地顶孢霉培养物（Acremonium terrestris culture，ATC）是一种从冬虫夏草中分离的地顶孢霉菌。地顶孢霉培养物作为工程菌，利用特异性生物发酵技术制备生产，地顶孢霉菌发酵产物中含有多种虫草有效成分，如虫草素、虫草多糖等，可以作为虫草的替代产品。研究发现，地顶孢霉可以通过提升SOD活性延长果蝇寿命[1]；给大鼠灌服ATC可提高其平均日增重，改善免疫功能[2]。柴明杰等[3]发现，日粮添加ATC有助于改善杂交育肥猪的肉品质与风味。杨景晁等[4]发现，日粮添加ATC可提高蛋鸡的生产性能，增强免疫力。江喜春等[5]发现，在日粮中适量添加ATC可提高湖羊的日增重。Li等[6]研究显示，日粮中补充ATC可以改善犊牛的生长性能及免疫功能。地顶孢霉培养物作为一种新型饲料添加剂，已经广泛应用于猪和家禽生产中[7-8]，对反刍动物的研究多见于犊牛[9]及围产期奶牛，对泌乳期奶牛研究的报道较少。本试验探究日粮中添加ATC对泌乳奶牛生产性能及血清指标的影响，为在奶牛生产中合理使用ATC提供依据。1材料与方法1.1试验材料试验所用地顶孢霉培养物由合肥迈可罗生物工程有限公司提供。营养成分含量为：粗蛋白（CP）22.37%、中性洗涤纤维（NDF）37%、酸性洗涤纤维（ADF）9.64%、粗灰分（Ash）5.44%、粗脂肪（EE）1.88%、淀粉401.5 g/kg。1.2试验设计选取生产性能相近的荷斯坦泌乳牛40头，随机分为对照组和试验组，每组20个重复。对照组奶牛饲喂基础日粮，试验组在基础日粮中添加地顶孢霉培养物30 g/(头·d)，搅拌均匀。基础日粮组成及营养水平见表1。每15 d采集1次TMR样品，根据张丽英[10]的方法检测TMR中常规营养成分含量。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.001.T001表1基础日粮组成及营养水平（干物质基础）原料组成含量/%营养水平合计100.00进口苜蓿9.30产奶净能/(MJ/kg)7.65全株玉米青贮25.27中性洗涤纤维/%24.28压片玉米17.62酸性洗涤纤维/%14.94玉米粉11.19粗蛋白/%19.01豆粕9.32粗脂肪/%4.35膨化大豆3.66钙/%0.90甜菜粕6.43磷/%0.58菜籽粕3.62糖蜜1.87啤酒糟4.64棉籽3.62脂肪粉0.94预混料2.52注：1.每千克预混料为日粮提供：VA 804 000 IU、VD3 188 800 IU、Cu 2 350 mg、Zn 3 550 mg、Mn 4 500 mg、Se 150 mg、Co 90 mg、烟酸800 mg。2.营养水平中产奶净能为计算值，其余均为实测值。1.3饲养管理饲养试验在现代牧业塞北牧场进行，每日11：00、18：00饲喂全混合日粮（TMR），1：00根据缺料情况进行填料，保证5%的剩料量。所有试验奶牛自由饮水。10：00、17：00、24：00挤奶3次。试验预试期15 d，正式试验期60 d。1.4测定指标及方法1.4.1干物质采食量（DMI）正式试验期每15 d测定1次DMI，每次连续测定3 d。记录投料量和剩料量，同时采集样品，测定干物质含量。1.4.2产奶量与乳成分正式试验期每天记录每头奶牛的产奶量。每15 d测定1次乳成分，早中晚按照4∶3∶3采集50 mL奶样。采用CombiFOSS6000牛奶综合指标分析仪和YQ1-57乳成分体细胞数联机测定仪，参照NY/T 2659—2014、NY/T 800—2004测定乳蛋白率、乳脂率、乳糖率和体细胞数等指标。氮利用效率=(乳蛋白产量/6.38)/(粗蛋白采食量/6.25)(1)1.4.3饲料转化率饲料转化率=(0.4M+15M×F)/MDMI (2)式中：M为非标准奶的重量（kg）；F为非标准奶的含脂量（kg）；MDMI为奶牛干物质采食量（kg/d）。1.4.4血清指标正式试验期每15 d采集1次血样，4 500 r/min离心20 min，取血清，-20℃保存。血清血糖、尿素氮、甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、β-羟丁酸、非酯化脂肪酸采用GF—D200全自动生化分析仪检测（山东高密彩虹分析仪器）。免疫球蛋白A、G、M以及三碘甲状腺原氨酸、甲状腺素、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和总抗氧化能力采用南京建成生物工程研究所试剂盒检测。1.5数据统计与分析试验数据采用Excel初步整理，采用SPSS 21.0软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），采用Turkey多重比较法进行差异显著性检验。P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1地顶孢霉培养物对泌乳奶牛生产性能及乳成分的影响（见表2）由表2可知，试验组奶牛平均日干物质采食量显著高于对照组（P0.05），产奶量极显著高于对照组（P0.01），氮利用效率显著高于对照组（P0.05）。试验组牛乳中乳蛋白产量、乳糖产量极显著高于对照组（P0.01）。试验组乳脂率、乳糖率及乳蛋白率高于对照组，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.001.T002表2地顶孢霉培养物对泌乳奶牛生产性能及乳成分的影响项目对照组试验组SEMP值平均日干物质采食量/(kg/d)26.92b27.28a0.06＜0.05产奶量/(kg/d)44.08B45.60A0.22＜0.013.5%乳脂校正乳/(kg/d)36.9637.150.530.55饲料转化率1.351.360.020.81氮利用效率0.25b0.26a0.00＜0.05乳脂率/%3.513.530.100.32乳蛋白率/%3.363.510.030.53乳糖率/%4.945.100.040.13乳脂产量/(kg/d)1.081.210.030.82乳蛋白产量/(kg/d)1.56B1.61A0.01＜0.01乳糖产量/(kg/d)2.18B2.33A0.01＜0.01乳尿素氮/(mg/L)140.60155.203.800.27体细胞数/(×104/mL)14.0113.715.770.92注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（P0.05），不同大写字母表示差异极显著（P0.01），无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。2.2地顶孢霉培养物对泌乳奶牛血清指标的影响（见表3）由表3可知，试验组奶牛血清中甘油三酯、总蛋白、白蛋白的含量及超氧化物歧化酶活性显著高于对照组（P0.05）。试验组奶牛血清中三碘甲状腺原氨酸及甲状腺素含量与对照组相差较大，但差异不显著（P0.05）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.001.T003表3地顶孢霉培养物对泌乳奶牛血清指标的影响项目对照组试验组SEMP值血糖/(mmol/L)4.474.380.040.37尿素氮/(mmol/L)7.006.600.230.40甘油三酯/(mmol/L)0.33b0.38a0.01＜0.05胆固醇/(mmol/L)4.744.960.160.62低密度脂蛋白/(mmol/L)1.951.980.160.93高密度脂蛋白/(mmol/L)2.632.800.110.48总蛋白/(g/L)77.83b82.78a1.13＜0.05白蛋白/(g/L)36.13b37.88a0.42＜0.05谷丙转氨酶/(U/L)23.2922.191.020.60谷草转氨酶/(U/L)62.7561.145.050.88β-羟丁酸/(mmol/L)0.430.450.010.53非酯化脂肪酸/(μmol/L)47.9449.291.630.69免疫球蛋白A/(mg/L)285.99298.579.770.53免疫球蛋白G/(g/L)9.669.70.340.96免疫球蛋白M/(g/L)2.392.490.060.46三碘甲状腺原氨酸/(μg/L)1.571.750.050.08甲状腺素/(μg/L)69.1079.162.860.08谷胱甘肽过氧化物酶/(μmol/L)13.1211.370.630.18丙二醛/(μmol/L)1.281.340.050.58过氧化氢酶/(U/mL)13.6913.690.491.00超氧化物歧化酶/(U/mL)75.82b84.86a2.42＜0.05总抗氧化能力/(U/mL)8.568.840.180.463讨论3.1地顶孢霉培养物对泌乳奶牛生产性能及乳品质的影响干物质采食量可反映动物营养摄入情况，受日粮、生理阶段及环境多方面影响。日粮主要受添加剂[11]、日粮消化率[12]等因素影响。本试验中，添加ATC组奶牛的干物质采食量显著高于对照组，与江喜春等[5]试验结果一致。李洋等[13]采用尼龙袋法分析ATC对粗饲料降解的影响，发现添加ATC可提高粗饲料瘤胃降解率，说明ATC通过提高日粮瘤胃降解率，达到提高DMI的效果。氮利用效率体现日粮氮到奶氮的转化效率，氮利用效率的提升可提升生产效率，降低排泄氮对环境产生的影响。Hassanat等[14]研究发现，在玉米青贮中添加亚麻籽油，日粮氮泌乳转化效率随着亚麻籽油的添加而提高，而粪尿中的氮则呈下降趋势。本试验中，添加ATC组奶牛氮利用效率显著高于对照组，说明添加ATC能够提高奶牛氮利用效率。张永根等[15]研究发现，在日粮中添加ATC可以提高瘤胃NH3-N浓度，说明ATC通过提高日粮瘤胃NH3-N浓度，达到提高氮利用率的效果。奶产量是奶牛生产性能的直接体现，DMI、养分消化率及氮利用效率的变化均会对奶产量产生影响[16]。本试验中，添加ATC组奶牛的产奶量极显著高于对照组，与王轶群[17]试验结果相似。本试验中，ATC在增加DMI的同时提高氮利用效率，提升奶牛营养与能量摄入，为高产奶量奠定基础。本试验中，添加ATC组奶牛的产奶量极显著高于对照组，但乳蛋白率、乳脂率、乳糖率间差异不显著，说明添加ATC对乳指标无不良影响。但试验组乳蛋白产量和乳糖产量均高于对照组，说明添加ATC可增加奶牛乳蛋白及乳糖的产量，原因可能与奶牛氮利用效率提升有关。3.2地顶孢霉培养物对泌乳奶牛血清指标的影响甘油三酯反映机体脂肪吸收与代谢情况[18-19]。本试验中，添加ATC组奶牛血清甘油三酯含量显著高于对照组，说明ATC能够增加血清甘油三酯含量。瘤胃内环境和VFA比例[20]能够影响机体代谢。王一臻等[21]研究发现，日粮添加ATC可以提高瘤胃乙酸、丙酸含量，说明ATC可以通过改变瘤胃内环境，增加甘油三酯的合成。总蛋白是机体白蛋白与球蛋白的总称，而其中白蛋白在维持渗透压[22]、免疫及营养物质运输[23]中均有一定的作用。本试验中，添加ATC组奶牛血清总蛋白、白蛋白含量显著高于对照组，与王一臻[24]试验结果相同。虫草类发酵物中含有虫草多糖，可有效刺激免疫细胞产生细胞因子[25]。因此，ATC可以通过刺激细胞产生细胞因子作用于机体或肝脏提高血液中总蛋白及白蛋白的含量。超氧化物歧化酶是机体抗氧化性能指标，可以参与抗氧化过程并在一定程度上修复氧化损伤[26]。本试验中，添加ATC组奶牛血清超氧化物歧化酶活性显著高于对照组，与王一臻[24]试验结果相同。ATC活性物质虫草酸具有抗自由基的功效[27]。本试验中，ATC通过虫草酸提升超氧化物歧化酶活性，达到抗自由基的功效，具体功效有待进一步验证。4结论日粮中添加地顶孢霉培养物能够显著提高奶牛生产性能，改善奶牛的乳品质和血清指标。