全混合日粮（TMR）具有营养均衡、饲喂方便、节省劳动力以及饲喂效果好等优点，普遍应用于肉羊育肥生产。TMR含有约80%的精饲料，大量饲喂或使用不当易引发瘤胃酸中毒，导致瘤胃微生物区系紊乱，损伤瘤胃等消化道上皮黏膜，降低生产性能，引发各种疾病[1-2]。酵母菌和可溶性糖均可在一定程度上缓解瘤胃酸中毒症状，避免因饲喂高精料日粮对动物产生的不利影响。因此，本试验利用体内法研究全混合日粮中分别添加活性酿酒酵母和葡萄糖对母羊血清生化指标和瘤胃发酵参数的影响，以期为生产实践提供参考。1材料与方法1.1试验动物试验从2020年7月18日至10月5日在内蒙古呼和浩特市内蒙古农业大学海流图试验基地进行。选取健康、体况相近的周岁母羊30只，随机分为3组，每组10个重复，各组母羊体重差异不显著（P0.05）。1.2试验设计3组母羊分别为对照组、酵母组和葡萄糖组，分别饲喂基础日粮、添加0.5%活性酿酒酵母的基础日粮和添加1.0%葡萄糖的基础日粮。基础日粮组成及营养水平见表1。试验开始前清扫圈舍和消毒，试验期64 d，单栏饲养，每日饲喂2次（6：00、18：00），自由采食饮水，定期驱虫、免疫和清理圈舍粪便，每周对圈舍进行消毒。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.21.003.T001表1基础日粮组成及营养水平项目对照组酵母组葡萄糖组原料组成/%玉米35.034.534.0豆粕3.03.03.0棉籽饼4.04.04.0麦麸1.01.01.0菜籽饼3.03.03.0膨化尿素0.20.20.2玉米酒糟粕8.08.08.0玉米胚芽粕3.03.03.0统糠10.010.010.0葵花皮10.010.010.0玉米皮（糠）15.015.015.0预混料2.02.02.0食盐0.40.40.4石粉1.51.51.5磷酸氢钙0.20.20.2小苏打0.30.30.3氯化铵0.40.40.4膨润土3.03.03.0活性酿酒酵母00.50葡萄糖001.0合计100.0100.0100.0营养水平消化能/(MJ/kg)11.3311.3211.32干物质/%88.9188.9188.91粗蛋白/%13.0613.0613.06中性洗涤纤维/%23.9723.9723.97酸性洗涤纤维/%16.9816.9816.98粗灰分/%9.789.789.78粗脂肪/%1.441.441.44淀粉/%28.8428.5228.20钙/%0.720.720.72注：1.每千克预混料为日粮提供：碘150 mg、锰2250 mg、钴20 mg、硒25 mg、铜650 mg、铁3 150 mg、锌4 750 mg、VA 400 000 IU、VD3 150 000 IU、DL-α生育酚3 000 IU。2.营养水平中消化能为计算值，其余均为实测值。1.3样品采集血样采集：试验第1 d和最后1 d晨饲前颈静脉采血，采集的血液置于10 mL采血管，3 500 r/min离心15 min。以1.5 mL的离心管保存上清液，－20 ℃保存。瘤胃液采集：试验最后1 d晨饲前经采集瘤胃液。瘤胃液采出后立即测定pH值，经4层纱布过滤至50 mL离心管，取滤液0.5 mL于含4.5 mL 0.2 mol/L盐酸的离心管中，固定氨态氮（NH3-N）；取4 mL滤液于含1 mL 25 %偏磷酸的离心管中，固定挥发性脂肪酸（VFA），－20 ℃保存。1.4测定指标及方法1.4.1血清生化指标血清生化指标主要检测葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素（UREA）。GLU采用葡萄糖氧化酶法测定；TG和TC采用氧化酶法测定；ALT和AST采用IFCC法测定；ALP采用AMP缓冲液法测定；TP采用双缩脲法测定；ALB采用溴甲酚绿法测定；UREA采用紫外-谷氨酸脱氢酶法测定。试剂盒均购自英科新创（厦门）科技有限公司，测定仪器为迈瑞BS-460全自动生化分析仪。1.4.2瘤胃发酵参数瘤胃液pH值使用FB20实验室台式pH计进行测量，采集瘤胃液时当场测定；氨态氮（NH3-N）浓度参照冯宗慈等[3]的方法测定；挥发性脂肪酸（VFA）浓度采用气相色谱仪测定。VFA具体检测方法：解冻后的瘤胃液3 000 r/min离心15 min。取1 mL混合液加入2 g酸性吸附剂（按比重30∶1∶20称取无水硫酸钠、50 %硫酸及硅藻土混合研匀，密封干燥保存）和4 mL 31.25 mmol/L巴豆酸溶液（称取0.269 0 g巴豆酸，定溶于氯仿为溶剂100 mL容量瓶中），摇匀，吸取1 μL 样品，采用气相色谱仪测定VFA的含量。测定条件：空气压力10.35 kg/cm2、流量110 mL/min；载气N2压力1.7 kg/cm2、流量45 mL/min；载气H2压力0.7 kg/cm2、流量75 mL/min；柱温105 ℃，进口温度230 ℃，进样量1 μL。1.5数据统计与分析数据采用Excel软件进行整理，采用SASS软件进行单因素方差分析，采用Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1全混合日粮中添加活性酿酒酵母及葡萄糖对母羊血清生化指标的影响（见表2）由表2可知，对照组、酵母组和葡萄糖组间母羊血清中的GLU、TG、TC、ALT、AST、ALP、TP、ALB、UREA含量差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.21.003.T002表2全混合日粮中添加活性酿酒酵母及葡萄糖对母羊血清生化指标的影响组别GLU/(mmol/L)TG/(mmol/L)TC/(mmol/L)ALT/(U/L)AST/(U/L)ALP/(U/L)TP/(g/L)ALB/(g/L)UREA/(mmol/L)对照组2.61±0.430.12±0.041.28±0.2615.65±3.24114.58±8.38253.27±19.6348.11±7.0020.22±3.716.41±1.07酵母组2.99±0.660.16±0.061.42±0.2016.02±0.86110.21±14.60256.01±26.7854.55±7.8322.48±2.046.35±1.49葡萄糖组3.10±0.920.12±0.021.34±0.3213.37±2.46109.18±11.03258.16±22.7950.08±12.0321.29±3.986.23±1.31注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2全混合日粮中添加活性酿酒酵母及葡萄糖对母羊瘤胃发酵参数的影响（见表3）由表3可知，各组母羊瘤胃液中丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸差异均不显著（P0.05）。葡萄糖组乙酸浓度显著高于酵母组（P0.05），但两组与对照组相比，差异均不显著（P0.05）；葡萄糖组丙酸浓度显著高于对照组（P0.05），酵母组与两者均无显著差异（P0.05）；葡萄糖组的乙丙比显著低于对照组（P0.05），酵母组与其他两组之间差异不显著（P0.05）；葡萄糖组TVFA含量显著高于其他两组（P0.05）；对照组、酵母组和葡萄糖组的母羊瘤胃pH值、NH3-N浓度差异均不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.21.003.T003表3全混合日粮中添加活性酿酒酵母及葡萄糖对母羊瘤胃发酵参数的影响组别乙酸/(mmol/L)丙酸/(mmol/L)丁酸/(mmol/L)异丁酸/(mmol/L)戊酸/(mmol/L)异戊酸/(mmol/L)乙丙比TVFA/(mmol/L)pH值NH3-N/(mg/100 mL)对照组15.84±2.69ab4.31±0.70b1.85±0.400.52±0.110.44±0.140.99±0.283.71±0.63a23.94±3.59b7.23±0.2723.66±4.65酵母组13.83±1.76b4.81±0.99ab1.97±0.640.50±0.180.46±0.240.90±0.303.00±0.83ab22.46±2.87b7.20±0.3421.95±5.79葡萄糖组17.44±2.18a5.69±1.07a2.44±0.370.45±0.080.41±0.091.02±0.142.86±0.34b27.45±1.55a7.07±0.1621.82±4.783讨论3.1全混合日粮中添加活性酿酒酵母及葡萄糖对母羊血清生化指标的影响血液是动物进行正常生命活动和新陈代谢的重要部分，能够较直观判断动物健康与否的生理指标。临床上可通过血清GLU含量衡量动物机体内的能量是否平衡，了解其营养状况，诊断糖尿病等疾病[4]。血清TC和TG能够反映机体对脂类的吸收和代谢情况[5]。肝脏合成血清TP，包括ALB和GLB，TP和ALB含量反映动物机体的蛋白供应及营养状况，动物机体中TP和ALB含量上升，表明机体营养状况良好[6]。UREA是蛋白质代谢后的最终产物，反映动物机体蛋白质和氨基酸的平衡状况及肾脏机能情况[7]。血液中AST含量可以判断肝脏是否受损[8-9]。ALP广泛分布于肝脏、骨骼、肾、肠等组织中，是一种经肝脏向胆外排出的酶，主要用于诊断动物骨骼生长情况；当动物出现骨病和肝脏等病变时，其活性增强。本试验结果表明，活性酿酒酵母和葡萄糖对血清GLU、TG、TC、UREA、TP、ALB、ALP、ALT和AST的含量均无显著影响（P0.05）。杨富宇[10]研究发现，日粮中添加不同含量葡萄糖对断奶仔猪的血清TP、ALB、GLB、BUN、GLU、TC和TG的影响效果不显著，结果与本试验结果相似。3.2全混合日粮中添加活性酿酒酵母及葡萄糖对母羊瘤胃发酵参数的影响饲料中碳水化合物在瘤胃内经微生物发酵，产生大量挥发性脂肪酸。发性脂肪酸是反映瘤胃消化代谢及健康状况的重要指标。反刍动物大部分能量由瘤胃内发酵产生的挥发性脂肪酸提供，其中乙酸、丙酸和丁酸是主要的挥发性脂肪酸。冯仰廉[11]研究表明，反刍动物合成乳脂的主要前体物质是乙酸，而在瘤胃内，丙酸是参与糖异生的主要物质。本试验中，葡萄糖组母羊瘤胃VFA浓度显著高于对照组和酵母组；葡萄糖组的丙酸浓度显著高于对照组；葡萄糖组的乙酸浓度显著高于酵母组，与对照组差异不显著，但在数值上葡萄糖组高于对照组。表明日粮中添加葡萄糖能够在一定程度上促进瘤胃发酵。乙丙比是反映发酵模式和发酵类型的重要指标。当乙丙比≤2.5时为丙酸型发酵[12]，此时丙酸浓度相对较高、比值较低，表明丙酸可以合成更多葡萄糖；当乙丙比＞2.5时为乙酸型发酵，此时乙酸浓度相对较高、比值较高，表明能够利用丙酸合成的葡萄糖减少，饲料的能量利用率较低。本试验中，葡萄糖组的乙丙比显著低于对照组，酵母组和对照组相比有下降趋势；各组乙丙比2.5，表明此时正处于乙酸型发酵，葡萄糖在一定程度维持母羊葡萄糖代谢平衡。各组之间丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸含量差异均不显著，表明葡萄糖有利于瘤胃发酵，提高丙酸和总挥发性脂肪酸的产量以及降低乙丙比，有益于提高饲料利用率。本试验结果与Kang等[13]研究结果相似。瘤胃pH值反映瘤胃内环境的综合情况。Marie等[14]研究表明，奶牛正常瘤胃液的pH值为5.5~7.5。本试验研究发现，3组瘤胃pH值差异不显著，其变动范围在7.07~7.23之间，均在正常范围内。NH3-N是瘤胃微生物合成菌体蛋白的主要氮源，也是瘤胃内环境的重要指标。瘤胃NH3-N浓度反映饲料蛋白质在瘤胃内的降解情况以及瘤胃微生物对其的利用程度[15]。适宜的NH3-N浓度利于微生物蛋白合成[16]。研究发现，氨态氮浓度过低，不仅降低纤维分解菌降解纤维素的效率，还可能对菌体蛋白的产量产生影响[17]；氨态氮浓度过高，表明瘤胃微生物降解氮源的速度远远超过合成蛋白质的速度，导致氮循环中氮素的流失。研究表明，NH3-N最适浓度为50~300 mg/L[18]。本研究发现，3组之间NH3-N浓度差异不显著（P0.05），但酵母组和葡萄糖组的NH3-N浓度均低于对照组，表明酵母组和葡萄糖组母羊瘤胃内菌体蛋白的合成较充分，利于瘤胃的发酵。本试验结果与牛建康等[19]和包雨洪[20]研究的结论相似。4结论日粮中添加0.5%的活性酿酒酵母对母羊的血清生化指标和瘤胃发酵参数无显著影响。日粮添加1.0%的葡萄糖可提高丙酸和VFA含量，降低乙丙比，利于母羊的瘤胃发酵。