鱼粉作为水产动物饵料的主要蛋白，对饵料的品质和价格产生重要影响。随着鱼粉需求量的增加，鱼粉供应短缺。因此，选择适宜的蛋白源替代鱼粉成为研究热点。黑水虻（Hermetia illucens L.）是一种能够有效处理有机垃圾的昆虫，具有较高的蛋白含量及合理的氨基酸组成，能够作为饵料蛋白源替代鱼粉[1-2]。研究表明，黑水虻幼虫含有抗菌肽、几丁质和壳聚糖等生物活性成分，对机体的抗氧化性能及免疫功能具有促进作用[3-4]。乌鳢（Channa argus）是一种典型的肉食性鱼类，肌间刺较少，营养价值高，肉质鲜美，养殖产量较高，受到人们的广泛认可[5]。随着乌鳢养殖产业的发展，人工配合饵料的普及，乌鳢饵料面临着鱼粉资源短缺和价格上涨的问题。黑水虻作为一种新型饵料蛋白，已经在很多鱼类养殖中得到应用。但黑水虻虫粉替代鱼粉对乌鳢生长性能、抗氧化及免疫功能的影响未见报道。本试验使用黑水虻虫粉替代50%饵料鱼粉，研究黑水虻虫粉对乌鳢生长性能、抗氧化和免疫功能的影响。1材料与方法1.1试验饵料试验采用黑水虻干虫（干物质97.00%、粗蛋白33.30%、粗脂肪39.20%、灰分13.30%）、部分脱脂的黑水虻虫粉（干物质95.90%、粗蛋白53.00%、粗脂肪18.80%、灰分8.40%）均购自杭州谷胜农业科技有限公司；其他饵料原料购自浙江德清鸿利饲料有限公司。饵料原料使用西厨摇摆式多功能粉碎机，过40目筛，按比例称重。未脱脂黑水虻干虫脂肪含量较高，按比例与豆粕和玉米蛋白粉混合，粉碎。饵料原料及饵料样品中的水分含量采用105 ℃常压干燥法测定（GB/T 6435—2014）、粗蛋白采用凯氏定氮法测定（GB/T 6432—2018）、粗脂肪采用乙醚提纯法测定（GB/T 6433—2006）、粗灰分含量采用550 ℃灼烧法测定（GB/T 6438—2007）。基础饵料主要原料营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.011.T001表1基础饵料主要原料营养水平（风干基础，n=2）项目干物质粗蛋白粗脂肪灰分鱼粉92.6065.608.7015.40棉粕89.7046.103.007.00菜粕89.8040.101.506.50豆粕89.4044.701.406.10鸡肉粉96.5065.7012.7013.60面粉86.4013.902.007.00黑水虻蛹干虫97.0033.3039.2013.30黑水虻脱脂虫粉95.9053.0018.808.40%基础饵料组成及营养水平见表2。鱼粉和鱼油作为对照组主要的蛋白源和脂肪源。分别采用黑水虻干虫（D1组）和黑水虻虫粉（D2组）替代50%的饵料鱼粉。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.011.T002表2基础饵料组成及营养水平（风干基础）项目对照组D1组D2组原料组成鱼粉40.0020.0020.00棉粕3.003.003.00菜粕3.003.003.00血粉1.001.001.00啤酒干酵母2.002.002.00玉米蛋白粉2.508.008.00豆粕10.0010.0010.00鸡肉粉10.0010.0010.00面粉19.1019.6016.60磷酸氢钙1.501.501.50多维多矿1.001.001.00黑水虻蛹干虫020.000黑水虻脱脂虫粉0020.00鱼油6.0003.00氯化胆碱0.500.500.50甜菜碱0.400.400.40合计100.00100.00100.00营养水平粗蛋白48.1045.1047.90粗脂肪12.7011.4012.00粗灰分10.2010.009.20注：1.试验多维多矿（罗维素）购自荷兰帝斯曼（中国）有限公司。2.营养水平均为实测值。%饵料原料按照比例从小到大称量，搓匀，使用5 kg混匀机搅拌3 h，确保饵料原料的均匀度。饵料原料混合物中添加15%的自来水，搅拌均匀，制成2.5 mm的硬颗粒沉性饵料。硬颗粒饵料26 ℃风干72 h，-20 ℃保存，备用。1.2饲养管理试验选取经过驯化、摄食商用配合饵料的乌鳢幼鱼，购自浙江省南浔菱湖渔都家庭农场。鱼暂养2 w，投喂商用配合饵料。试验在杭州市农业科学研究院水产研究所基地水泥池网箱中进行，水泥池为7 m×6 m×1.8 m。养殖选取健康、规格均一的乌鳢幼鱼135尾随机分至9个网箱（1 m×1 m×1.5 m），分成3组，每组3个重复，每个重复15尾鱼。每天早、晚2次表观饱食投喂。养殖水体24 h充气，自然光照，水温26~31 ℃。每2 w检测1次水质，溶氧大于7.3 mg/L，氨氮小于0.13 mg/L，每周换水30%。试验期为60 d。1.3测定指标及方法1.3.1生长性能养殖最后1 d，鱼禁食24 h，对每个网箱里乌鳢称重，记录数量。计算试验鱼生长、饵料利用率和形态学参数等指标。增重率=(末重-初重)/初重×100%(1)饵料系数=摄食量/体增重(2)肥满度=体重/体长3×100%(3)脏体比=内脏重/体重×100%(4)肝体比=肝脏重/体重×100%(5)成活率=终末尾数/初始尾数×100%(6)1.3.2血清、组织的抗氧化及免疫指标使用50 mg/L ms-222（Sigma-Aldrich公司）对试验鱼样品进行麻醉处理，每个网箱随机取5尾，鱼尾静脉采血，4 ℃静置1~2 h，3 000 r/min离心10 min，分离制备血清。取肝脏和肾脏，-20 ℃冷冻保存，备用。检测的血清和肝脏抗氧化指标包括：超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、总抗氧化物能力（T-AOC）及丙二醛（MDA）。检测的血清和肾脏免疫指标包括：溶菌酶（LZM）、酸性磷酸酶（ACP）、免疫球蛋白M（IgM）、补体C3和C4。指标均使用南京建成生物工程研究所试剂盒检测，方法参照试剂盒说明。1.4数据统计与分析数据采用SPSS 26.0单因素方差分析（one-way ANO-VA）方法进行差异分析，采用Duncan's法进行多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同试验饵料对乌鳢幼鱼生长性能的影响（见表3）由表3可知，与对照组相比，使用黑水虻干虫（D1组）、部分脱脂黑水虻虫粉（D2组）替代乌鳢幼鱼饵料鱼粉对乌鳢幼鱼初重、末重、增重率、饵料系数、肥满度、肝体比及成活率，均无显著影响（P0.05）；D1组乌鳢幼鱼的脏体比显著高于其他组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.011.T003表3不同试验饵料对乌鳢幼鱼生长性能的影响组别初重/g末重/g增重率/%饵料系数肥满度/(g/cm3)脏体比/%肝体比/%成活率/%对照组6.79±0.2848.55±3.92613.62±28.381.04±0.121.50±0.136.73±0.24b1.78±0.2580.00±11.55D1组7.27±0.8452.79±7.43629.13±94.330.88±0.021.31±0.098.04±0.34a2.08±0.2488.89±10.18D2组6.56±0.6045.93±0.72605.09±73.420.95±0.111.37±0.067.35±0.38b1.99±0.3188.89±13.88注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2不同试验饵料对乌鳢幼鱼抗氧化指标的影响（见表4、表5）由表4可知，与对照组相比，D1组、D2组乌鳢幼鱼血清SOD活性显著升高（P0.05），MDA含量显著降低（P0.05）。D1组乌鳢幼鱼的CAT活性显著高于D2组（P0.05）；T-AOC活性显著高于其他组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.011.T004表4不同试验饵料对乌鳢幼鱼血清抗氧化指标的影响组别SOD/(U/mL)CAT/(U/mL)T-AOC/(mmol/L)MDA/(μmol/L)对照组48.44±7.66b3.57±0.99ab0.18±0.01b6.59±0.65aD1组72.67±5.80a4.26±1.09a0.24±0.02a5.35±0.29bD2组68.22±13.11a2.31±0.50b0.16±0.02b5.09±0.62b由表5可知，D2组乌鳢幼鱼CAT活性显著低于对照组（P0.05），D1组乌鳢幼鱼肝脏MDA含量显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.011.T005表5不同试验饵料对乌鳢幼鱼肝脏抗氧化指标的影响组别SOD/(U/mg prot)CAT/(U/mg prot)T-AOC/(mmol/g prot)MDA/(μmol/g prot)对照组4 332.97±525.5135.71±4.87a0.14±0.012.03±0.34aD1组5 471.51±616.3030.55±3.45a0.14±0.031.10±0.01bD2组5 122.53±436.7121.80±2.76b0.10±0.011.58±0.28ab2.3不同试验饵料对乌鳢幼鱼免疫指标的影响（见表6、表7）由表6可知，D1组乌鳢幼鱼血清LZM活性和IgM含量均显著高于其他组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.011.T006表6不同试验饵料对乌鳢幼鱼血清免疫指标的影响组别LZM/(U/mL)ACP/(U/L)IgM/(g/L)补体C3/(mg/L)补体C4/(mg/L)对照组916.67±130.10b3 664.25±521.221.89±0.13b326.90±72.61226.46±33.32D1组1 406.25±136.22a3 043.78±415.552.42±0.31a307.27±23.34192.45±16.72D2组1 000.00±54.13b3 158.02±607.611.80±0.18b277.98±37.81188.92±16.77由表7可知，D1组和D2组乌鳢幼鱼肾脏的ACP活性、补体C3和C4含量均显著高于对照组（P0.05），D1组乌鳢幼鱼肾脏的IgM含量显著低于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.011.T007表7不同试验饵料对乌鳢幼鱼肾脏免疫指标的影响组别LZM/(U/mg prot)ACP/(U/g prot))IgM/(mg/g prot))补体C3/(mg/g prot))补体C4/(mg/g prot))对照组623.41±93.193128.18±201.49b30.11±5.48b41.88±6.66b22.79±1.86bD1组798.55±89.424061.95±357.50a41.81±5.20a63.70±6.23a30.25±1.90aD2组709.91±86.704175.33±451.61a37.21±3.82ab60.70±6.70a31.10±2.37a3讨论3.1不同试验饵料对乌鳢幼鱼生长性能的影响研究表明，黑水虻作为饵料蛋白替代50%以上鱼粉对建鲤、虹鳟、黄颡鱼、七星鲈鱼等的生长性能及饵料利用率均无明显的影响[4,6-8]。本试验以黑水虻干虫和部分脱脂黑水虻替代50%的鱼粉，替代鱼粉后乌鳢幼鱼的生长、饵料利用和成活率未发生明显的变化。饵料的蛋白质和能量水平对鱼类生长起主要作用，原因可能是黑水虻替代鱼粉后试验饵料的粗蛋白和粗脂肪含量及其氨基酸组成差异性不大，也可能与乌鳢对黑水虻替代鱼粉后的试验饵料的吸收和利用有关[9-10]。胡俊茹等[11]研究发现，27%的黑水虻替代50%饵料鱼粉，七星鲈的脏体比和肝体比明显升高，肥满度无差异。本试验结果表明，黑水虻干虫替代鱼粉，乌鳢脏体比明显提升，可能是由于饵料中的饱和脂肪酸在内脏中的积累，部分脱脂黑水虻对乌鳢形体指标无明显影响。这一结果在建鲤、虹鳟、大西洋鲑及欧洲鲈鱼等研究上也有类似结果，但脱脂的比例各有不同，说明脱去部分脂肪有助于降低鱼体内脏的脂肪积累[12-15]。3.2不同试验饵料对乌鳢幼鱼抗氧化指标的影响机体内过多的活性氧自由基会对机体健康产生不利影响。SOD、CAT及T-AOC活性是判定机体抗氧化水平的主要指标[16-18]。MDA是多不饱和脂肪酸过氧化的产物，MDA的积累对机体细胞和组织产生损害。研究表明，添加一定水平的黑水虻可以增强凡纳滨对虾幼虾、锦鲤、建鲤、草鱼、花鲈及大黄鱼等血清、肝胰脏抗氧化能力，黑水虻对降低欧洲鲈鱼肝脏氧化具有促进作用[6,19-23]。本试验结果表明，黑水虻干虫比部分脱脂黑水虻对鱼体抗氧化能力促进效果更好，可能是由于黑水虻能够诱导抗氧化能力加强[24]，具体原因有待进一步深入研究。3.3不同试验饵料对乌鳢幼鱼免疫指标的影响Zarantoniello等[25]研究发现，黑水虻替代饲料中25%、50%鱼粉后对斑马鱼的炎症因子和免疫反应并未有明显的负面影响。Xiao等[4]研究表明，黑水虻替代48%的鱼粉，黄颡鱼血清溶菌酶活性提升6.8%。Li等[26]研究表明，黑水虻蛹粉全部替代大西洋鲑饵料的鱼粉对其肠道健康无明显影响，但黑水虻蛹粉会导致海水阶段的大西洋鲑肠道产生炎症反应。本试验中，部分脱脂黑水虻虫粉替代鱼粉后乌鳢的血清免疫指标与对照组差异不明显，但黑水虻干虫替代鱼粉对提升乌鳢幼鱼的免疫能力的作用较为明显。原因可能是黑水虻干虫中的短链脂肪酸对鱼体的肠道健康及肠道微生物产生积极影响；同时黑水虻干虫中含有大量的中链饱和脂肪酸C12∶0，C12∶0具有抗菌作用，能够提升鱼体的免疫能力，而且黑水虻中的几丁质、抗菌肽等对机体的免疫提升也有促进作用[27-31]。4结论本试验中，黑水虻替代50%鱼粉对乌鳢幼鱼生长性能无显著性影响，对乌鳢幼鱼的抗氧化及免疫功能具有一定的促进作用，同时未脱脂处理的黑水虻干虫替代鱼粉对乌鳢的抗氧化及免疫能力促进作用更加明显。