β-1,3/1,6-葡聚糖是一种存在于酵母细胞壁中β-葡聚糖中的活性多糖，主链为β-1,3键的线性骨架，侧链为高度分支的β-1,6键[1]。β-1,3/1,6-葡聚糖在肠道中不能被溶解吸收，通过激活机体中的免疫相关通路提高动物的免疫力、抗病力以及生产性能[2-3]。研究发现，β-葡聚糖对治疗动物消化系统肿瘤有显著功效[4]。Levine等[5]研究发现，200 g/t β-1,3-葡聚糖可提高肉鸡肠道免疫力。Ding等[6]研究表明，β-1,3/1,6-葡聚糖能够提高海东鸡种鸡的生产性能，改善肠道形态。自2020年7月1日起，我国饲料行业进入“全面禁抗”时代。在无抗饲料的推进过程中，相关研究均以提高动物机体抗病能力、促进畜禽肠道健康为切入点[7-8]。本试验在日粮中添加不同水平的β-1,3/1,6-葡聚糖，研究其对黄羽肉鸡生长性能、免疫器官指数、肠道生长发育以及形态、血清生化指标的影响，以期确定肉鸡日粮中β-1,3/1,6-葡聚糖的最适添加量。1材料与方法1.1试验动物420只体况良好的同批次孵化1日龄黄羽肉仔鸡，购自青海省湟中县常绿牧业公司。1.2试验设计采用单因素试验设计，将420只黄羽肉鸡随机分为7组，每组4个重复，每个重复15只。对照组肉鸡饲喂基础日粮。抗生素组在基础日粮中添加0.02%的泰乐菌素（天津瑞普生物药业有限公司，纯度为10%）。β1~β5组在基础日粮中分别添加1.00、1.25、1.50、1.75和2.00 g/kg β-1,3/1,6-葡聚糖（武汉兴众诚科技有限公司，纯度为80%）。试验期28 d。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.006.T001表1基础日粮组成及营养水平（风干基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米56.81代谢能/(MJ/kg)11.84豆粕28.00干物质/%84.36豆油2.00粗蛋白质/%19.55麸皮5.30粗脂肪/%4.47酵母粉3.00粗纤维/%3.81石粉1.96灰分/%2.80磷酸氢钙1.10钙/%1.09食盐0.30磷/%0.64蛋氨酸0.23赖氨酸0.35苏氨酸0.08元明粉0.10多矿0.1250%氯化胆碱0.10小苏打0.05预混料0.50注：1.预混料为每千克日粮提供：VA 9 000 IU、VD3 2 000 IU、VE 11.0 IU、VK 1.00 mg、硫胺素1.20 mg、核黄素5.80 mg、烟酸66.0 mg、泛酸10.0 mg、吡哆醇2.60 mg、生物素0.20 mg、叶酸0.70 mg、VB12 0.012 mg。2.多矿为每千克日粮提供：锰100 mg、锌75.0 mg、铁80.0 mg、碘0.65 mg、铜8.00 mg、硒0.35 mg。3.营养水平均为计算值。1.3饲养管理试验于青海省湟中县常绿牧业公司的育雏鸡舍进行。饲养期间自由采食和饮水。第1 w每天保持24 h光照，以后每天递减0.5 h，至26 d后每天光照保持17 h。第1 w舍温33.0~35.0 ℃，第2 w舍温控制在29.5~32.5 ℃，第3 w舍温控制在24.0~29.0 ℃，鸡舍相对湿度为60%~70%。试验全期笼养，鸡舍定期消毒、清洁，鸡群按常规免疫程序接种。1.4测定指标及方法1.4.1生长性能试验第7 d、28 d以重复为单位对肉就空腹称重，记录每个重复每周投料量、剩余饲料重、死亡数。分别计算各组试验期间平均日采食量（ADFI）、7~28日龄平均日增重（ADG）、料重比（F/G）和成活率。平均日增重=(末重-7日龄体重)/试验天数(1)平均日采食量=(投料量-剩料量)/试验天数(2)料重比=平均日采食量/平均日增重(3)成活率=(试验第28 d鸡数量/60)×100%(4)1.4.2免疫器官指数试验第28 d，每个重复随机抽取1只鸡，致死后立刻剥离胸腺、脾脏、法氏囊并称重记录，计算免疫器官相对指数。免疫器官指数=免疫器官鲜重(g)/宰前活重(g)×100%（5）1.4.3血清生化指标试验第28 d，各组各重复随机抽取1只鸡，心脏采血7 mL血液置于促凝血管，3 500 r/min离心10 min，将分离的血清放置于2 mL EP管，-80 ℃保存。采用生化法测定血清胆固醇（TC）、葡萄糖（GLU）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、甘油三酯（TG）；采用免疫球蛋白酶联免疫反应试剂盒检测血清生长激素（GH）、胰岛素（INS）、胰高血糖素（GC）、皮质醇（Cor）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）含量。试剂盒均购自江苏酶标生物科技有限公司。1.4.4肠道指标试验第28 d，各组各重复随机抽取1只鸡，处死后分离十二指肠、空肠、回肠，测量其长度及重量，计算各肠段相对重量和相对长度。冲洗肠道内容物，经固定、包埋、切片后AB-PAS染色，将切片于4、10倍光学显微镜下放大观察，测量绒毛高度（VH）、隐窝深度（CD），计算绒毛高度/隐窝深度（VH/CD）。1.5数据统计与分析数据采用Excel软件处理，采用SPSS 21.0软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），采用Duncan's法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1日粮中添加β-1,3/1,6-葡聚糖对黄羽肉鸡生长性能的影响（见表2）由表2可知，各β-1,3/1,6-葡聚糖组肉鸡的成活率、末重、ADFI和ADG与对照组相比均有所增加，但差异不显著（P0.05）。β1组、β2组和β3组肉鸡的F/G均较对照组有所降低，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.006.T002表2日粮中添加β-1，3/1，6-葡聚糖对黄羽肉鸡生长性能的影响组别成活率/%7日龄体重/g末重/gADFI/(g/d)ADG/(g/d)F/Gβ1组98.0098.75±13.02493.33±62.1235.99±5.1018.67±3.522.08±0.49β2组93.00109.75±7.18433.33±25.1732.91±2.2315.56±1.122.13±0.19β3组95.00116.00±3.83443.33±36.8635.24±0.9815.50±1.802.15±0.21β4组96.00120.50±29.99443.33±57.5236.54±2.8516.02±2.472.34±0.41β5组100.00120.50±29.99438.33±80.3634.02±1.4414.98±4.112.23±0.46抗生素组100.00121.00±10.13453.33±74.8935.82±6.8015.59±3.502.28±0.72对照组93.00119.50±32.91368.33±40.4229.31±2.8612.40±2.092.23±0.72注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示无显著差异（P0.05）；下表同。2.2日粮中添加β-1,3/1,6-葡聚糖对黄羽肉鸡免疫器官指数的影响（见表3）由表3可知，各试验组肉鸡的免疫器官指数与抗生素组、对照组均无显著差异（P0.05）；β2组肉鸡脾脏指数、法氏囊指数较对照组增加明显。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.006.T003表3日粮中添加β-1，3/1，6葡聚糖对黄羽肉鸡免疫器官指数的影响组别胸腺指数脾脏指数法氏囊指数β1组0.08±0.030.15±0.070.20±0.10β2组0.10±0.010.20±0.070.29±0.10β3组0.08±0.020.17±0.090.25±0.04β4组0.06±0.030.16±0.050.25±0.03β5组0.10±0.030.17±0.040.24±0.14抗生素组0.13±0.040.19±0.060.20±0.08对照组0.06±0.020.18±0.030.25±0.05%2.3日粮中添加β-1,3/1,6-葡聚糖对黄羽肉鸡肠道生长发育及形态的影响（见表4、表5）由表4可知，与抗生素组及对照组相比，各β-1,3/1,6-葡聚糖组肉鸡十二指肠、空肠和回肠的相对长度及相对重量均无显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.006.T004表4日粮中添加β-1，3/1，6-葡聚糖对黄羽肉鸡肠道相对长度及相对重量的影响组别相对长度/(cm/kg)相对重量/(g/kg)十二指肠空肠回肠十二指肠空肠回肠β1组27.92±5.80157.15±28.8824.63±3.9125.08±4.1450.09±11.087.65±2.27β2组32.32±3.37173.15±12.1433.37±8.5525.21±2.1952.08±5.615.62±1.05β3组28.43±1.59193.19±14.1927.97±2.8028.73±4.2967.19±10.777.07±1.58β4组25.31±4.32198.41±35.6526.44±4.1727.11±4.7561.50±3.468.12±2.30β5组24.52±3.08183.10±26.0636.77±4.9523.35±5.6959.15±17.178.43±2.03抗生素组27.68±1.84203.41±35.2327.95±2.7823.20±2.4756.76±9.556.62±2.63对照组30.17±5.85228.86±76.5530.94±5.3123.88±3.5950.94±7.915.31±2.11由表5可知，与对照组相比，β1组、β2组和β3组肉鸡十二指肠VH显著提高（P0.05）；各β-1,3/1,6-葡聚糖添加组肉鸡十二指肠CD显著提高（P0.05）；β1组的十二指肠VH/CD显著低于β2组、β3组、抗生素组和对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.006.T005表5日粮中添加β-1，3/1，6-葡聚糖对黄羽肉鸡肠道形态的影响组别十二指肠空肠回肠VH/μmCD/μmVH/CDVH/μmCD/μmVH/CDVH/μmCD/μmVH/CDβ1组1 990.19±278.23ab159.32±35.67a12.98±3.03c1 612.50±155.72b183.94±53.72a9.50±2.98b795.86±79.50b66.02±13.56c12.27±1.41aβ2组2 134.98±215.13a134.18±33.28ab16.85±4.69ab1 854.31±186.33a123.69±27.78b15.81±4.27a1067.96±72.25a91.85±17.98ab12.18±3.51aβ3组2 015.76±239.18ab119.54±35.71bc18.54±7.09a1 119.17±254.75c110.23±32.60b10.65±3.11b800.31±177.58b63.39±11.14c12.62±1.59aβ4组1 840.95±197.91bc137.35±35.80ab14.25±3.96bc1 713.22±136.01ab124.81±26.14b14.22±2.77a655.32±83.41c70.89±18.57c9.77±3.04abβ5组1 831.83±257.03bc120.25±28.78bc16.04±4.33abc1 218.74±370.95c119.08±28.25b10.81±4.33b730.53±75.17bc81.48±13.17bc9.10±1.17bc抗生素组1 884.17±126.01bc101.85±12.64c18.6±1.85a1 615.29±287.39b112.04±13.18b14.72±3.56a808.50±67.20b67.80±7.84c12.10±2.11a对照组1 765.26±157.04c105.46±20.82c17.32±3.58ab1 260.51±106.25c118.09±23.48b11.02±2.07b782.19±66.71b102.99±19.26a7.85±1.76b与抗生素组和对照组相比，β2组肉鸡空肠VH显著提高（P0.05）；与其他组相比，β1组肉鸡空肠CD显著升高（P0.05）；β2组、β4组肉鸡空肠的VH/CD显著高于对照组（P0.05）。β2组肉鸡回肠VH显著高于其他各组（P0.05）；除β2组外，其余各组肉鸡回肠CD均显著低于对照组（P0.05）；β1组、β2组、β3组肉鸡回肠VH/CD均显著高于对照组（P0.05）。2.4日粮添加β-1,3/1,6-葡聚糖对黄羽肉鸡血清生化指标的影响（见表6）由表6可知，与对照组相比，各试验组肉鸡血清IgM、IgG含量均无显著差异（P0.05）；β1组、β2组和β3组肉鸡血清IgA含量显著高于对照组（P0.05）；β2组肉鸡血清TC含量显著高于抗生素组和对照组（P0.05），GLU含量显著低于各组（P0.05）；各试验组肉鸡血清HDL-C含量均显著低于对照组（P0.05）；β1组和β2组肉鸡血清TG含量显著低于对照组，但高于抗生素组（P0.05）；β3组肉鸡血清LDL-C含量显著高于抗生素组与对照组（P0.05）；各试验组肉鸡血清GC含量显著高于抗生素组和对照组（P0.05）；各试验组肉鸡血清INS含量显著高于抗生素组低于对照组（P0.05）；各试验组肉鸡血清GH含量显著低于对照组（P0.05），除β4组外，各试验组肉鸡血清GH含量均显著高于抗生素组（P0.05）；β4组肉鸡血清Cor含量显著低于抗生素组和对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.006.T006表6日粮中添加β-1，3/1，6-葡聚糖对黄羽肉鸡血清生化指标的影响组别IgM/(mg/L)IgG/(mg/L)IgA/(mg/L)TC/(μmol/L)GLU/(mmol/L)HDL/(μmol/L)TG/(μmol/L)LDL/(μmol/L)GC/(ng/L)INS/(mU/L)GH/(μg/L)Cor/(μg/L)β1组19.10±1.1462.02±2.0146.07±9.64ab1 106.83±15.82c113.41±1.85c91.90±1.46d213.05±1.97e299.84±4.69f47.96±0.17b15.57±0.27d22.39±0.14b172.77±2.84bβ2组21.26±5.4065.83±14.747.53±2.88ab1 209.48±15.09a92.81±1.13f108.24±1.27b208.21±2.15e384.75±1.22a47.33±0.47b16.68±0.12c18.62±0.05e111.04±1.84eβ3组17.13±2.0551.83±3.9455.87±6.68a1 034.31±6.69d112.30±0.58c108.33±0.89b358.59±2.15a349.24±3.49c49.68±0.28a15.90±0.19d21.03±0.25c115.80±1.64dβ4组23.24±6.9765.65±8.2935.33±7.32bc997.49±13.39e135.13±2.09a88.86±1.94e223.02±2.26d255.25±3.95f50.09±0.75a15.90±0.19d19.96±0.14d95.40±1.79gβ5组25.80±4.7770.87±3.2338.06±0.34bc991.91±13.53e125.66±0.98b103.71±1.52c285.96±2.15c335.09±2.57d46.09±0.45c19.91±0.27b21.23±0.27c153.39±0.88c抗生素组22.13±5.3273.97±19.5043.09±9.18bc901.53±8.42f109.98±0.28d87.29±1.62e190.26±5.49f263.80±5.33e31.76±0.68e12.97±0.43e19.66±0.12d101.69±3.12f对照组18.38±4.5760.69±4.9430.77±5.11c1 169.32±22.29b102.27±1.16e135.92±2.16a342.36±3.85b357.78±3.70b34.23±0.42d21.54±0.33a25.56±0.24a191.65±0.51a3讨论3.1日粮中添加β-1,3/1,6-葡聚糖对黄羽肉鸡生长性能的影响有研究显示，在日粮中添加50 mg/kg的β-1,3/1,6-葡聚糖可提高肉鸡在22~42日龄阶段的平均日增重和平均采食量[9]。曲昆鹏等[10]研究发现，在日粮中添加150 mg/kg β-1,3/1,6-葡聚糖可显著提高21日龄肉仔鸡的日增重。本试验中，日粮添加不同水平的β-1,3/1,6-葡聚糖使肉鸡体重、平均日采食量和平均日增重均有所提高，β1组肉鸡体重、平均日采食量和平均日增重高于抗生素组，β1组和β4组的料重比低于抗生素组和对照组。Rajapkse等[11]研究发现，饮水中添加0.1%的β-葡聚糖的肉鸡平均体重均高于对照组，与本试验结果相同，说明肉鸡日粮中添加1.00 g/kg和1.25 g/kg的β-1,3/1,6-葡聚糖有利于提高肉鸡的生长性能。3.2日粮中添加β-1,3/1,6-葡聚糖对黄羽肉鸡免疫器官指数的影响胸腺、脾脏、法氏囊是家禽主要的免疫器官，器官指数可作为评价家禽机体免疫水平指标[12]。当免疫器官质量降低时为免疫抑制，免疫器官质量增加时为免疫增强[13]。本试验结果显示，1.50 g/kg β-1,3/1,6-葡聚糖组肉鸡的胸腺指数最高，1.25 g/kg β-1,3/1,6-葡聚糖组肉鸡的脾脏指数和法氏囊指数最高。有研究发现，添加150 g/kg的β-1,3/1,6-葡聚糖，肉鸡在21日龄有较高的法氏囊指数，在42日龄时无显著差异[14]。刘影等[15]发现，肉鸡法氏囊的相对重量在42日龄时无显著差异。结果表明，法氏囊作为家禽独有的中枢免疫器官，同时也可能是β-1,3/1,6-葡聚糖调节机体免疫功能的主要器官。发育良好的法氏囊对增强肉鸡免疫功能具有重要作用。因此，添加1.25 g/kg的β-1,3/1,6-葡聚糖能够提高肉鸡免疫能力。3.3日粮中添加β-1,3/1,6-葡聚糖对黄羽肉鸡肠道生长发育及形态的影响禽类的不同肠段其质量，长度具有差异性[16]。动物机体对营养物质的吸收受消化器官的生长发育影响[17]。肉鸡较高的生长速度和饲料摄入量，需要健康且发育良好的肠道保证其营养物质的摄入和吸收[18]。本试验发现，日粮中添加β-1,3/1,6-葡聚糖黄羽肉鸡各肠道的相对长度低于抗生素组和对照组，但相对重量有所增加；当β-1,3/1,6-葡聚糖添加量为1.50、1.75 g/kg时，增加尤为明显。刘兴波等[19]研究发现，肉鸡小肠的各肠段发育在7日龄达到最大值，随着日龄的增加，小肠的相对长度降低，肠道密度增加，较短的肠道结构更利于适应日粮营养水平的变化。正常的小肠结构可以保证肉仔鸡对饲粮中养分的充分消化和吸收，养分主要被小肠绒毛吸收。衡量小肠消化吸收功能的重要指标为肠道VH、CD和VH/CD。VH发育较好，酶的分泌能力增强，促进动物消化吸收；CD深浅同样与肠道分泌能力有关，VH/CD能够反映动物的肠道健康情况[20]。酵母培养物中含有游离氨基酸、甘露聚糖、β-1,3/1,6-葡聚糖等多种营养物质[21]。有研究发现，单胃动物日粮中加入酵母培养物可提高其肠道绒毛高度、隐窝深度和绒隐比[22]。本试验结果表明，在日粮中添加1.00、1.25 g/kg β-1,3/1,6-葡聚糖时，黄羽肉鸡十二指肠、空肠和回肠的VH、CD、VH/CD均有所改善。郑娟善等[23]研究发现，在海东鸡种鸡日粮中添加1%或2%的β-1,3/1,6-葡聚糖能够明显改善小肠的绒毛长度和隐窝深度，与本试验结果相符。官秀界等[24]研究表明，日粮中添加1 kg/t的酵母培养物对改善肉鸡肠道的组织形态效果最佳，酵母水解还可改善肉鸡肠黏膜形态[25]。另有研究表明，添加 800 mg/kg时能够促进小肠发育，提高其肠道消化吸收能力[26]。3.4日粮中添加β-1,3/1,6-葡聚糖对黄羽肉鸡血清生化指标的影响本试验发现，黄羽肉鸡血清中IgM和IgG含量与β-1,3/1,6-葡聚糖添加量无显著相关性，但IgA含量平在β-1,3/1,6-葡聚糖1.50 g/kg 时最高，与Gao等[27]研究结果相同。血清中GLU具有氧化功能，也是氨基酸和VC等营养物质合成的前体物质[28]。TG、TC、HDL-C、LDL-C的含量与动物机体的脂代谢相关。TG含量过高机体会产生代谢性疾病；HDL-C具有抑制LDL-C的作用，能够缓解心血管疾病发生[13]。本试验中，添加1.25 g/kg β-1,3/1,6-葡聚糖，肉鸡血清TG含量最低，LDL-C和HDL-C含量较高。GH的主要功能为促进氨基酸合成蛋白质和脂肪的分解[29]，本试验中，β-1,3/1,6-葡聚糖添加量为1.00 g/kg时，GH水平最高。GC与INS是一对维持机体血糖平稳的拮抗胰岛激素。本试验中，添加1.75、2.00 g/kg的β-1,3/1,6-葡聚糖，肉鸡血清GC、INS含量较高。血清Cor可反应机体的创伤程度，血清Cor水平越低机体损伤越小[30]。本试验中，Cor在2 g/kg β-1,3/1,6-葡聚糖的添加量时水平最低。4结论日粮中添加1g/kg β-1,3/1,6葡聚糖时，肉鸡的生长性能最佳；添加1.25 g/kg β-1,3/1,6葡聚糖时，肉鸡免疫器官发育较优，可明显改善小肠的相对长度、绒毛长度、隐窝深度和绒隐比；添加1.75 g/kg β-1,3/1,6葡聚糖能够改善肉鸡血清生化指标。