叶黄素又名植物黄体素，是一种天然类胡萝卜素，主要来自色素型万寿菊[1-2]。叶黄素具有保护视觉、预防心血管疾病、抗癌、着色和抗氧化等重要作用，广泛用于药品、化妆品、食品及饲料等领域[3-6]。研究发现，叶黄素能有效改善胡子鲶（Clarias fuscus Laeepede）、杂交鲶（Claris fuscus）、黄颡鱼（Pelteobagrus fulvidraco）、金鱼（Carassius auratus）和黄慈鲷（Labidochromis caeruleus）的体色，提高机体抗氧化能力[7-11]。因此，叶黄素作为水产饲料功能性添加剂成为目前研究热点之一[12-13]。黄金锦鲤（Yamabaki ogon）通体金黄，头像龙头，鱼须、鱼鳍飘逸修长。水产动物本身不能够合成类胡萝卜素[14]，黄金锦鲤常因类胡萝卜素摄入不足导致体色不黄，市场价格降低，给养殖户带来经济损失。类胡萝卜素是脂溶性的，脂肪有提高类胡萝卜素的溶解度和稳定性、促进类胡萝卜素吸收的作用[15-16]。研究发现，适量脂肪可以提高虾青素、叶黄素、螺旋藻等类胡萝卜素类的着色剂对红白锦鲤和鹦鹉鱼等的着色效果[17-19]。赵子续等[20]研究发现，叶黄素可以增加黄金锦鲤的体色黄度。但是，不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤的生长及着色效果影响尚未见报道。本试验通过探讨不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤生长、体色及各组织中总类胡萝卜素沉积量的影响，确定有利于提高黄金锦鲤增色效果的饲料脂肪水平，为黄金锦鲤增色饲料的配制提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验黄金锦鲤幼鱼初始体重为（25.97±0.20）g，购自天津市金水族水产养殖公司；叶黄素（含量为2%）购自晨光生物科技集团股份有限公司。1.2试验方法1.2.1试验设计将黄金锦鲤暂养2 w适应环境。选取体质健壮、规格一致黄金锦鲤360尾，随机分为6组，每组3个重复，每个重复20尾鱼，分配在18个水族箱（86 cm×56 cm×48 cm）中。对照组（D0）不添加叶黄素，试验组D1~D5分添加200 mg/kg叶黄素，D0~D5组的饲料脂肪水平分别为10.19%、3.51%、6.35%、9.90%、12.61%、16.64%。每天8：00、12：30、17：00投喂3次。试验期6 w。养殖期间水温25~28 ºC，溶氧6~10 mg/L，pH值7.5~8.2，中午光照510~1 774 Lux。1.2.2饲料的制作及饲料成分的测定各组原料粉碎，过60目筛，逐级混合，用环模颗粒机制成直径为2.0 mm的硬颗粒饲料，晾干备用。饲料中粗蛋白（CP）采用GB/T 6432—2018中凯氏定氮法测定，粗脂肪（EE）采用GB/T 6433—2006中乙醚提取法测定，粗灰分（Ash）采用GB/T 6438—2007中灼烧法测定，水分采用GB/T 6435—2014中干燥法测定。试验日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.007.T001表1试验日粮组成及营养水平项目D0叶黄素试验组D1D2D3D4D5原料组成豆粕25.0025.0025.0025.0025.0025.00双低菜粕15.0015.0015.0015.0015.0015.00发酵豆粕5.005.005.005.005.005.00鱼粉10.0010.0010.0010.0010.0010.00鸡肉粉5.005.005.005.005.005.00面粉15.0015.0015.0015.0015.0015.00小麦麸8.408.408.408.408.408.40膨润土7.0012.009.006.003.000叶黄素（2%）01.001.001.001.001.00豆油6.0003.006.009.0012.00防霉剂0.100.100.100.100.100.10氯化胆碱0.200.200.200.200.200.20氯化钠0.300.300.300.300.300.30磷酸二氢钙2.002.002.002.002.002.00预混料1.001.001.001.001.001.00合计100.00100.00100.00100.00100.00100.00营养水平粗蛋白34.1734.0534.1734.0734.3933.97粗脂肪10.193.516.359.9012.6116.64粗灰分14.4018.4216.5914.0611.709.60水分9.359.279.169.209.069.14注：1.预混料购自帝斯曼（中国）有限公司。2.营养水平均为实测值。%1.3测定指标及方法1.3.1生长性能和全鱼营养成分测定养殖试验结束试验鱼饥饿24 h，以每箱为单位称量鱼体重，计量鱼尾数，计算特定生长率（SGR）、蛋白质效率（PER）、摄食率（FI）、增重率（WG）、成活率（SR）、饲料系数（FCR）。全鱼营养成分测定：将全鱼烘干，计算水分，测定全鱼的粗脂肪、粗蛋白和粗灰分含量（测定方法同1.2.2）。SGR(%/d)=100×[ln(Wt/Nt)-ln(W0/N0)]/t(1)PER=(Wt-W0)/(I×P1)(2)FI(%/d)=100×I/[t×(W0+Wt)/2](3)WG=(Wt-W0)/W0×100%(4)SR=Nt/N0×100%(5)FCR=I/(Wt-W0＋Wd)(6)式中：I为摄食量干重（g）；W0为试验鱼的初始总重量（g）；Wt为试验鱼的终末总重量（g）；Wd为每组试验鱼的死亡总重量（g）；N0和Nt为试验开始和试验结束时每组鱼尾数；t为试验天数（d）；P1为饲料蛋白质含量（%）。1.3.2背部色差值L*、a*、b*的测定分别于试验开始及2、4、6 w末检测黄金锦鲤背部色差值，每组取5尾鱼，使用吸水纸将鱼体表面的水分吸干，将色差仪（CR-400；日本美能达色差仪）紧贴侧线与背鳍之间表皮处，记录结果。L*值（亮度）、a*值（+a*红度，-a*绿度）、b*值（+b*偏黄，-b*偏蓝）代表颜色的状态。1.3.3总类胡萝卜素含量的测定养殖结束，参考崔培等[17]方法，取黄金锦鲤的背部皮肤、鳞片、肌肉、肝胰脏、肾脏、脾脏、肠道各组织进行总类胡萝卜素含量的测定。总类胡萝卜素含量(mg/kg)=(A*K*V)/(E*G)(7)式中：A为吸光度值；K为常数（104）；V为提取液的体积（mL）；E为摩尔消光系数（2 500）；G为样品的质量（g）。1.4数据统计与分析采用统计软件SPSS 20中的单因素方差分析（One-way ANOVA）方法分析试验数据的差异性，采用Duncan's法进行多重比较分析，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤生长性能的影响（见表2）由表2可知，D1~D5组黄金锦鲤的末重、WG、SGR、PER均随着饲料脂肪含量的增加呈现“先升后降”的趋势，且D3组显著高于D1、D2、D4和D5组（P0.05）；D3组的WG显著高于对照组（P0.05），D1~D5组FI呈现逐渐下降的趋势，且D1、D2组FI显著高于D0、D3~D5组（P0.05）。D1~D5组FCR呈现“先降后升”的趋势，D3组的FCR显著低于D1、D2、D4和D5组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.007.T002表2不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤生长性能的影响组别初重/g末重/gSR/%WG/%SGR/(%/d)PER/%FI/%FCRD0组26.17±0.1458.00±0.50a100.00±0.00121.65±1.05b0.76±0.01a2.38±0.03ab2.17±0.02b1.32±0.02bcD1组25.83±0.1452.65±1.23c98.33±2.89103.54±3.38d0.64±0.03b1.95±0.08c2.35±0.04a1.63±0.06aD2组26.08±0.2954.75±1.09bc98.33±2.89109.61±5.14cd0.68±0.03b2.06±0.08c2.30±0.03a1.53±0.06aD3组25.83±0.1459.51±1.33a98.33±2.89130.31±4.40a0.80±0.03a2.54±0.09a2.17±0.04b1.25±0.04cD4组25.92±0.1455.27±1.97b98.33±2.89112.88±7.82c0.70±0.05b2.25±0.15b2.18±0.05b1.39±0.10bD5组25.83±0.1454.52±1.35bc96.67±5.77110.32±4.02cd0.68±0.03b2.25±0.09b2.20±0.03b1.42±0.14b注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤体成分的影响（见表3）由表3可知，D0组水分含量显著高于D3、D5组（P0.05）。D1~D5组粗脂肪含量随着饲料脂肪含量的升高而上升，D3组和D5组粗脂肪含量显著高于D0、D1、D2组（P0.05），且D3组的粗脂肪含量最高；D5组粗灰分含量显著高于D1、D2组（P0.05），且D5组粗灰分含量最高。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.007.T003表3不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤体成分的影响组别水分粗蛋白粗脂肪粗灰分D0组74.16±0.68a13.71±0.308.27±0.23c3.33±0.07abD1组73.93±0.88ab14.04±0.977.99±0.24c2.99±0.20bD2组72.92±0.48ab14.55±0.158.72±0.15bc2.97±0.23bD3组72.29±1.02b14.32±0.609.86±0.63a3.32±0.19abD4组73.08±0.93ab14.20±0.549.37±0.39ab3.25±0.15abD5组72.20±1.37b14.49±0.589.78±0.60a3.36±0.22a%2.3黄金锦鲤的体色变化2.3.1不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤背部黄度b*值的影响（见表4）由表4可知，D0~D5组黄金锦鲤背部b*值随着投喂时间的增加，呈上升趋势，且最高值均出现在第6 w。D1~D5组b*值在2、4、6 w均显著高于D0组（P0.05），且D3组b*值在各周均为最高。第2 w，D3、D4组b*值显著高于D1、D2和D5组（P0.05），第4 w，D1组的b*值显著低于D3组，且D1组的b*值最低（P0.05）。D3组第2 w的b*值比初始b*值增加58.13%，第4 w的b*值比第2 w增加了6.84%，第6 w的b*值比第4 w增加10.16%。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.007.T004表4不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤背部b*值的影响组别初始第2 w第4 w第6 wD0组20.04±0.60B21.71±1.17ABd23.14±3.00ABc24.76±0.58AbD1组20.04±0.60C27.58±0.45Bbc29.41±3.41Bb37.32±2.76AaD2组20.04±0.60C28.55±1.80Bbc31.81±1.06Aab34.87±2.65AaD3组20.04±0.60D31.69±0.82Ca33.86±1.58Ba37.30±1.16AaD4组20.04±0.60D29.42±2.54Cab32.61±1.40Bab35.67±0.88AaD5组20.04±0.60C25.86±1.35Bc31.03±1.73Aab34.07±2.11Aa注：同行不同肩标大写字母表示不同时间段同组内的差异显著（P0.05）；下表同。2.3.2不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤背部L*值的影响（见表5）由表5可知，D1组第6 w的L*值显著低于第2 w（P0.05）；D4组第6 w的L*值在显著低于初始及第2、4 w（P0.05），其他各组间的L*值的差异均不显著（P0.05）10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.007.T005表 5不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤背部L*值的影响组别初始第2 w第4 w第6 wD0组82.91±1.9687.53±2.5685.86±4.8481.37±8.87D1组82.91±1.96AB86.02±4.76A83.93±2.05AB79.05±1.67BD2组82.91±1.9684.87±0.8285.67±2.1882.33±2.88D3组82.91±1.9682.37±7.4083.91±0.6879.46±0.88D4组82.91±1.96A84.27±2.23A85.10±2.66A76.96±2.94BD5组82.91±1.9684.65±7.0084.63±2.4279.72±1.412.3.3不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤背部a*值的影响（见表6）由表6可知，第4 w，D4组的a*值的绝对值显著高于D0、D3组（P0.05）。D2组第4 w的a*值的绝对值显著高于初始和第2 w（P0.05），且在第4 w最大。D5组第6 w的a*值的绝对值显著高于初始值（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.007.T006表6不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤背部a*值的影响组别初始第2 w第4 w第6 wD0组-2.66±0.17-2.70±0.80-3.13±0.36b-3.33±0.98D1组-2.66±0.17-3.18±1.76-4.15±0.61ab-3.53±1.11D2组-2.66±0.17B-2.71±0.55B-4.46±0.34Aab-3.82±1.02ABD3组-2.66±0.17-4.27±0.18-3.25±1.07b-3.49±2.02D4组-2.66±0.17-3.13±2.09-4.67±0.27a-2.86±1.55D5组-2.66±0.17B-3.62±0.97AB-3.32±1.15ABab-4.20±0.13A2.4不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤各组织中总类胡萝卜素含量的影响（见表7）由表7可知，D1~D5组肝胰脏、鳞片、肠、脾脏和肾脏中总类胡萝卜素含量显著高于D0组（P0.05）；D3组肝胰脏、鳞片、肠、脾脏中总类胡萝卜素含量最高。D1~D4组肌肉中总类胡萝卜素的含量均显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.007.T007表7不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤各组织中总类胡萝卜素含量的影响组别肝胰脏皮肤鳞片肠脾脏肾脏肌肉D05.31±0.42e25.63±0.72c14.45±3.16c5.02±0.61d2.58±0.50b4.45±0.49b0.67±0.51cD124.18±3.60d37.38±2.15bc35.69±4.46ab9.65±2.29c10.44±3.25a10.02±3.33a2.82±1.17abD244.10±6.55c40.86±4.19b38.70±4.46a19.05±2.98bc8.77±1.98a10.26±1.60a2.94±0.41abD387.15±15.18a73.92±9.63a42.43±3.94a32.00±9.37a12.18±4.63a9.12±1.92a3.42±1.00aD469.93±3.98b69.24±9.80a39.31±3.04a25.17±9.45ab10.03±1.15a9.06±3.17a2.41±0.84abD564.51±6.00b72.54±10.11a29.10±4.15b19.74±8.31abc7.80±1.55a8.88±1.53a1.44±0.48bcmg/kg3讨论3.1不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤生长性能的影响脂肪是鱼类饲料的主要营养物质，对鱼类生长、代谢和饲料成本等产生重要影响[21-23]。本试验表明，随着饲料脂肪含量的增加，D1~D5组黄金锦鲤的终末体重、增重率、特定生长率、蛋白质效率呈先升后降的趋势，且D3（脂肪9.90%）组的数值最高，而饲料系数呈现相反的变化趋势。与在红白锦鲤（Ornamental Carp）、大菱鲆（Scophthalmus maximus L.）、江黄颡鱼（Pelteobagrus vachelli Richardson）和团头鲂（Megalobrama amblycephala）上的研究结果一致[17,24-26]。研究发现，饲料脂肪过低时鱼体会消耗一部分蛋白质作为能量来源，对蛋白质造成浪费；脂肪过高会抑制鱼体肌肉中脂肪酸的合成，降低碳水化合利用率及脂溶性维生素等营养成分的吸收，甚至引发脂肪肝等疾病[27-29]。脂肪添加过高或过低都会阻碍鱼的生长[27]。本试验研究表明，添加叶黄素的D3组（脂肪9.90%）的增重率显著高于D0组（脂肪10.19%），说明叶黄素对黄金锦鲤的生长有明显促进作用。与林城丽等[30]研究结果一致。本试验中，黄金锦鲤获得最好生长性能的饲料脂肪水平为9.90%。3.2不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤全鱼体成分的影响饲料的脂肪水平会影响鱼类生长、代谢等生理机能，导致鱼类肌肉等组织的脂肪含量及脂肪酸组成发生变化[31]。当鱼类从饲料中获得的脂肪超过一定量的时候，过剩脂肪会经过同化作用沉积为体脂，导致全鱼体脂肪含量增加[31]。本试验中，高脂肪组（脂肪9.90%~16.64%）全鱼粗脂肪含量明显高于低脂肪组（脂肪3.51%、6.35%），与在胡子鲶、眼斑双锯鱼（Amphiprionocellaris）、额尔齐斯河银鲫（Carassius auratus gibelio Block）等研究结果一致[32-34]。D3组全鱼粗脂肪含量明显高于D0组（脂肪10.19%），说明叶黄素对脂肪在鱼体内的沉积也起到了明显的促进作用。研究表明，随着饲料脂肪水平的增加，对鱼体水分和粗灰分含量无明显影响，但会降低全鱼蛋白含量[35-37]。也有研究表明，饲料脂肪的增加，全鱼水分含量逐渐下降，而对全鱼蛋白含量无明显影响[34]。本试验中，饲料的脂肪水平对鱼体粗蛋白含量无明显影响，对水分和粗灰分的影响无明显变化规律。不同学者的研究结果有所不同，说明饲料脂肪水平对鱼类体成分的影响，因鱼的种类和饲料营养的不同呈现出不一样的结果。3.3不同脂肪水平叶黄素饲料对黄金锦鲤体色的影响色差仪是一种精准的色泽测定仪器，常被用于食品、鱼肉表面色泽和观赏鱼体色的测定[17,38-40]。本试验研究发现，随着饲料脂肪水平的增加，鱼体的L*值（亮度）和a*值（-a*绿度）在各试验组间无明显规律性变化；含叶黄素的D1~D5组鱼的b*值（+b*黄度）均产生逐渐上升的趋势，最高值出现在第6 w，明显高于对照D0组。表明叶黄素对黄金锦鲤有明显增色作用，与赵子续等[20]、林城丽等[30]对黄金锦鲤的研究结果一致。本试验中，第2 w，D3组的b*值明显高于其他添加叶黄素的处理组；与2、4 w相比，添加叶黄素的各处理组鱼体b*值均在第6 w达到最高值，但各组之间差异不明显；表明随着养殖时间的增加，添加叶黄素的各饲料组对黄金锦鲤着色效果的差异性逐渐减小，直至无差异；原因可能是在第6 w，黄金锦鲤对叶黄素的吸收和着色均达到了相对饱和状态。本试验研究发现，D3组第2 w鱼体b*值比初始b*值增加了58.13%，第4 w的b*值比第2 w增加了6.84%，第6 w的b*值比第4 w增加了10.16%；说明前两周黄金锦鲤增色最快，而随着养殖时间的延长，虽然鱼体黄度有所增加，但增加幅度较小。史少奕等[8]研究发现，在饲料中添加200 mg/kg叶黄素可在20 d内有效改善杂交鲶体色，与本试验结果类似。因此，表明投喂2 w叶黄素含量为200 mg/kg、脂肪含量为9.90%的饲料，就可以使黄金锦鲤获得明显增色效果。3.4不同脂肪水平的叶黄素饲料对黄金锦鲤各组织中总类胡萝卜素含量的影响叶黄素在水产动物中的着色过程十分复杂，受鱼类自身和外界的诸多因素影响[12]。因此，很多学者主要通过测定鱼类组织中的总类胡萝卜素含量，衡量色素累积的水平[41-42]。本试验研究发现，类胡萝卜素主要沉积在肝胰脏、皮肤、鳞片、肠道组织中，在脾脏、肾脏和肌肉中较少；表明肝胰脏、皮肤、鳞片和肠是黄金锦鲤类胡萝卜素吸收、转运和存储的主要器官组织[42]。随着饲料脂肪量的增加，各组织中总类胡萝卜素含量呈现先升后降的趋势，与付旭等[43]对淡黑镊丽鱼（Labidochromis caeruleus）的研究结果类似。在类胡萝卜素含量较多的肝胰脏、皮肤、鳞片、肠道组织中，最高值均出现在D3组（脂肪9.90%）。因此，饲料的脂肪水平为9.90%时，黄金锦鲤各组织的总类胡萝卜素含量最大，着色效果也最好。4结论考虑到饲料成本和养殖周期等综合因素，投喂2 w叶黄素含量为200 mg/kg、脂肪含量为9.90%的饲料，可以使黄金锦鲤获得较好的生长和着色效果，提高商品价值。