羊肉因具有高蛋白、低脂肪、瘦肉多、肉质鲜嫩、易消化及胆固醇含量低等特点，深受消费者的喜爱[1]。随着青海天然草场退化以及生态畜牧业有序推进，藏羊的饲养方式逐步由传统放牧转为舍饲模式[2]。然而，在舍饲条件下，因动物缺乏运动量，引发的肉品质降低问题亟须解决[3]。肌纤维类型组成及其转化能直接影响畜禽肌肉的生长与代谢[4]。研究表明，随着饲粮粗蛋白水平从16%下降至13%，猪背最长肌和腰大肌Ⅱa型肌纤维以及股二头肌Ⅰ型肌纤维的比例显著提高[5]。试验日粮中蛋白质与能量水平能够显著影响蒙古羔羊肌纤维的直径、面积和密度[6]。郭秋平等[7]研究发现，肌纤维类型的转化受多种信号通路及调控因子的影响，其中营养因素对肌纤维的转化有着不同程度的调节作用。由此可知，日粮组成能够显著影响肌纤维特性，而肌纤维的类型组成又可直接决定肌肉的品质。所以，研究肌纤维类型及其转化的调节机制是改善羊肉品质的重要途径。藏羊是我国三大原始绵羊品种之一[8]，主要分布于青海、甘肃、西藏、四川以及云南等地区[9]，除了具备对高原极端环境独特的生理及遗传适应机制外[10]，还具有产肉性能较好、肉质优良、营养全面、维生素含量丰富等优点[11]。然而，现阶段有关藏羊肌纤维组织学特性营养调控的研究相对较少。因此，本试验研究不同精粗比日粮对育肥藏羊肌纤维直径、横截面积和密度的影响，以期为高寒牧区养羊业的合理饲养及开发更多优质羊肉产品提供参考。1材料与方法1.1试验设计试验选取发育良好、体重（22.00±0.38） kg的3月龄断奶藏母羊90只（青海省海南州香咔梅朵牧业有限公司），随机分为3个处理组，每组5个重复，每个重复6只。各组藏母羊分别饲喂精粗比为50∶50、60∶40和70∶30的日粮。试验预试期为10 d，正式试验期为90 d。根据青海藏羊饲养实际，结合其营养需要特点，参照《肉羊饲养标准》[12]（NY/T 816—2004）进行日粮的配制。精料组成及营养水平见表1。粗饲料由燕麦青干草与燕麦青贮组成（按干物质各占1/2计算）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.002.T001表1精料组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米65.20消化能/(MJ/kg)13.00豆粕5.00粗蛋白质/%16.40菜籽粕16.00粗脂肪/%3.81棉粕7.00粗纤维/%4.61食盐0.80钙/%0.57石粉0.80有效磷/%0.10小苏打0.10赖氨酸/%0.71磷酸氢钙0.50蛋氨酸/%0.27预混料4.60注：1.预混料购自青海省共和县香咔梅朵饲料厂。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.2饲养管理试验期间，母羊每日饲喂2次的混合精料与粗饲料（8：00和17：30），自由采食、自由饮水，定时清扫圈舍，保证圈舍清洁。按常规方法消毒、健胃和驱虫等。1.3样品采集试验结束时，每组随机挑选3只试验羊禁食24 h、禁水12 h，颈动脉放血致死，迅速沿着肌纤维方向取1 cm×1 cm×1.5 cm的背最长肌、臂三头肌和股二头肌组织块置于4%多聚甲醛磷酸缓冲液（0.1 mol/L，pH值7.4）固定24 h。1.4肌肉组织学特性研究1.4.1冷冻切片制作将固定好的肉样修剪成大小适宜的组织块，使用自来水冲洗约30 min、按以下程序制作切片：由低到高浓度酒精脱水，OCT包埋，-25 ℃速冻后切片（厚度约7 μm），恒温箱烤片，HE染色，中性树胶封片。1.4.2肌纤维组织形态参数计算使用奥林巴斯BX53显微镜在20×10倍下观察肌肉组织切片，每个样本随机选取5个区域，观察的肌纤维不少于500根。采用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件进行肌纤维直径、横截面积和密度测量。肌纤维直径：先测出肌纤维横断面上最长2点间距离作为长径，再经过长径中点计算垂直于长径的距离作为短径，多次测定取其平均值[13]。肌纤维横截面积：直接测量并记录肌纤维的横截面积，多次测量求平均值[14]。肌纤维密度：测定每个视野的面积，统计每个视野内肌纤维的根数，换算成每mm2的根数，作为被测样本的肌纤维密度[15]。1.5数据统计与分析数据采用Excel 2010软件进行初步计算，使用SPSS 20.0软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），Duncan's法进行多重比较，试验结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1不同精粗比日粮对藏母羊背最长肌组织形态学的影响（见表2、图1）由表2可知，70∶30组藏母羊背最长肌肌纤维直径显著高于50∶50组（P0.05），50∶50组藏母羊背最长肌肌纤维密度显著高于70∶30组（P0.05），70∶30组藏母羊背最长肌肌纤维横截面积显著高于60∶40组和50∶50组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.002.T002表2不同精粗比日粮对藏母羊背最长肌组织形态学的影响项目肌纤维直径/μm肌纤维横截面积/μm2肌纤维密度/(根/mm2)P值0.0310.0190.02370∶30组34.21±2.32a1 137.06±142.19a603.41±170.47b60∶40组32.92±3.93ab1 000.87±207.21b658.40±151.80ab50∶50组30.81±2.57b896.30±183.65c712.15±87.58a注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。由图1可知，70∶30组藏母羊背最长肌肌纤维的直径、横截面积大于60∶40组和50∶50组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.002.F001图1不同精粗比日粮条件下藏母羊背最长肌的冷冻切片（200×）2.2不同精粗比日粮对藏母羊臂三头肌组织形态学的影响（见表3、图2）由表3可知，50∶50组藏母羊臂三头肌肌纤维直径、横截面积显著低于70∶30组与60∶40组（P0.05），50∶50组藏母羊臂三头肌肌纤维密度则显著高于70∶30组与60∶40组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.002.T003表3不同精粗比日粮对藏母羊臂三头肌组织形态学的影响项目肌纤维直径/μm肌纤维横截面积/μm2肌纤维密度/(根/mm2)P值0.0360.0420.01570∶30组33.63±3.11a1 091.15±215.21a572.45±94.31c60∶40组33.26±3.83a1 036.12±214.05a620.18±61.95b50∶50组30.17±2.14b944.93±146.82b753.08±173.34a由图2可知，50∶50组藏母羊臂三头肌肌纤维的直径、横截面积小于60∶40组和70∶30组。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.002.F002图2不同精粗比日粮条件下藏母羊臂三头肌的冷冻切片（200×）2.3不同精粗比日粮对藏母羊股二头肌组织形态学的影响（见表4、图3）由表4可知，70∶30组与60∶40组藏母羊股二头肌肌纤维直径显著高于50∶50组（P0.05）；60∶40组与50∶50组藏母羊股二头肌肌纤维密度显著高于70∶30组（P0.05）；50∶50组藏母羊股二头肌肌纤维横截面积显著低于70∶30组与60∶40组（P0.05），其中70∶30组与60∶40组存在显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.002.T004表4不同精粗比日粮对藏母羊股二头肌组织形态学的影响项目肌纤维直径/μm肌纤维横截面积/μm2肌纤维密度/(根/mm2)P值0.0400.0180.03270∶30组34.33±3.21a1 044.69±242.48a568.79±239.76b60∶40组33.64±1.96a923.15±306.81b655.38±144.70a50∶50组30.06±4.64b826.88±120.21c689.97±72.82a由图3可知，随着日粮精粗比的提高，肌纤维的直径、横截面积也随之增大。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.20.002.F003图3不同精粗比日粮条件下藏母羊股二头肌的冷冻切片（200×）3讨论随着现代分子生物技术的快速发展，有关肌纤维类型分布及其转化机制的研究将不断完善深入。肌纤维组织学特性（肌纤维直径、横截面积和密度等）与肌肉品质，特别是食用品质（风味、多汁性和嫩度等）性状紧密相关[16]。因此，进一步开展日粮营养需要量的研究对于改善藏羊肌肉品质具有重要的意义。肌纤维又称肌细胞，是构成骨骼肌的基本结构单位[17]。动物出生后，肌纤维的数目不变[18]，但肌纤维类型易受发育阶段、环境状态、营养状况等因素的影响[19]。王立辛等[20]研究发现，母猪日粮蛋白水平能够显著影响仔猪肌纤维直径。Pond等[21]试验表明，羔羊的肌纤维密度随日粮蛋白水平升高而降低。张勇等[22]同样证实，提高日粮粗蛋白水平可使育肥猪的肌纤维直径和横截面积提高，降低肌纤维密度。本试验结果表明，藏母羊肌纤维直径、横截面积随着日粮精粗比的提高而增大，肌纤维密度则下降。研究表明，在一定条件下，肌纤维直径、横截面积与精粗比呈正相关，而肌纤维密度与精粗比呈负相关。本试验中，藏母羊背最长肌、臂三头肌和股二头肌的肌纤维组织学特性存在一定差异，原因可能是提高日粮精粗比促进了机体内蛋白质的沉积，造成不同部位肌肉中肌纤维体积增大（直径、横截面积），肌肉间结缔组织与脂肪组织的含量随之增加，肌纤维密度下降，继而促进肌纤维发育增生，与王玉琴等[23]、赵改名等[24]研究结果一致。近年来，通过环境调节、营养调控及遗传育种等手段使得藏羊生长发育速度有了大幅上升，但也在一定程度上影响了肌肉品质。如何寻找两者之间的平衡点是团队未来研究的重要方向。4结论本试验条件下，日粮精粗比能够对育成期藏母羊不同部位肌肉中肌纤维直径、横截面积和密度产生明显影响，采用精粗比为50∶50的日粮舍饲藏羊，其肉质较佳。