西藏草地退化严重，限制了畜牧业发展[1-5]。为促进西藏高寒地区畜牧业健康可持续发展，西藏多地先后引进具抗寒、耐旱、高产、生长快等优点的优质牧草，并取得了成功[6-8]。但是，西藏高寒地区对牧草的处理主要为晒制青干草，在调制青干草的过程中损失了牧草大部分营养物质和水分，降低了牧草的适口性和营养价值。青贮以能够提高青绿饲草的利用率和饲喂价值等特点在西藏地区得到初步的研究和应用[9-12]。青贮添加剂可有效提高青贮发酵成功率，防止饲料营养流失，提高青贮饲料适口性，能够有效缓解冬春饲料营养不足的问题[9]。王奇等[10]研究发现，青贮中添加酶和乳酸菌剂能够明显提高牧草的青贮发酵品质。赵庆杰等[11]研究发现，糖蜜和乳酸菌剂等添加剂可促进乳酸菌快速发酵。商振达等[12]研究发现，荞麦与玉米混合青贮可有效提高青贮饲料的发酵品质。但是，关于西藏不同海拔梯度牧草的青贮品质改善的研究较少。因此，本试验选取西藏3个不同海拔地区高产的青海444燕麦为材料，选择EM复合菌剂、甲酸、尿素、玉米粉作为青贮饲料添加剂，研究在不同海拔地区最有效的青贮饲料添加剂，为当地畜牧业生产发展提供参考。1材料与方法1.1试验材料分别在2020年8月25日、9月12日、9月21日刈割种植于西藏达孜区曲尼帕西藏草业科学院试验地（29°48′42.5″ N，91°36′35.8″ E，3 749 m）、墨竹工卡县扎西岗乡斯布牧场试验地（29°40′5.2″ N，91°48′5.5″ E，4 228 m）、那曲市草原站人工牧草试验基地（31°28′27.9″ N，92°4′26.3″ E，4 664 m）生育期为灌浆期的青海444燕麦。不同海拔地区燕麦营养成分见表1。由表1可知，斯布燕麦干物质（DM）含量最高，粗蛋白（CP）、酸性洗涤纤维（ADF）和中性洗涤纤维（NDF）含量最低；曲尼帕燕麦NDF含量最高；那曲燕麦DM含量最低，CP含量最高；斯布燕麦水溶性碳水化合物（WSC）含量最低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.015.T001表1不同海拔地区燕麦营养成分海拔地区DM/(g/kg FM)WSC/(%DM)CP/(%DM)ADF/(%DM)NDF/(%DM)曲尼帕351.81±15.477.07±0.249.10±0.1540.97±0.4170.27±1.70斯布371.27±3.836.99±0.157.35±0.2636.89±0.7759.35±1.32那曲316.37±9.947.07±0.219.28±0.1240.50±0.8760.55±1.861.2试验设计试验采用随机区组设计，3个海拔区分别设置5个试验组，分别为对照组（CK）、EM菌剂组、尿素组（0.4%）、甲酸组（0.4%）、玉米粉组（4%），每组3个重复，共制作45个试验青贮发酵罐。EM菌原种由乳酸菌、酵母菌、芽孢杆菌、细菌素、肽聚糖、维生素等组成（10 g菌剂与2 kg红糖和18 kg水配成原液，25 ℃发酵24 h，每100 g饲料加2 mL原液）。1.3青贮调制将收割的青海444燕麦除杂，进行田间萎蔫处理，自然晾晒4~8 h，直至燕麦含水量约65%~70%，切碎至1~3 cm。将同一海拔地区的青海444燕麦切碎，充分均匀混合，分别加入青贮添加剂（CK组为常规青贮，不做添加剂处理），装入已灭菌消毒的250 mL的青贮罐中，压实，密封，将制作好的青贮罐存放在该海拔试验地贮存60 d。1.4测定指标及方法1.4.1发酵品质青贮60 d，取出青贮饲料，分别称取20 g放入广口瓶中，加入180 mL去离子水，4 ℃冰箱中浸提24 h[12-13]，榨汁机榨汁1~2 min，上清液使用4层纱布和定性滤纸过滤，滤液保存于-20 ℃的冰箱中，用于测定pH值、乳酸、挥发性脂肪酸和氨态氮。乳酸、乙酸、丙酸和丁酸含量使用Agilent 1260高效液相色谱仪测定；氨态氮含量使用苯酚-次氯酸钠比色法测定[10-13]；青贮饲料过滤液pH值使用台式酸度离子计（HANNA pH211；意大利HANNA公司）测定。1.4.2营养成分剩余的青贮饲料平均分成3份，烘干称重，测定水分和干物质。烘干的青贮饲料样品粉碎、过筛、称重，测定干物质、粗蛋白、粗脂肪（EE）、水溶性碳水化合物、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量。采用烘干法测定青贮饲料中的干物质含量，称取一定量的青贮饲料样品于105 ℃烘箱中杀青2 h，65 ℃烘箱烘干至恒重，测定干物质含量；粗蛋白含量采用凯氏定氮法测定；粗脂肪含量采用索氏抽提法测定；中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量采用ANKOM2000i全自动纤维分析仪测定；水溶性碳水化合物含量采用蒽酮-硫酸比色法测定。1.4.3青贮发酵品质评价采用《青贮饲料质量评定标准（试行）》评分标准[14]（即有机酸和氨态氮评分法）和Kaiser评分法[15]两种方法评价燕麦青贮饲料的青贮发酵品质。1.5数据统计与分析采用Excel软件对数据进行整理和初步分析；采用SPSS 20.0进行单因素方差分析，采用Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准误”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同种类添加剂对燕麦青贮饲料营养成分的影响（见表2~表4）由表2可知，曲尼帕燕麦青贮中使用添加剂处理后各青贮组的营养成分发生了变化。甲酸组的DM、WSC含量显著高于其他处理组（P0.05）；EM菌剂处理组降低了青贮饲料中DM含量；尿素组和玉米粉组WSC含量显著高于对照组（P0.05）；玉米粉组的CP含量略高于其他处理组，其次是甲酸组，而EM菌剂组和尿素组的CP含量低于CK组；甲酸组的EE含量显著高于玉米粉组，且EE含量最高（P0.05）；EM菌剂组的ADF含量显著高于CK、甲酸、玉米粉处理组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.015.T002表2不同种类添加剂对曲尼帕燕麦青贮饲料营养成分的影响项目DM/(g/kg FM)WSC/(%DM)CP/(%DM)EE/(%DM)ADF/(%DM)NDF/(%DM)CK组276.74±4.87bc5.87±0.03c6.65±0.202.05±0.31ab35.50±4.05b54.03±2.20EM菌剂组245.95±18.19c6.18±0.16bc6.30±0.562.06±0.21ab43.31±1.70a56.97±2.98尿素组304.21±4.51b6.21±0.04b6.19±0.672.12±0.33ab38.08±0.93ab55.12±6.18甲酸组343.62±14.16a6.91±0.08a7.76±0.122.88±0.27a34.75±1.12b51.52±0.60玉米粉组308.48±6.01b6.45±0.12b8.11±1.651.75±0.15b32.04±1.73b50.58±1.56SEM9.700.100.380.141.321.40P值0.0010.0010.4110.1010.0420.656注：同列数据肩标字母不同表示差异显著（P0.05），字母相同或无字母表示不显著（P0.05）；下表同。由表3可知，斯布燕麦青贮试验中使用EM菌剂和尿素处理显著降低了青贮饲料DM含量（P0.05），且添加玉米粉处理提高了青贮饲料的DM含量；甲酸组和玉米粉组的WSC均显著高于其他处理组，且甲酸组WSC含量最高（P0.05）；尿素组的CP含量最高，甲酸组的CP含量最低；青贮中用添加剂处理后的EE含量均略高于CK组（除尿素组），其中甲酸组EE含量最高；尿素组的ADF和NDF含量最高，均高于CK组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.015.T003表3不同种类添加剂对斯布燕麦青贮饲料营养成分的影响项目DM/(g/kg FM)WSC/(%DM)CP/(%DM)EE/(%DM)ADF/(%DM)NDF/(%DM)CK组344.43±3.47a6.24±0.12b7.41±0.742.44±0.3634.30±0.5556.09±3.12EM菌剂组297.04±6.04b6.12±0.08b8.29±1.082.45±0.1331.68±2.6251.11±3.75尿素组304.77±16.60b6.14±0.03b9.45±1.472.34±0.2835.84±5.5757.76±3.39甲酸组325.00±8.10ab6.84±0.12a7.24±0.823.12±0.6734.91±0.6057.25±0.14玉米粉组354.19±12.41a6.76±0.16a8.29±0.502.85±0.4732.60±1.7451.71±3.69SEM7.080.090.430.181.161.40P值0.0130.0020.5460.6600.8400.446由表4可知，那曲燕麦青贮中，甲酸组的DM含量和WSC含量显著高于其他处理组（P0.05），EM菌剂组和尿素组的DM含量和WSC含量显著低于其他处理组（P0.05），玉米粉组的WSC含量显著低于CK组（P0.05），EM菌剂组和甲酸组中CP含量略低于CK组；各添加剂处理组中的EE和ADF含量均略低于CK组；甲酸组的NDF含量略高于其他处理组，其次为CK组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.015.T004表4不同种类添加剂对那曲燕麦青贮饲料营养成分的影响项目DM/(g/kg FM)WSC/(%DM)CP/(%DM)EE/(%DM)ADF/(%DM)NDF/(%DM)CK组320.23±2.85b6.23±0.13b10.91±0.31b5.55±0.4038.69±1.5353.42±1.47EM菌剂组284.68±5.35d5.64±0.02d10.85±0.10b5.33±0.9636.10±0.6449.02±0.62尿素组305.43±3.82c5.66±0.04d11.78±0.95b4.39±0.3534.48±0.9852.11±1.05甲酸组340.90±2.33a6.95±0.12a10.56±0.41b5.03±0.3336.06±3.1253.69±0.87玉米粉组322.19±3.70b5.95±0.03c14.47±0.86a5.24±0.3336.33±2.9649.92±2.64SEM5.210.130.450.230.870.76P值0.0010.0010.0070.6440.7290.1842.2不同种类添加剂对燕麦青贮饲料发酵品质的影响（见表5~表7）由表5可知，CK组、甲酸组和玉米粉组的pH值均达到4.2以下（pH值小于4.2为优质青贮饲料），且玉米粉组pH值最小；EM菌剂和尿素组的pH值均高于4.2，且尿素组pH值显著高于其他处理组（P0.05）。甲酸组的乳酸、乙酸、丁酸含量均显著低于其他处理组（P0.05），甲酸组的乳酸和氨态氮均未检出。EM菌剂组乳酸含量显著高于其他处理组（P0.05）。尿素组的丙酸含量和氨态氮/总氮显著高于其他处理组（P0.05），EM菌剂、甲酸和玉米粉组的丙酸含量和氨态氮/总氮均显著低于CK组（P0.05），其中甲酸组的数值均为最低。EM菌剂和尿素组的丁酸含量均显著高于CK对照组（P0.05），添加玉米粉未降低丁酸含量。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.015.T005表5不同种类添加剂对曲尼帕燕麦青贮饲料发酵品质的影响项目pH值乳酸/(g/kg DM)乙酸/(g/kg DM)丙酸/(g/kg DM)丁酸/(g/kg DM)氨态氮/总氮/(g/kg TN)CK组4.14±0.06b10.64±1.57b16.82±0.35a49.44±1.35b9.57±0.52b77.87±5.72bEM菌剂组4.27±0.04b16.03±2.64a20.19±3.11a10.91±2.20cd21.78±2.04a15.73±10.57c尿素组5.40±0.20a10.21±1.12b16.60±0.40a67.13±0.76a17.47±0.58a147.55±24.92a甲酸组4.14±0.07b0.00±0.00c6.70±0.34b5.87±1.23d1.90±1.04c0.00±0.00d玉米粉组4.12±0.03b9.79±0.78b20.98±2.50a15.39±3.95c11.22±3.66b15.97±2.80cSEM0.141.501.526.511.9715.43P值0.0010.0010.0020.0010.0010.001由表6可知，添加EM菌剂、甲酸和玉米粉均显著降低了斯布燕麦青贮饲料的pH值（P0.05），其中EM菌剂组、甲酸组pH均小于4.2，分别为3.97、4.09，达到优质饲料标准，而尿素组的pH值略高于CK对照组。甲酸组的乳酸、丁酸含量及氨态氮/总氮显著低于其他处理组（P0.05）。EM菌剂和尿素组的乳酸、乙酸含量均显著高于其他处理组，且尿素组的乙酸含量显著高于EM菌剂组。EM菌剂的丙酸含量显著低于CK组和玉米粉组（P0.05），而丁酸含量显著高于CK组（P0.05）。添加4种添加剂均显著降低了氨态氮/总氮（P0.05），甲酸组中含量最少。相比CK组，添加玉米粉后有机酸含量未发生显著性变化。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.015.T006表6不同种类添加剂对斯布燕麦青贮饲料发酵品质的影响项目pH值乳酸/(g/kg DM)乙酸/(g/kg DM)丙酸/(g/kg DM)丁酸/(g/kg DM)氨态氮/总氮/(g/kg TN)CK组4.42±0.08ab7.10±1.79b12.01±1.15c48.16±2.53a8.15±0.46b87.24±8.52aEM菌剂组3.97±0.11c13.57±0.64a21.44±3.17b22.30±7.95bc12.63±2.31a42.62±8.92b尿素组4.55±0.19a16.57±0.84a28.26±2.34a38.40±5.64ab11.31±0.19ab28.62±5.82b甲酸组4.09±0.10bc0.86±0.30c7.79±0.29c16.10±10.36c1.93±0.65c0.15±0.15c玉米粉组4.27±0.10abc8.03±1.13b12.69±0.57c48.22±1.85a9.07±0.60ab40.78±6.95bSEM0.071.512.104.311.087.95P值0.0410.0010.0010.0160.0010.001由表7可知，EM菌剂组的pH值显著低于CK组（P0.05），且pH值4.09达到优质饲料标准。尿素组的乳酸含量显著高于其他各组（P0.05），甲酸组、玉米粉组的乳酸含量显著低于其他各组（P0.05），且甲酸组乳酸含量最低。EM菌剂组、尿素组、玉米粉组的乙酸含量显著高于CK处理组，甲酸组乙酸含量显著低于CK处理组（P0.05）。4种添加剂组的丙酸含量均显著低于CK组（P0.05），玉米粉组最低。EM菌剂组、玉米粉组的丁酸含量显著高于其他处理组（P0.05），EM菌剂组丁酸含量显著高于玉米粉组（P0.05）。尿素组的氨态氮/总氮显著高于CK处理组（P0.05），而玉米粉组氨态氮/总氮显著低于CK处理组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.015.T007表7不同种类添加剂对那曲燕麦青贮饲料发酵品质的影响项目pH值乳酸/(g/kg DM)乙酸/(g/kg DM)丙酸/(g/kg DM)丁酸/(g/kg DM)氨态氮/总氮/(g/kg TN)CK组4.51±0.08a29.67±0.49b11.79±0.44c10.94±2.96a3.46±0.27c24.75±7.00bEM菌剂组4.09±0.02b29.40±1.33b38.96±0.62a5.29±0.12b31.24±1.06a10.73±2.50ab尿素组4.50±0.09a52.83±4.29a36.61±0.38a6.35±0.04b7.69±0.46c46.40±4.12a甲酸组4.34±0.12ab5.09±1.65d2.99±0.99d6.35±0.71b3.61±1.44c12.84±5.33ab玉米粉组4.25±0.06ab17.42±0.47c23.07±0.51b4.89±0.09b16.59±2.77b6.65±0.34cSEM0.054.313.750.782.864.20P值0.0220.0010.0010.0010.0010.0012.3燕麦青贮饲料发酵品质评价（见表8）由表8可知，曲尼帕燕麦青贮饲料中甲酸组的两种评分最高，明显高于其他处理组，青贮发酵品质评价等级分别为优和1级；玉米粉组的有机酸和氨态氮评分为71.5分，高于CK组，Kaiser评分等级与CK组处于同一水平；EM菌剂组和尿素组的两种评分均低于CK组。斯布燕麦青贮饲料中甲酸组的两种评分最高，且明显高于其他处理组；EM菌剂组和玉米粉组的有机酸和氨态氮评分高于CK组，Kaiser评分则处于同一级别；尿素组的两种评分均低于CK组。那曲燕麦青贮饲料中CK组的Kaiser评分与甲酸组相同，且高于其他处理组，有机酸和氨态氮评分高于其他处理组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.015.T008表8燕麦青贮饲料发酵品质评价地区组别有机酸和氨态氮评分法Kaiser评分法评分等级评分等级曲尼帕CK组68.5良703EM菌剂组66.0良304尿素组45.5可404甲酸组81.5优1001玉米粉组71.5良603斯布CK组69.0良703EM菌剂组70.5良603尿素组68.5良603甲酸组81.5优1001玉米粉组76.0良703那曲CK组84.5优901EM菌剂组57.0可05尿素组75.5良504甲酸组80.0优901玉米粉组67.5良4043讨论3.1不同种类添加剂对曲尼帕燕麦青贮品质的影响甲酸为发酵抑制剂，青贮初期能够快速降低饲料的pH值，抑制植物有氧呼吸和有害微生物的繁殖，提高饲料的营养和青贮品质[16]。本试验中，甲酸是最适宜改善曲尼帕地区青贮品质的饲料添加剂，其次为玉米粉。在曲尼帕地区，甲酸处理组的DM和WSC含量明显提高，CP和EE含量也高于对照组。张晴晴等[17]研究发现，添加有机酸可以明显提高DM、CP和WSC含量，降低ADF含量。本试验中，甲酸处理组燕麦青贮的发酵品质明显提高，与陆永祥等[18]研究结果相同。刘庭玉等[19]研究发现，随着甲酸含量的增加，氨态氮/总氮显著降低。本研究发现，甲酸处理组饲料的pH值为4.14，且有机酸的含量和氨态氮/总氮明显低于其他处理组。郭婷[20]研究发现，添加高浓度甲酸将明显降低饲料乳酸和乙酸含量。因此，添加高浓度甲酸可能是导致本研究中乳酸和乙酸显著低于其他组，乳酸含量接近零的原因。本试验中，玉米粉组的WSC含量明显高于对照组，且CP含量高于其他处理组，玉米粉属于糖类营养性添加剂，能够增加青贮饲料的WSC和CP含量。添加尿素能够提高饲料中氨态氮的含量[21]。本试验中，尿素组的氨态氮/总氮明显高于其他处理组，氨态氮/总氮比值高也是造成尿素组评分低的原因，与覃方锉等[22]的研究相似。本研究中，添加EM菌剂未提高燕麦青贮的营养品质，添加EM菌剂组的乳酸含量明显高于其他处理组，丙酸含量和氨态氮/总氮得到明显抑制，但丁酸含量较高。葛剑等[23]研究发现，添加EM菌剂可快速消耗原料中的WSC，提高乳酸/乙酸比值，降低挥发性脂肪酸，提高青贮品质。但在本研究中，添加EM菌剂未能获得良好的发酵效果，可能与环境温度低、昼夜温差大有关，传统的商品化微生物菌剂在青藏高原的高寒地区不能发挥较好的促进作用。因此，研发并推广适合西藏高海拔寒冷环境的耐低温乳酸菌，是青藏高原青贮饲料发展的关键[24]。3.2不同种类添加剂对斯布燕麦青贮品质的影响丁酸含量直接决定饲料质量[25]。本研究发现，甲酸是最适宜改善斯布地区青贮品质的饲料添加剂，玉米粉次之，且EM菌剂比CK处理组较好；甲酸和玉米粉基于有机酸和氨态氮的评分较接近，分别为81.5和76，基于Kaiser评价标准的差异较大，甲酸是1级，玉米粉是3级。原因是Kaiser评价标准主要以乙酸和丁酸为标准。本试验中，玉米粉组的DM和CP含量较甲酸组高，降解率更高，与朱九刚等[26]在燕麦中添加糖蜜和丙酸的研究结果相似。EM菌剂组虽有最低的pH值、较高的CP、乳酸含量，但EM菌剂组的丁酸含量显著高于其他处理组，降低了饲料的青贮品质。因此，青贮饲料不能仅仅追求低的pH值，而忽略饲料的营养品质。对不同青贮饲料品种和不同海拔地区的青贮饲料应有不同的评价标准，特别是对青藏高原高寒地区的饲料青贮标准应进一步探究[27]。3.3不同种类添加剂对那曲燕麦青贮品质的影响本研究中未发现适宜那曲改善燕麦青贮饲料添加剂，4种添加剂效果均未到达改善效果。根据有机酸和氨态氮评价标准，得分为CK组甲酸组尿素组玉米粉组EM菌剂组。根据Kaiser评价标准，CK组与甲酸组均为1级。添加甲酸有效保留了饲料中的DM和WSC含量，但CP含量略低于CK组，且乳酸含量明显低于CK组。因此，添加甲酸未达到明显改善青贮饲料的效果。而且甲酸气味较刺激，不利于存储和使用，有研究建议可使用有机酸盐替代甲酸[28]。添加尿素、玉米粉、EM菌剂均未改善改善青贮效果，可能与那曲独特的高寒、含氧量低、昼夜温差大等有关。研究高寒地区耐低温乳酸菌的分离、筛选与优化培养，确定不同地区乳酸菌的最佳发酵条件，可有效提高饲草青贮的品质和成功率[24]。因此，研发那曲市耐低温乳酸菌是提高那曲市饲草青贮品质的有效途径。4结论青贮中添加添加剂可有效改善青贮发酵品质，能够最大限度地保留青绿饲料的营养成分。改善曲尼帕和斯布燕麦青贮品质的最佳添加剂为甲酸，但研究中未发现适宜那曲的改善燕麦青贮饲料添加剂。