棘颊雀鲷（Premnas biaculeatus）属鲈形目（Perciformes）、雀鲷科（Pomacentridae）、棘颊海葵鱼属（Premnas），俗称透红小丑鱼[1]。棘颊雀鲷的繁育技术已经突破，但人工养殖群体的体色不如野生品种艳丽，观赏价值和经济价值较低。目前，国内外有关棘颊雀鲷的研究较少，仅在繁育及育苗等方面有少量报道[2-8]。在棘颊雀鲷人工增色方面，仅有Ho等[8]研究饵料中脂化虾青素浓度对皮肤着色及色素生理指标影响。虾青素是增加鱼体色亮度最有效的类胡萝卜素之一，可以直接被鱼体吸收并作用于色素细胞形成组织沉淀[9-11]，增加鱼类体色。目前，虾青素的生产和提取工艺不断完善，生产的虾青素含量和纯度越来越高[12]，功能效果也逐渐增强。Ho等[8]研究的虾青素组间浓度差距在10倍以上，且其试验对象为30日龄稚鱼，但目前市场上销售的棘颊雀鲷大多为亚成鱼，规格均在5 cm以上，研究成果已不能够适应当下精准化养殖的技术需求。精准确定饵料中天然虾青素（雨生红球藻提取物）对棘颊雀鲷体色的影响，探讨其最适添加浓度对推进小丑鱼养殖产业化发展具有重要意义。本试验研究饵料中不同虾青素剂量对棘颊雀鲷生长及增色效果的影响，旨在为棘颊雀鲷人工养殖提供参考。1材料与方法1.1试验材料天然虾青素（雨生红球藻提取物，10%）购自西安尚诚生物科技有限公司。1.2试验设计选取60尾规格一致、平均体质量（7.98±1.32）g、健康的棘颊雀鲷，所有试验鱼均为同一对亲鱼繁殖的个体，随机分为5组，每组3个重复，每个重复4尾鱼。以海水鱼普通饲料为基础饵料，基础饵料组成及营养水平见表1。在增色预试验的基础上，分别配置含有0（对照组）、50（A50组）、100（A100组）、150（A150组）、200 mg/kg（A200组）天然虾青素的试验饵料，所有饵料烘干，装袋，放入4 ℃冰箱，备用。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.009.T001表1基础饵料组成及营养水平原料组成含量营养水平合计100.0鱼粉32.0水分（MSTR）10.0发酵豆粕18.0粗蛋白（CP）44.0面粉18.0粗脂肪（EE）3.0鱼油8.0粗灰分（Ash）16.0玉米蛋白粉15.0粗纤维（CF）6.0维生素预混料1.0总磷（TP）1.3有机螯合矿物质1.0赖氨酸（Lys）2.3磷酸二氢钙4.0钙（Ca）4.0大豆卵磷脂2.8防霉剂0.1抗氧化剂0.1注：1.维生素预混料为每千克饵料提供：VB1 25 mg、VB2 45 mg、VB12 0.1 mg、VK3 10 mg、纤维醇800 mg、烟酸200 mg、叶酸1.2 mg、生物素32 mg、VD3 5 mg、VE 120 mg、乙氧喹150 mg、泛酸500 mg、微晶纤维素14.52 mg。2.有机螯合矿物质为每千克饵料提供：甘氨酸铁螯合物95 000 mg、蛋氨酸锌螯合物30 000 mg、甘氨酸酮螯合物4 000 mg、蛋氨酸锰螯合物11 800 mg、甘氨酸硒螯合物350 mg、蛋氨酸碘螯合物1 500 mg、蛋氨酸钴螯合物200 mg。3.营养水平均为实测值。%1.3饲养管理试验在天津市水产研究所观赏水族养殖车间进行。按照试验设计将试验鱼放入水族缸（60 cm×45 cm×35 cm；LED灯，30 w，L/D=14∶10）中，水温26~28 ℃，pH值7.8~8.3，每天8：30和15：00定时饱食投喂，试验期8 w，观察试验鱼的体色变化情况。1.4测定指标及方法试验第0、2、4、6、8 w，测定缸中每条鱼的体色，使用0.1 mL/L丁香油将其麻醉，使用滤纸吸干体表水分，每尾鱼均按头部朝左的顺序放置，使用色度色差仪（Konica Minolta CM-700d，日本）测定其体表色度色差值，每尾鱼测定腹部前部、中部和后部3个部分，取平均值。测出明亮度值（L*）、红绿度值（a*）和黄蓝度值（b*），并测量其全长、体长和体质量。测量结束，将鱼放入充氧的海水水桶中苏醒，待鱼恢复正常后将鱼放入到原养殖缸中养殖。计算棘颊雀鲷的特定生长率[13]（SGR）、饵料系数（FCR）。SGR(%/d)=(ln末重-ln初重)/试验天数×100%(1)饵料系数=饵料摄入量/(末重-初重)(2)1.5数据统计与分析试验结果采用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析，差异显著时采用Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1饵料中天然虾青素含量对棘颊雀鲷生长性能及成活率的影响（见表2）由表2可知，对照组、A50组、A100组棘颊雀鲷的成活率均为100%，A150组和A200组成活率分别为91.67%和83.33%。两组死亡鱼的表现为鳍部、尾部受损，均因相互打斗而伤亡，与饵料中添加天然虾青素因素无关。试验结束，A50组、A100组、A150组和对照组棘颊雀鲷的末重差异不显著（P0.05），A200组末重最低，为8.01 g，显著低于A100组和A150组（P0.05）。A100组、A150组棘颊雀鲷的特定生长率均为0.100%/d，显著高于A200组和对照组（P0.05）；A100组、A150组棘颊雀鲷的饵料系数显著低于其他各组（P0.05）；A50组棘颊雀鲷的饵料系数显著低于A200组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.009.T002表2饵料中天然虾青素含量对棘颊雀鲷生长性能及成活率的影响组别成活率/%初重/g末重/g特定生长率/(%/d)饵料系数对照组100.00±0.007.98±1.328.49±1.15ab0.030±0.030b1.61±0.04abA50组100.00±0.007.98±1.328.78±1.80ab0.050±0.010ab1.57±0.04bA100组100.00±0.007.98±1.329.53±1.72a0.100±0.050a1.37±0.05cA150组91.67±11.797.98±1.329.44±1.18a0.100±0.040a1.33±0.04cA200组83.33±11.797.98±1.328.01±0.98b0.002±0.002b1.67±0.05a注：同列数据肩标小写字母不同表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2饵料中天然虾青素含量对棘颊雀鲷体色的影响2.2.1饵料中天然虾青素含量对棘颊雀鲷体色L*值的影响（见表3）由表3可知，饵料中添加天然虾青素的棘颊雀鲷体表L*值在前4 w逐渐降低，后4 w逐渐升高；第8 w时，鱼体呈现出较亮的体色；第6 w时，A150组的棘颊雀鲷体表亮度L*值显著高于A50和A200组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.009.T003表3饵料中天然虾青素含量对棘颊雀鲷体色L*值的影响组别0 w2 w4 w6 w8 w对照组24.18±2.0323.97±2.2323.60±2.0225.78±1.87ab33.79±3.43A50组24.18±2.0323.47±2.3522.62±2.0725.07±2.15b31.81±4.35A100组24.18±2.0323.33±2.2722.86±0.9326.19±1.46ab32.22±2.34A150组24.18±2.0323.42±1.6822.84±1.1326.93±1.90a33.36±3.83A200组24.18±2.0323.77±2.3722.90±2.0725.21±1.82b31.02±2.532.2.2饵料中天然虾青素含量对棘颊雀鲷体色a*值的影响（见表4）由表4可知，棘颊雀鲷体表a*值随着增色时间的延长呈逐渐增大的趋势。在增色第4 w，A150组和A200组棘颊雀鲷的体表a*值显著高于A50组和对照组（P0.05）；在增色第6 w和第8 w，A150组的棘颊雀鲷体表a*值均显著高于其他各组（P0.05），A100组和A200组棘颊雀鲷的体表a*值均显著高于A50组和对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.009.T004表4饵料中天然虾青素含量对棘颊雀鲷体色a*值的影响组别0 w2 w4 w6 w8 w对照组2.32±0.642.58±0.802.47±0.79c3.48±2.33c6.99±2.61cA50组2.32±0.642.60±0.722.90±1.18bc3.96±1.06c7.33±1.77cA100组2.32±0.642.78±0.803.72±1.09ab5.62±1.25b9.61±1.62bA150组2.32±0.643.02±0.734.51±1.19a7.56±1.60a12.02±2.72aA200组2.32±0.643.27±1.104.23±1.23a6.25±1.23b9.99±1.78b2.2.3饵料中天然虾青素含量对棘颊雀鲷体色b*值的影响（见表5）由表5可知，整个试验期内，b*值基本呈现整体升高趋势。在增色第6 w，A150组的b*值最高，显著高于其他各组（P0.05）；在增色第8 w，A150组的b*值显著高于A50组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.009.T005表5饵料中天然虾青素含量对棘颊雀鲷体色b*值的影响组别0 w2 w4 w6 w8 w对照组2.47±1.002.50±1.192.12±1.743.88±1.28b8.83±2.65abA50组2.47±1.002.43±1.614.10±2.283.87±1.42b7.29±1.92bA100组2.47±1.002.95±1.094.19±2.205.02±1.21b8.76±1.39abA150组2.47±1.003.37±1.163.52±2.416.27±1.66a9.94±2.84aA200组2.47±1.002.84±1.153.27±2.884.93±1.00b8.44±2.31ab3讨论3.1饵料中天然虾青素含量对棘颊雀鲷生长及成活率的影响虾青素对水产养殖动物具有促生长作用。研究表明，饵料中添加200~300 mg/kg虾青素可以明显提高七彩神仙鱼（Symphysodon haraldi）的增重率[14]；添加200 mg/kg虾青素能够提高卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）、眼斑星丽鱼（Astronotus ocellatus）的生长性能[15-16]；添加1 g/kg虾青素可以明显提高豹纹鳃棘鲈（Plectropomus leopardus）的增长率[17]；添加2 g/kg虾青素可以提高血鹦鹉鱼（Cichlasoma citrinellum×C. synspilum）的特定生长率[18]。但是，饵料中的虾青素超过适宜添加量会对生物体的生长发育产生抑制作用。饵料中添加500 mg/kg的天然虾青素（雨生红球藻提取物）[14]或300~400 mg/kg的人工合成虾青素[19]会明显降低七彩神仙鱼的增重率，添加4~11 g/kg的虾青素[18,20]明显降低血鹦鹉的增重率和特定生长率，饵料中添加6~12 g/kg虾青素可以明显降低斑马鱼（Danio rerio）的增重率和特定生长率[21]。本研究中，低浓度组虾青素的添加量（50~150 mg/kg）会使棘颊雀鲷的增重率略有增加，而高浓度组虾青素含量（200 mg/kg）会使棘颊雀鲷的增重率下降，与七彩神仙鱼、血鹦鹉、豹纹鳃棘鲈、斑马鱼、锦鲤（Cyprinus carpio L．）[22]的研究结果一致。研究表明，过多的虾青素会对水产动物的生长发育产生抑制作用，可能因为过量的虾青素导致鱼体代谢增强，将多余的营养物质排出体外，额外耗费鱼体体能[22]。虾青素本身对棘颊雀鲷的养殖成活率无影响，但棘颊雀鲷间存在打斗现象，故造成A150组、A200组有伤亡现象，与饵料中添加虾青素对眼斑双锯鱼（Amphiprion ocellaris）养殖的成活率影响的研究结果一致[23]。3.2饵料中天然虾青素含量对棘颊雀鲷体色的影响鱼类的体色主要由类胡萝卜素决定，而鱼类自身不能合成类胡萝卜素，只能从饵料中获取。虾青素是氧化型类胡萝卜素中非常重要的着色剂，着色效果佳，在水产动物增色中应用广泛。虾青素对观赏鱼增色情况见表6。研究表明，5 g/kg的雨生红球藻可以明显提高眼斑双锯鱼体表的红度a*值[23]；添加200~300 mg/kg的虾青素可以明显提高七彩神仙鱼体表红度值a*；添加100 mg/kg的虾青素可以提高金曼龙鱼（Trichogaster microlepis）、樱桃鲃（Barbus titteya）、弗氏拟雀鲷（Pseudochromis fridmani）、虹鳟鱼（Oncorhynchus mykiss）的体色[24-27]。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.009.T006表6虾青素对观赏鱼增色情况虾青素剂量试验动物增色时间/d增色效果文献来源150 mg/kg体质量为7.98 g的棘颊雀鲷（Premnas biaculeatus）56体色明显变红本研究5 g/kg以上全长2.4 cm的眼斑双锯（Amphiprion ocellaris）90鱼的体色加深Díaz-Jiménez等[23]100 mg/kg104日龄弗氏拟雀鲷（Pseudochromis fridmani）70鱼体色着色明显Jiang等[26]200~300 mg/kg体质量16.74 g七彩神仙鱼（Symphysodon haraldi）42鱼的体色加深王磊等[14]8 g/kg体质量4.19 g血鹦鹉（Cichlasomacitrinellum×Cichlasoma synsp ilum）54鱼的体色加深牟文燕等[20]100 mg/kg体质量为8.47 g金曼龙鱼（Trichogaster microlepis）15鱼体色着色明显李小兵等[24]100 mg/kg体质量为0.6 g樱桃鲃（Barbus titteya）60鱼的体色加深喻翔[25]100 mg/kg体质量为6.27 g的虹鳟（Oncorhynchus mykiss）42鱼着色明显Zhang等[27]400 mg/kg体质量为400.32 g红罗非鱼（red tilapia）60鱼着色明显公翠萍等[28]1 g/kg120 d的豹纹鳃棘鲈（Plectropomus leopardus）30鱼的体色彩更加艳丽陈超等[17]200 mg/kg体质量为25.6 g的眼斑星丽鱼（Astronotus ocellatus）50鱼的皮肤类胡萝卜素显著增加Alishahi等[16]1 g/kg体质量为5.8 g的卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）56鱼着色明显谢家俊[29]60 g/kg体质量为5.5 g的中国金鱼（Carassius auratus）60鱼着色明显陈晓明等[30]500~700 mg/kg体长11 cm的红白锦鲤（Cyprinus carpio haematopterus）56鱼着色明显赵子续等[31]72 mg/kg体质量为600 g的鲷鱼（Pagrus auratus）21鱼着色明显Booth等[32]红度a*值是影响棘颊雀鲷体色的最关键的指标。本试验中，测定不同增色周期棘颊雀鲷体表的三色值（L*、a*、b*），发现棘颊雀鲷体表红度a*值随增色时间的延长呈现逐渐增大的趋势；8 w后，A150组棘颊雀鲷体表红度a*值明显高于其他各组，说明添加适宜的虾青素可以促进棘颊雀鲷体色增艳。随着虾青素浓度逐渐增大，A200组利用虾青素的增色效率反而降低，与饵料中添加虾青素对眼斑双锯鱼[23]和红罗非鱼[28]（red tilapia）、血鹦鹉鱼[10]体色影响的研究结果一致，说明鱼类体色并非随着增色饵料中的虾青素含量的增加而一直加深，当虾青素添加量超过一定限度时，鱼体中沉淀的色素量和体色会随着虾青素添加量的增加而下降。因此，棘颊雀鲷增色饵料的虾青素适宜添加量为150 mg/kg，在实际养殖生产中，应根据饵料虾青素的最适添加量进行应用以提高虾青素的增色效率，节省增色和养殖成本。4结论饵料中添加天然虾青素可以使棘颊雀鲷呈现透红的体色，适宜添加量为150 mg/kg。