随着生活水平的提高，人们对肉品质的要求越来越高[1]。因此，如何提供数量多、品质好的畜禽产品是当前畜牧业亟须解决的问题。通过营养调控提高畜禽的抗氧化能力，改善肉品质成为目前研究的热点[2]。总抗氧化能力、丙二醛含量以及超氧化物歧化酶、过氧化氢酶及谷胱甘肽酶活性是机体抗氧化水平主要评价指标[3]。机体抗氧化能力降低，会产生大量的氧自由基、过氧化物等有害物质，进而损伤生物膜[4]。生物膜作为机体的第一道防线，一旦遭到破坏，会使细胞的结构、功能受到损害，导致水分丧失，肉色变差。肌红蛋白的含量能够直接影响肉色[5]。在低氧条件下，肌红蛋白中的Fe2+转为Fe3+形成高铁肌红蛋白，反映肌肉氧化程度[6]。肉色由脱氧肌红蛋白、氧合肌红蛋白及高铁肌红蛋白三者的相对含量决定[7]。因此，肉品质与其抗氧化能力和肌红蛋白相关性有一定的联系。藏羊是青海省优势畜种，饲养藏羊能够使当地农牧民脱贫增收[8]，实现生长期藏羊合理的营养水平调节对推动青海绵羊产业的发展具有重要意义。当前有关饲粮精料水平对藏羊肌肉抗氧化性能和肌红蛋白含量影响的报道较少。因此，本试验选取高海拔地区的藏羊为研究对象，探讨不同精料水平饲粮对藏羊背最长肌抗氧化性能以及肌红蛋白含量的影响，以期为藏羊选择合适的精粗比饲粮提供参考。1材料与方法1.1试验材料试验所用藏母羊由青海省海南州香咔梅朵牧业有限公司提供。总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛、羟自由基试剂盒均购自南京建成生物工程研究。磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和氯化钠均为分析纯，购自青海西宁拜亚博生物有限公司。1.2仪器设备UV-2600 Plus紫外可见光分光光度计（日本岛津公司）、Varioskan LUX多功能酶标仪（中国赛默飞世尔科技有限公司）、5430 R小型高速冷冻式离心机（北京宏达恒业科技有限公司）、ME204E梅特勒电子天平（上海善可精密仪器有限公司）。1.3试验设计选取150只体况良好、体重（22.00±0.49）kg的3月龄藏母羊，随机分为5组，分别为70%组（精粗比70∶30）、60%组（精粗比60∶40）、50%组（精粗比50∶50）、40%组（精粗比40∶60）、30%组（精粗比30∶70）。预试期10 d，正式试验期90 d。饲粮参考NY/T 816—2004《肉羊饲养标准》配制。精料组成及营养水平见表1。粗饲料由燕麦青干草和燕麦青贮组成（干物质各占1/2计）。试验期间每天将精料与粗饲料搅拌混匀，8：00和17：30各饲喂1次，自由采食和饮水，其他饲养管理按照养殖场的规定执行。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.21.001.T001表1精料组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米65.20消化能/(MJ/kg)13.00豆粕5.00粗蛋白质/%16.40菜籽粕16.00粗脂肪/%3.81棉粕7.00粗纤维/%4.61食盐0.80钙/%0.57石粉0.80有效磷/%0.10小苏打0.10赖氨酸/%0.71磷酸氢钙0.50蛋氨酸/%0.27预混料4.60注：1.预混料购自青海省共和县香咔梅朵饲料厂。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.4测定指标及方法1.4.1样品采集和处理试验结束最后1 d，从每组随机选取3只接近平均体重的试验羊（禁食24 h、禁水12 h）屠宰，选取左侧胴体背最长肌，去除残血、脂肪和结缔组织等，置于液氮中，带回实验室进行肉质分析。1.4.2肌红蛋白含量肌红蛋白（Mb）含量的测定参照Krzywicki[9]的方法。取待测5 g背最长肌，加入25 mL浓度为0.04 mol/L、pH值6.8的磷酸缓冲液，室温下用匀浆器10 000 r/min均质25 s。均质液置于冰水浴中，静置1 h，4 ℃、3 500 r/min离心20 min，过滤，采用紫外-可见分光光度计分别在525、545、565和572 nm波长处测量其吸光度。计算Mb浓度、脱氧肌红蛋白（DeoMb）、氧合肌红蛋白（MbO2）与高铁肌红蛋白（MetMb）相对含量。肌红蛋白浓度/(mmol/L)=-0.166A572 nm＋0.086A565 nm＋0.088A545 nm＋0.099A525 nm (1)脱氧肌红蛋白相对含量=(0.369R1＋1.140R2＋0.941R3＋0.015)×100%(2)氧合肌红蛋白相对含量=(0.882R1-1.267R2＋0.809R3-0.361)×100%(3)高铁肌红蛋白相对含量=(-2.514R1＋0.777R2＋0.800R3＋1.098)×100%(4)式中：R1、R2、R3分别为吸光度比值A572 nm/A525 nm、A565 nm/A525 nm、A545 nm/A525 nm。1.4.3抗氧化指标10%匀浆液制备：取待测样品用预冷生理盐水按1∶9（质量体积比）匀浆，充分混匀，3 500 r/min离心20 min，取上清液，-20 ℃冰箱保存，备测。采用ELISA试剂盒检测肌肉中过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性，总抗氧化能力，丙二醛、羟自由基（·OH）含量，具体操作方法参考试剂盒说明书进行。1.5数据统计与分析采用Excel 2010进行初步整理，使用SPSS 21.0软件进行单因素方差分析，采用Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1饲粮精料水平对藏母羊肌肉肌红蛋白含量的影响（见表2）由表2可知，60%组和50%组藏母羊肌红蛋白浓度显著高于40%组与30%组（P0.05），60%组、50%组和40%组藏母羊氧合肌红蛋白含量显著高于70%组（P0.05），60%组和50%组藏母羊脱氧肌红蛋白含量显著低于40%组和30%组（P0.05），70%组、40%组和30%组藏母羊高铁肌红蛋白含量显著高于60%组和50%组（P0.05）。由此可知，不同精料水平饲粮对育成藏母羊肌红蛋白相对含量具有明显的影响。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.21.001.T002表2饲粮精料水平对藏母羊肌肉肌红蛋白含量的影响组别肌红蛋白/(mmol/L)氧合肌红蛋白/%脱氧肌红蛋白/%高铁肌红蛋白/%70%组0.071±0.009ab30.334±1.452b30.285±2.201ab19.713±2.733a60%组0.085±0.130a42.501±3.025a26.351±4.496b9.667±0.524b50%组0.090±0.021a41.097±2.178a27.502±5.385b10.693±2.432b40%组0.052±0.010b40.860±3.152a34.024±4.592a14.327±4.043a30%组0.050±0.060b36.067±4.365ab34.217±5.776a15.095±1.784a注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2饲粮精料水平对藏母羊肌肉抗氧化性能的影响（见表3）由表3可知，60%组和50%组藏母羊肌肉超氧化物歧化酶活性显著高于其他3组（P0.05），60%组藏母羊肌肉谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于70%组、40%组和30%组（P0.05），70%组、40%组和30%组藏母羊肌肉过氧化氢酶活性显著低于60%组和50%组（P0.05），60%组藏母羊肌肉总抗氧化能力显著高于其他4组（P0.05），60%组和50%组藏母羊肌肉丙二醛含量显著低于30%组（P0.05）。由此可知，不同精料水平日粮对育成藏母羊肌肉总抗氧化能力、丙二醛含量影响较大，但对羟自由基含量影响较小。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.21.001.T003表3饲粮精料水平对藏母羊肌肉抗氧化性能的影响组别超氧化物歧化酶/(U/mL)谷胱甘肽过氧化物酶/(U/mL)过氧化氢酶/(U/mL)总抗氧化能力/(U/mL)丙二醛/(μmoL/L)羟自由基/(ng/L)70%组6.180±0.926b124.958±15.231b1.642±0.793c2.623±0.361b5.576±0.254ab287.541±24.98460%组9.113±0.485a199.780±28.794a2.614±0.523a5.730±0.042a4.425±0.143b251.635±16.72750%组9.716±0.913a179.906±17.944ab2.913±0.601a3.202±0.064b4.506±0.432b263.884±15.29540%组6.402±0.348b136.174±34.156b2.083±0.102b3.061±0.225b6.077±0.975ab277.514±19.79330%组5.205±0.861b118.783±22.742b1.677±0.269bc2.596±0.118b6.753±0.174a272.284±25.5363讨论3.1饲粮精料水平对藏母羊肌肉肌红蛋白含量的影响肉色是评价肉质最直接有效的方法[10]，颜色鲜红的肌肉品质较好。肌肉主要呈色物质是肌红蛋白、血红蛋白以及细胞色素C[11]，其中肌红蛋白含量对维持肉色起决定作用[12]。肌红蛋白主要有3种氧化还原态，即紫红色的脱氧肌红蛋白、鲜红色的氧合肌红蛋白和褐色的高铁肌红蛋白[13]。肉色的稳定性与肌肉氧气消耗率有一定关系[14]。机体耗氧量增加可加快氧合肌红蛋白脱氧形成脱氧肌红蛋白，而脱氧肌红蛋白更易被氧化成高铁肌红蛋白，进而缩短肉产品货架期[15]。目前，肌肉变色主要是由于鲜红色的氧合肌红蛋白自动氧化转变为暗褐色的高铁肌红蛋白所致[16]。陈骋[17]研究表明，牦牛为适应低氧高寒环境，肉中肌红蛋白的含量高于平原地区的牛，肌红蛋白含量越高肉色越深。辛建增等[18]研究发现，甘油醛-3-磷酸在甘油醛-3-磷酸脱氢酶催化下生成还原型辅酶Ⅰ，直接用于还原高铁肌红蛋白，延缓高铁肌红蛋白的累积，维持肉色的稳定性。本试验发现，饲粮精料水平在50%~60%之间，肌红蛋白浓度、氧合肌红蛋白含量高于其他3组，而脱氧肌红蛋白和高铁肌红蛋白含量低于其他3组，表明饲粮精料水平在50%~60%之间更有利于提高藏羊肌肉中肌红蛋白相关的含量。因此，饲粮中添加适量的精料补充料可减缓脂质氧化的发生，稳定肌红蛋白相关含量，进而改善羊肉品质。3.2饲粮精料水平对藏母羊肌肉抗氧化性能的影响自由基广泛存在于机体新陈代谢过程中，自由基的产生与清除处于动态平衡状态[19]。当这种平衡被打破，机体通过脂质过氧化反应产生不良气味，进而降低肌肉品质[20]。肌肉的抗氧化能力可有效抑制自由基的产生与转移[21]，防止肌肉的食用品质以及营养价值降低，从而提高肉质，延长肉制品的保存时间。因此，机体抗氧化能力与肉品质存在密切的联系。黄金玉等[22]指出，肌肉的氧化稳定性不仅与其肉质紧密相关，还能够反映动物某一生长时期抵抗疾病的能力。本课题组以绵羊为研究对象，发现不同非纤维性碳水化合物/中性洗涤纤维水平饲粮不仅能够明显影响背最长肌的肌纤维类型组成和相关基因表达量，还可调节肌肉抗氧化能力[23]。李贝贝等[24]研究表明，当抗氧化物质含量或活性升高的同时，猪肉的失水率和蒸煮损失会更低。超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性与肌肉抗氧化能力呈正相关[25]。本试验中，60%组藏母羊超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性显著高于70%组、40%组和30%组，表明适宜精料比的饲粮可提高抗氧酶清除自由基的能力，增强肌肉抗氧化性能。总抗氧化能力越强、丙二醛和羟自由基含量越低，表明机体抗氧化能力越强[26]。本试验发现，60%组藏母羊总抗氧化能力显著高于其他4组，同时丙二醛和羟自由基含量也最低。因此，饲粮精料水平为60%时，可在一定程度上缓解肌肉氧化应激，增强肌肉抗氧化能力，达到改善肉质的目的。4结论饲粮中添加不同水平的精料可明显影响藏羊肌肉抗氧化能力和肌红蛋白相关含量，其中以60%的添加量效果较佳。