益生菌、植物提取物、多糖和酶制剂等功能性饲料添加剂具有绿色、无残留、不产生耐药性等特点，在平衡肠道菌群[1-6]、增强免疫力[7-9]、增强机体抗氧化功能[10-11]、改善动物生产性能[12-13]和缓解疾病防控压力[14-16]等方面具有重要作用。凝结芽孢杆菌能够形成芽孢，对胃酸和胆汁有较高的耐受性，可顺利通过胃，并在肠道中萌发繁殖，且能够产生L-乳酸，降低肠道pH值，抑制有害菌繁殖，调节微生态平衡，促进肠道健康与营养物质吸收[17]。姜黄素是草本植物姜黄中提取的多酚类化合物，具有抗氧化、清除自由基、抗菌消炎、提高免疫力等多种药理作用，无毒副作用和抗药性，可提高动物生产性能和抗病力[7]。免疫复合制剂由黄芪多糖、甘草多糖、酵母细胞壁多糖、过氧化氢酶、维生素、微量元素氨基酸螯合物等组成，具有清除自由基、缓解氧化应激、提高动物免疫力、维护肠道结构完整、促进营养物质吸收、改善生产性能的作用。本试验探究凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂对夏季绿壳蛋鸡生产性能及血清生化指标的影响，为绿壳鸡蛋的安全生产提供技术参考。1材料与方法1.1试验动物186日龄产蛋高峰期新杨绿壳蛋鸡，购自上海新杨家禽育种中心。1.2试验材料凝结芽孢杆菌由昆明三正生物科技（集团）有限公司生产，含量为100×108 CFU/g。姜黄素由广州科虎生物科技有限公司生产，含量为10%。免疫复合制剂由四川省粮油科研所和成都力源天海生物工程有限公司联合研制，成都力源天海生物工程有限公司生产，主要成分为黄芪多糖≥50 000 mg/kg，锌≥5 000 mg/kg，过氧化氢酶≥1 500 U/g。1.3试剂盒与仪器免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）酶联免疫吸附测定试剂盒，购自上海纪宁实业有限公司；总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、γ-谷氨酰基转移酶（GGT）、碱性磷酸酶（ALP）、补体C3、C4检测试剂盒，购自深圳市库贝尔生物科技股份有限公司。SpectraMax 190酶标仪购自Molecular Devices公司，iMagic-M7全自动动物用生化分析仪购自深圳市库贝尔生物科技股份有限公司。1.4试验设计试验时间为2021年6月9日~7月27日，共计49 d。试验地点为什邡市什苑养殖专业合作社蛋鸡养殖场。试验选取健康状态良好、产蛋率相近的4栋蛋鸡，每栋4 000只鸡，按栋随机分为4组，每组4个重复，每个重复1 000只鸡。对照组蛋鸡饲喂玉米-豆粕型基础日粮，试验Ⅰ~Ⅲ组在基础日粮中分别添加400 mg/kg凝结芽孢杆菌、100 mg/kg姜黄素、500 mg/kg免疫酵素。按鸡场日常管理方式管理，蛋鸡饲养方式为笼养，每笼饲养3只成年蛋鸡，采用自然光照和人工光照相结合，光照时间16 h；每日6：00采用自动上料方式加喂饲料1次，自由采食，给予足量清洁的饮水。预试期1 w，正式试验期6 w。基础日粮组成及营养水平见表1。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.005.T001表1基础日粮组成及营养水平原料组成含量/%营养水平合计100.00玉米58.40代谢能/(MJ/kg)11.06米糠3.00粗蛋白质/%16.05豆粕25.80赖氨酸/%0.82大豆油0.80蛋氨酸/%0.36碳酸钙（粗）6.00蛋氨酸+胱氨酸/%0.62碳酸钙（细）3.00钙/%3.88预混料3.00磷/%0.51注：1.预混料为每千克日粮提供：铁60 mg、铜15 mg、锌88 mg、锰120 mg、碘0.2 mg、硒0.3 mg、VA 3 000~5 000 IU、VD3 1 500~2 500 IU、VE 50 mg、VK3 3mg、VB1 3 mg、VB2 6 mg、VB6 5 mg、VB12 20 µg、泛酸10 mg、烟酸30 mg、叶酸0.5 mg、生物素0.1 mg、胆碱500 mg。2.营养水平中代谢能、赖氨酸、蛋氨酸、蛋氨酸+胱氨酸为计算值，其余均为实测值。1.5测定指标及方法1.5.1生产性能和蛋品质指标正式试验期，记录各处理组每个重复产蛋枚数、产蛋重量、死淘数和饲料消耗量。计算每个重复试验期间的产蛋率和料蛋比。产蛋率=(产蛋枚数/日产蛋鸡数累加之和)×100%(1)料蛋比=饲料消耗量/产蛋重量(2)试验第6 w，分别从每个重复随机采集5枚鸡蛋，每组共20枚鸡蛋测定蛋品质指标（蛋重、蛋白高度、哈夫单位、蛋壳相对重、蛋黄相对重、蛋形指数）。采用NFN 381蛋白高度测定仪（日本FHK公司）测量蛋黄边缘与浓蛋白边缘中点成正三角形3个点的浓蛋白高度，取其平均值为蛋白高度值。哈夫单位＝100×lg(H-1.7W0.37+7.57)(3)式中：H为蛋白高度（mm）；W为蛋重（g）。蛋壳相对重=(蛋壳重/蛋重)×100%(4)蛋黄相对重=(蛋黄重/蛋重)×100%(5)蛋形指数为鸡蛋纵径和横径的比值，纵径和横径采用游标卡尺进行测量。1.5.2血清生化和免疫指标正式试验期结束第2 d，各处理组随机选择5只体重相近的健康蛋鸡，空腹状态下抽取翅静脉血液10 mL，静置30 min，3 500 r/min离心10 min，分离血清，2~8 ℃冷藏保存，48 h内测定相关血清指标。采用酶标仪采用双抗体二步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清中IgG、IgA、IgM含量；采用双缩脲法测定TP含量，溴甲酚绿法测定ALB含量；IFCC法测定ALT、AST和ALP活性；GPNA底物法测定GGT活性；免疫比浊法测定补体C3和C4含量；计算血清中球蛋白（GLB）含量和白球比（A/G）。1.6数据统计与分析试验数据采用Excel 2010软件处理，采用SPSS 17.0统计软件进行单因素方差分析，采用LSD法进行多重比较。结果以“平均值±标准差”表示，P0.05表示差异显著。2结果与分析2.1凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂对绿壳蛋鸡生产性能和蛋品质的影响（见表2、表3）由表2可知，与对照组相比，Ⅰ组和Ⅲ组蛋鸡产蛋率分别显著提高4.38%和5.06%（P0.05）；Ⅰ组和Ⅲ组蛋鸡料蛋比分别显著降低3.02%和4.15%（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.005.T002表2凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂对绿壳蛋鸡生产性能的影响组别产蛋率/%料蛋比对照组67.63±1.11b2.65±0.04aⅠ组70.59±1.37a2.57±0.04bⅡ组67.83±1.01b2.64±0.02aⅢ组71.05±0.91a2.54±0.02b注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P˃0.05）；下表同。由表3可知，各组蛋重、蛋白高度、哈夫单位、蛋黄相对重、蛋形指数均无显著差异（P0.05），但各组蛋白高度、哈夫单位均高于对照组（P0.05）。与对照组相比，Ⅰ组蛋壳相对重显著提高（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.005.T003表3凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂对绿壳蛋鸡蛋品质的影响组别蛋重/g蛋白高度/mm哈夫单位蛋壳相对重/%蛋黄相对重/%蛋形指数对照组48.44±0.853.72±0.4461.52 ±4.6811.73±0.57b31.93±0.771.30±0.03Ⅰ组48.64±0.673.90±0.4663.23 ±4.5812.36±0.42a31.78±0.991.29±0.02Ⅱ组48.56±0.963.96±0.4263.93 ±4.2312.01±0.78ab32.06±0.911.31±0.03Ⅲ组48.69±1.053.95±0.4663.70 ±4.5411.84±0.34b31.83±0.711.30±0.022.2凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂对绿壳蛋鸡血清生化指标的影响（见表4）由表4可知，各组绿壳蛋鸡血清中TP、GLB含量及ALT、AST、ALP、GGT活性均无显著差异（P0.05）。与对照组相比，Ⅱ组、Ⅲ组蛋鸡血清ALB含量有提高的趋势，但差异不显著（P0.05）；Ⅲ组蛋鸡血清ALB含量显著高于试验Ⅰ组（P0.05）。Ⅱ组、Ⅲ组蛋鸡血清A/G显著高于对照组（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.005.T004表4凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂对绿壳蛋鸡血清生化指标的影响组别TP/(g/L)ALB/(g/L)GLB/(g/L)A/GALT/(U/L)AST/(U/L)ALP/(U/L)GGT/(U/L)对照组69.94±15.4323.26±2.52ab46.68±14.950.53±0.14c57.38±23.81213.58±191.79245.56±215.648.52±2.81Ⅰ组62.68±8.7822.98±2.43b39.70±8.840.60±0.13bc59.26±12.65387.32±15.96171.26±77.648.82±9.46Ⅱ组57.16±4.6325.14±2.87ab32.02±3.190.79±0.11a71.70±10.29373.50±15.25114.66±19.6010.06±6.46Ⅲ组61.84±4.9026.18±1.10a35.66±4.570.74±0.10ab51.00±12.21370.32±21.41220.18±183.755.20±5.782.3凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂对绿壳蛋鸡血清免疫球蛋白和补体的影响（见表5）由表5可知，各处理组血清中IgA、IgG、IgM、C3、C4含量均无显著差异（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.005.T005表5凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂对绿壳蛋鸡血清免疫球蛋白和补体的影响组别IgA/(mg/L)IgG/(mg/L)IgM/(μg/L)C3/(μg/L)C4/(μg/L)对照组11.18±1.70195.04±12.40747.54±76.78128.00±108.0276.80±20.07Ⅰ组11.14±2.01176.48±33.45720.74±85.3872.00±4.4757.60±2.07Ⅱ组11.60±2.03176.18±11.33781.40±93.3876.00±5.4761.80±9.26Ⅲ组11.52±1.87179.82±23.27761.14±49.2868.00±4.4766.60±4.343讨论3.1凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂对绿壳蛋鸡生产性能和蛋品质的影响李伟[18]研究发现，在37周龄产蛋鸡基础日粮中添加1.0%复合微生物制剂可提高蛋鸡产蛋率和平均蛋重。邢冠润[19]研究发现，产蛋后期（66周龄）“京粉1号”蛋鸡日粮中添加凝结芽孢杆菌，可显著提高产蛋率和合格蛋重。刘爱君等[20]研究发现，在产蛋鸡基础日粮中添加乳酸菌类微生态制剂，可显著提高蛋壳厚度、蛋壳强度和哈夫单位。本试验，在186日龄绿壳蛋鸡日粮中添加400 mg/kg凝结芽孢杆菌，产蛋率和蛋壳相对重显著高于对照组，料蛋比显著降低，蛋白高度、哈夫单位有提高的趋势，与上述试验结果一致。结果表明，凝结芽孢杆菌可提高夏季绿壳蛋鸡生产性能，改善鸡蛋品质。本试验在日粮中添加凝结芽孢杆菌对蛋重、蛋黄相对重、蛋形指数影响不显著，与上述试验结果不一致，可能与基础日粮组成和蛋鸡品种有关。刘梦杰[21]研究发现，蛋鸡日粮中添加姜黄素对试验前3周蛋鸡的产蛋率、平均蛋重等均无显著影响，显著提高试验后3 w的产蛋率。杨泰[22]研究发现，与对照组相比，试验前期100 mg/kg和200 mg/kg姜黄素水平组蛋鸡的产蛋率分别提高2.07%和2.16%；试验后期产蛋率、平均蛋重等指标无显著差异，蛋白高度、哈夫单位显著提高。本试验在日粮中添加100 mg/kg姜黄素对产蛋率、料蛋比、蛋重、蛋黄相对重和蛋形指数影响均不显著，蛋白高度、哈夫单位和蛋壳相对重有提高的趋势，表明姜黄素可改善夏季绿壳鸡蛋品质。与上述试验结果的差异可能与基础日粮组成、姜黄素添加水平、环境温度和试验周期有关。植物多糖和酵母细胞壁多糖可发挥免疫调节、抗氧化、抗肿瘤、降血糖、抗病毒、抗辐射、促进创伤愈合和减轻肝损伤等多种生理功能。过氧化氢酶可以清除体内自由基，维护机体氧化还原平衡，有效降低自由基对肠上皮细胞的损伤，缓解氧化应激危害，维护动物肠道结构完整性，提高生产性能。刘明生等[23]研究发现，在蛋鸡日粮中添加0.1%黄芪多糖和0.1%的益生菌，明显改善蛋鸡的产蛋率和蛋品质。贺淼等[24]研究发现，在蛋鸡日粮中添加酵母细胞壁可明显减少鸡蛋的破畸率，产蛋率和平均蛋重无显著差异。张海燕等[25]研究发现，50 mg/kg枸杞多糖组蛋鸡的平均蛋重显著高于对照组，产蛋率无显著差异。唐明红[26]研究发现，在肉鸡日粮中添加200 U/kg过氧化氢酶可以提高机体的抗氧化能力，改善肉鸡的肠道形态和生长性能。龙彬[27]研究发现，在蛋鸡日粮中分别添加金银花、蓝莓、葡萄籽提取物均可显著提高鸡蛋蛋白高度和哈夫单位。本试验在日粮中添加500 mg/kg免疫复合制剂对蛋重、蛋壳相对重、蛋黄相对重、蛋形指数无显著影响，对蛋白高度和哈夫单位有提高的趋势，显著提高产蛋率，降低料蛋比，且在夏季高温应激条件下产蛋率波动较小。结果表明，由黄芪多糖、甘草多糖、酵母细胞壁多糖、过氧化氢酶、维生素、微量元素氨基酸螯合物等成分科学配伍而成的免疫复合制剂在缓解蛋鸡高温应激、提高生产性能和改善蛋品质方面具有协同作用，比凝结芽孢杆菌、姜黄素等单一功能性饲料添加剂效果更好。3.2凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂对绿壳蛋鸡血清生化指标的影响血清生化指标可在一定程度上反映动物体内的物质代谢状况和组织器官机能状态。血清TP、ALB、GLB、A/G可反映机体对蛋白质的吸收代谢状况和机体免疫力水平；ALT、AST、ALP、GGT可在一定程度上反映机体的代谢强度和肝脏功能。邢冠润[19]在蛋鸡日粮中添加凝结芽孢杆菌显著提高血清ALP含量，对TP、ALB、GLB含量及A/G均无显著影响。刘梦杰[21]研究发现，在蛋鸡日粮中添加150 mg/kg姜黄素，试验期6 w，血清ALB含量显著提高，血清ALT、AST活性显著降低，血清TP含量、ALP活性无显著性差异。陈鲜鑫等[28]报道，饲喂添加植物提取物的日粮对蛋鸡血清中TP、ALB含量及ALP活性无显著影响。上述研究结果的差异可能与蛋鸡的日龄、基础营养状况、健康状况、免疫状况和环境应激等方面的差异有关。本试验中，各处理组蛋鸡血清TP、GLB含量及ALT、AST、ALP、GGT活性均无显著性差异。ALT、AST等血清酶活水平是肝细胞损伤和肝功的敏感指标，各处理组差异不明显，说明各组蛋鸡肝脏功能均比较正常。在蛋鸡日粮中添加100 mg/kg姜黄素的试验Ⅱ组和500 mg/kg免疫复合制剂的试验Ⅲ组提高了血清ALB含量，但差异未达到显著水平，试验各组血清A/G与对照组相比有提高的趋势，其中姜黄素和免疫复合制剂组与对照组相比差异显著。ALB由肝脏合成，具有维持家禽正常营养状态和血浆胶体渗透压的功能，对GLB有胶体保护作用，能够增强免疫力和抵抗力，在GLB保持正常水平情况下，ALB越多、A/G越高代表动物机体越健康。本试验结果表明，凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂可有效改善蛋鸡健康状况，增强机体抗病力。3.3凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂对绿壳蛋鸡血清免疫球蛋白和补体的影响血清免疫球蛋白由机体免疫器官产生，是机体抗原抗体免疫系统中的一类重要球蛋白，主要包括IgA、IgG、IgM。补体是体液中一组具有酶活性的糖蛋白，由肝细胞合成，参与防御和免疫调节等作用，介导免疫应答和炎症反应。血清中含量较高的补体主要为C3和C4。微生态制剂和植物提取物等功能性添加剂通过调节肠道黏膜免疫、抗炎、抗氧化、清除自由基等作用影响免疫球蛋白和补体的分泌，发挥其调节机体免疫力的作用。李伟[18]研究发现，在37周龄产蛋鸡日粮中添加复合微生物制剂，可提高血清IgA、IgG、IgM的含量。周苗等[29]研究发现，在固始鸡日粮中添加复合凝结芽孢杆菌-酵母培养物，可显著提高血清IgG和IgM含量。杨泰[22]研究发现，在蛋鸡日粮中添加姜黄素，不同程度地提高了血清IgA、IgG、IgM含量。袁肖笑等[30]研究发现，注射一定水平的黄芪多糖可提高蛋鸡血清中IgA、IgG、IgM、C3、C4含量。本试验中，各处理组蛋鸡血清IgA、IgG、IgM、C3、C4含量均无显著性差异，与上述试验结果不一致，可能是因为免疫力和血清免疫蛋白需保持适度水平，过高免疫系统亢进，过低容易生病，均不利于机体健康。凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂具有调节免疫力平衡的作用。本试验选择的蛋鸡正处于产蛋高峰期，代谢旺盛，推测整个鸡群免疫力和血清免疫蛋白已经处于较好的水平，故添加剂对血清IgA、IgG、IgM、C3、C4含量影响不显著。4结论绿壳蛋鸡日粮中添加凝结芽孢杆菌、姜黄素和免疫复合制剂，可以不同程度地改善绿壳蛋鸡生产性能和蛋品质，提高血清ALB含量和A/G，增强机体抗病力。其中，添加免疫复合制剂的效果较好。