随着禁抗的实施，市场上各种替抗产品应运而生。结合欧洲的替抗经验与国内的现行实践可知，替抗产品中的酸化剂对动物肠道健康非常重要，效果较稳定，且性价比高[1]。酸化剂可酸化饲料，降低饲料系酸力，改善饲料适口性，提高动物采食量。酸化剂可补充胃酸不足，能够提高饲料消化利用率，调节微生态平衡，特别是幼龄动物阶段显得尤为重要[2-4]。有研究表明，酸化剂可抑制饲料贮存过程中微生物的生长，防止畜禽摄入有害微生物，降低影响畜禽健康的风险[1]；饲料中添加酸化剂也可抑制霉菌生长[5]。目前有关酸化剂包被与否对于饲料中细菌和微生物的研究较少。因此，本试验通过菌落法研究包被与非包被酸化剂对饲料中细菌及霉菌数量的影响，为实际生产中酸化剂的选择提供参考。1材料与方法1.1试验设计采用2×2因子完全随机试验设计，共4个处理组，每组3个重复。混入酸化剂前，分别检测母猪料、玉米和鱼粉中的细菌总数、霉菌总数。按0.5%比例混入包被与非包被酸化剂，室温贮存4 d，检测细菌、霉菌总数。按水料比70∶30加入蒸馏水，室温放置4 h，检测水料混合物中的细菌、霉菌总数。1.2试验材料妊娠母猪全价料（购自市场）、玉米和鱼粉混合物（玉米80%+鱼粉20%，购自市场）。包被与非包被酸化剂，均购自成都大帝汉克生物科技有限公司。1.3测定指标及方法饲料中细菌、霉菌总数测定参考GB/T 13093—2006。称取试样10 g，加入含有90 mL稀释液的灭菌三角烧瓶内（瓶内预先加入适当数量的玻璃珠）。吸取经充分振摇制得的1∶10稀释液1 mL，沿管壁注入含有9 mL稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇混匀制成1∶100稀释液。按上述操作顺序，做10倍递增稀释。根据饲料卫生标准要求，选择3个适宜稀释度做10倍递增稀释，移1 mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做2个平皿。将45 ℃水浴保温的平板计数用培养基注入平皿约15 mL，混匀。稀释试样至倾注培养基时间不超过15 min。琼脂凝固后，倒置平皿，37 ℃培养72 h，计数平板内菌落数目。2结果与分析2.1饲料中细菌及霉菌总数（见表1）由表1可知，正常情况下，未添加酸化剂的母猪料和玉米鱼粉混合物中均含有不同程度的细菌和霉菌。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.12.006.T001表1饲料中细菌及霉菌总数Tab.1Bacterial and mold amount in feed稀释度样品细菌总数霉菌总数Log10细菌Log10霉菌10-5母猪料9136.965.48玉米和鱼粉混合物4316.635.0010-6母猪料1117.046.00玉米和鱼粉混合物906.95—10-7母猪料617.787.00玉米和鱼粉混合物507.70—注 ：—表示未检出；下表同。2.2包被酸化剂与非包被酸化剂对饲料贮存后细菌数量及霉菌数量的影响（见表2）由表2可知，饲料在正常贮存条件下，包被酸化剂与非包被酸化剂对饲料细菌总数以及霉菌总数的影响无明显差异。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.12.006.T002表2包被酸化剂与非包被酸化剂对饲料贮存后细菌及霉菌数量的影响Tab.2Effect of coated and uncoated acidifier on bacterial and mold amount in storage feed稀释度样品细菌总数霉菌总数Log10细菌Log10霉菌包被非包被包被非包被包被非包被包被非包被10-5母猪料7979036.906.90—5.48玉米和鱼粉混合物58205.705.905.30—10-6母猪料1114117.047.156.006.00玉米和鱼粉混合物54516.706.606.706.0010-7母猪料57127.707.857.007.30玉米和鱼粉混合物33027.487.48—7.302.3包被酸化剂与非包被酸化剂对水料混合物细菌及霉菌数量的影响（见表3）由表3可知，包被酸化剂对水料混合物中的细菌总数无影响，但包被处理降低了酸化剂对水料混合物中霉菌的抑制能力。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.12.006.T003表3包被酸化剂与非包被酸化剂对水料混合物细菌及霉菌数量的影响Tab.3Effect of coated and uncoated acidifier on bacterial and mold amount in water mixed feed稀释度样品细菌总数霉菌总数包被1包被2包被3非包被1非包被2非包被3包被1包被2包被3非包被1非包被2非包被310-5母猪料202626263024542020玉米和鱼粉混合物16121419231923212010-6母猪料182016151015010010玉米和鱼粉混合物191519178853321210-7母猪料161716201916120000玉米和鱼粉混合物14141211894321103讨论目前，包被的酸化剂已商品化，广泛应用于畜禽饲料生产中，尤其是猪料和禽料。对比包被与非包被的酸化剂，包被酸化剂效果更好[1]。有研究表明，包被的酸化剂可提高生物活性，促进上皮细胞增殖[6]。酸化剂的使用效果受多种因素影响，包括其化学状态（酸形式、盐形式，包被或非包被）、酸的pK值、分子质量、使用剂量、动物品种和生长阶段等[1]。抗坏血酸和壳聚糖混合物通过抑制假种皮上细菌和霉菌的生长，延长石榴假种皮的保质期[7]。水产青贮料中加入酸化剂，可有效缓解细菌感染的影响，预防疫病发生，提高存活率[8]。Vazquez等[9]研究发现，与菌素产生的抑菌效果相比，乳酸菌产生的乳酸和乙酸的抑菌贡献更大。本试验发现，包被处理可降低酸化剂在体外对水料混合物中霉菌的抑制能力，可能是由不同的酸化剂种类和含量导致。目前主要认为酸化剂抑菌通过2个路径，其一为通过水溶液中解离的氢离子，降低有害微生物生存环境的pH值，抑制有害微生物的生长[1,10-12]。本试验结果表明，饲料正常贮存条件下，酸化剂包被与否对饲料细菌总数及霉菌总数的影响无差异，可能是由于无合适的水环境解离氢离子，从而发挥抑菌作用。另一个抑菌的路径为小分子的有机酸可透过病原菌细胞壁，进入细胞内解离氢离子，病原菌因极力排除氢离子消耗ATP耗能而死。酸根离子还能够干扰细菌DNA和RNA的合成，破坏病原菌细胞膜的完整性，达到抑菌杀菌的作用[1,10-12]。本试验结果表明，包被处理对水料混合物中的细菌总数无影响，但包被处理降低了酸化剂对水料混合物中霉菌的抑制能力。有研究表明，饲料中添加0.25%~1.00%的酸化剂可通过降低饲料pH值防止饲料霉变[13]。甲酸、丙酸和羟基甲硫基丁酸均具有广谱抗菌性，可抑制霉菌生长[14-15]。上述结果与本试验结果不同，原因可能是体外环境中酸化剂种类和含量不同。4结论包被处理可降低酸化剂在体外对水料混合物中霉菌的抑制能力，有关体内包被酸化剂的效果的研究仍需探索。XX.XXXX/j.issn.1672-9692.2021.12.006.F001