对照组11.46±0.3340.30±0.44251.69±9.16ab2.53±0.19ab1.26±0.18R25组11.35±0.3642.40±2.40273.42±11.16a3.43±0.58a1.05±0.02R50组11.51±0.1239.02±1.37238.95±11.73b2.53±0.07b1.25±0.05R75组11.34±0.2541.73±3.09267.93±27.79ab2.82±0.37ab1.09±0.03注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示显著不差异（P0.05）；下表同。2.2脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉对加州鲈形态学参数的影响（见表3）由表3可知，随脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉水平的增加，鱼的肝体比有增加的趋势。R50组和R75组的肝体比显著高于对照组（P0.05），R25组的肝体比与对照组间无显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.010.T003表3黑水虻虫粉替代鱼粉对加州鲈形态学参数的影响组别肥满度/(g/cm3)肝体比/%空壳率/%对照组2.34±0.172.26±0.50c90.52±0.56R25组2.49±0.202.83±0.63bc91.23±2.19R50组2.36±0.223.41±0.77ab89.60±1.00R75组2.38±0.173.92±0.79a89.22±0.432.3黑水虻虫粉替代鱼粉对加州鲈鱼体组成与氨基酸含量的影响（见表4、表5）由表4可知，R50和R75组的水分含量显著高于对照组（P0.05）。随脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉水平的增加，试验鱼鱼体的粗蛋白含量、灰分含量和磷含量均有降低趋势。与对照组相比，R50和R75组的粗蛋白、灰分和磷含量均显著降低（P0.05）；R25组的粗蛋白、灰分和磷含量均与对照组无显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.010.T004表4黑水虻虫粉替代鱼粉对加州鲈鱼体组成的影响组别水分粗蛋白粗脂肪灰分磷对照组71.35±0.35b16.97±0.09a6.28±0.15a4.46±0.11a0.83±0.03aR25组71.50±0.38b16.85±0.30ab6.08±0.27ab4.32±0.10ab0.81±0.02abR50组72.70±0.70a16.32±0.38bc5.72±0.33b4.11±0.13bc0.77±0.02bcR75组73.03±0.35a16.08±0.35c5.92±0.09ab3.94±0.10c0.73±0.02c注：粗蛋白、脂肪、灰分和磷均为鱼体湿重。%由表5可知，R50和R70组鱼体的赖氨酸、异亮氨酸、谷氨酸和必需氨基酸总量均显著高于对照组（P0.05）。试验组R25、R50和R75鱼体的甘氨酸、脯氨酸和呈味氨基酸与对照组间均无显著差异（P0.05）。随着脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉水平的增加，鱼体的苏氨酸含量、精氨酸含量和丝氨酸含量呈显著降低趋势（P0.05），组氨酸含量和缬氨酸含量呈显著增加趋势（P0.05）。R50组鱼体的蛋氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、天门冬氨酸和色氨酸含量均显著高于对照组、R25和R75组（P0.05）。R25、R50和R75组鱼体的胱氨酸含量均显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.010.T005表5黑水虻虫粉替代鱼粉对加州鲈鱼体氨基酸含量的影响项目对照组R25组R50组R75组赖氨酸3.22±0.07b3.15±0.08b3.59±0.02a3.53±0.07a苏氨酸1.60±0.10a1.43±0.07b1.16±0.02c0.91±0.03d蛋氨酸1.48±0.04c1.50±0.03bc1.64±0.04a1.55±0.04b异亮氨酸1.52±0.06b1.53±0.04b1.84±0.04a1.78±0.05a亮氨酸3.80±0.07b3.73±0.02b4.03±0.08a3.84±0.06b苯丙氨酸1.93±0.12bc1.79±0.04c2.27±0.10a2.05±0.11b组氨酸0.98±0.08c1.09±0.06b1.18±0.05ab1.21±0.03a精氨酸*4.53±0.08a4.36±0.06b3.95±0.03c3.85±0.06c缬氨酸1.28±0.12c1.47±0.07b2.14±0.05a2.08±0.07a丙氨酸*3.60±0.10ab3.51±0.06b3.71±0.03a3.60±0.02ab酪氨酸2.49±0.06ab2.42±0.03b2.56±0.02a2.48±0.03b胱氨酸0.48±0a0.40±0.02b0.38±0.03b0.37±0.03b丝氨酸2.53±0.07a2.39±0.04b2.38±0.01b2.28±0.01c谷氨酸*7.07±0.34b7.06±0.09b7.50±0.08a7.43±0.05a甘氨酸*5.53±0.095.51±0.035.34±0.075.42±0.17脯氨酸2.38±0.082.28±0.052.28±0.151.33±0.15天门冬氨酸*4.64±0.08b4.56±0.05b4.77±0.03a4.60±0.06b色氨酸0.08±0.03b0.03±0.02b0.12±0.01a0.08±0.02b必需氨基酸总量19.29±0.48b19.25±0.36b20.93±0.15a20.33±0.26a呈味氨基酸25.37±0.6325.27±0.0425.00±0.2124.90±0.08注：1.同行数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示无显著差异（P0.05）。2.*为呈味氨基酸。%3讨论3.1脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉对加州鲈生长性能和饵料利用的影响Fawole等[9]使用42.6%蛋白含量的黑水虻虫粉替代非洲鲶鱼饵料中25%、50%和75%的鱼粉，结果发现，各试验组鱼的生长性能、营养物质利用、抗氧化能力和健康状况均无明显差异，且黑水虻虫粉替代非洲鲶鱼饵料中75%的鱼粉效果更好。Li等[10]报道，以脱脂黑水虻虫粉替代建鲤饵料中0、25%、50%、75%和100%的鱼粉，发现脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉对建鲤的生长性能无影响，但提高了建鲤的抗氧化能力，当替代量超过75%时，建鲤会产生应激反应和肠道组织病理损伤。黑水虻替代锦鲤饵料中鱼粉的比例低于70%时，黑水虻不会影响锦鲤的生长性能，但可明显提高锦鲤的抗氧化性和抗病能力[11]。韩星星等[12]检测黄鱼幼鱼生长表现、鱼体组成、血清生化指标及抗氧化能力等指标，发现利用脱脂黑水虻虫粉（37.78%粗蛋白和11.37%粗脂肪）替代饵料中40%的鱼粉，不会对大黄鱼幼鱼产生负面影响。本试验中，加州鲈经6 w饲养，各试验组的初重、末重、增重率和饵料系数均无明显差异，表明以蛋白含量为53%的脱脂黑水虻虫粉替代饵料中75%的鱼粉不会影响加州鲈的生长和饵料利用效率。因此，将加州鲈饵料鱼粉降低至10%，利用高蛋白的脱脂黑水虻虫粉替代肉食性鱼类饵料鱼粉具有可行性。3.2脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉对加州鲈形态学参数的影响鱼类的形态学参数主要包括肝体比、肥满度、空壳率、内脏指数等，形态学参数在一定程度上可以反映鱼类的健康和生长状况[13]。本试验中，随着脱脂黑水虻虫粉替代饵料鱼粉比例的增加，加州鲈鱼体的肝体比呈现明显增加的趋势，表明加州鲈摄食脱脂黑水虻虫粉后出现肝肿大现象，原因可能是脱脂黑水虻虫粉富含大量的饱和脂肪酸和几丁质，使肝细胞的脂肪代谢发生功能性障碍，导致脂肪在养殖鱼类的肝细胞内蓄积，引起肝损伤。胡俊茹等[14]研究发现，花鲈在摄食黑水虻虫粉替代鱼粉的饵料后，其肝细胞出现广泛的胞浆疏松、溶解或空泡状，甚至部分肝细胞核消失，肝细胞的分界模糊等现象。与本试验结果相似。三文鱼摄食黑水虻虫粉后，其肝脏细胞也出现一些颗粒状弥散性染色质等病变现象[15]。本试验中各组试验鱼之间的肥满度和空壳率无明显差异，表明加州鲈摄食脱脂黑水虻虫粉后，不会改变养殖鱼类的外在形态和可食用部分的大小。3.3脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉对加州鲈鱼体组成与氨基酸含量的影响鱼类体成分的组成不仅受鱼类品种、养殖阶段的差异等内源性因子的影响，同时也受饵料营养、养殖环境、投喂技术等外源性因素的影响[16]。本试验中，随着脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉水平的增加，加州鲈鱼体的粗蛋白含量呈现明显降低趋势，表明脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉会影响鱼体蛋白在体内的合成与沉积，与韩星星等[12]研究结果相一致，原因可能是脱脂黑水虻虫粉中缺乏鱼类生长所必需的某些氨基酸，导致鱼体蛋白质合成发生障碍。鱼体灰分含量和磷含量也随着替代鱼粉水平的增加而明显降低，原因可能是脱脂黑水虻虫粉中的灰分含量（8.4%）明显低于鱼粉中的灰分含量，随着脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉水平的增加，饵料中的总灰分含量随之减少，降低了灰分在加州鲈鱼体内的积累。采用蛋白含量为50.35%的黑水虻幼虫粉替代基础饵料中10%~50%的鱼粉，不会对黄颡鱼幼鱼全鱼的生化组成成分（粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、水分）产生影响[17]。当脱脂黑水虻虫粉替代不超过75%的鱼粉时，建鲤全鱼的体成分（粗蛋白质、粗脂肪、水分、粗灰分）不受影响[18]。因此，黑水虻虫粉替代鱼粉对鱼体成分的影响仍有待进一步研究。蛋白质的结构和功能主要由自身氨基酸的种类和构成所决定，而氨基酸种类和构成影响着鱼体的口感和风味[19-20]。因此，鱼类的营养品质可由自身氨基酸的组成模式来评价[21]。Hu等[22]研究发现，黑水虻虫粉替代鱼粉后会导致黄颡鱼肌肉中的苯丙氨酸和蛋氨酸含量明显降低。本试验中，随着脱脂黑水虻虫粉替代饵料鱼粉水平的增加，加州鲈鱼体的苏氨酸、精氨酸和丝氨酸含量呈现明显降低趋势，而其鱼体的组氨酸和缬氨酸含量呈现明显增加趋势，表明脱脂黑水虻虫粉会明显影响加州鲈鱼体的氨基酸组成模式。陈晓瑛等[17]报道，黄颡鱼肌肉中谷氨酸、天门冬氨酸、丙氨酸和甘氨酸等呈味氨基酸不受饵料中黑水虻虫粉替代鱼粉水平的影响，与本试验的结果相一致，表明脱脂黑水虻虫粉替代饵料鱼粉不会影响加州鲈鱼体的鲜美度。4结论本试验条件下，脱脂黑水虻替代饵料中75%鱼粉不会影响加州鲈的生长和饵料利用效率，但导致加州鲈肝发生肿大现象。加州鲈摄食脱脂黑水虻虫粉后，会明显改变其鱼体的生化组成。