青稞是禾本科大麦属作物，具有抗旱、耐贫瘠、适应性强等特点[1]。青稞是西藏等地居民的主要粮食作物，青稞秸秆是当地牲畜的主要粗饲料资源[2]。由于西藏地区冬寒期较长，青稞秸秆作为主要补饲的粗饲料资源，质地偏硬、粗蛋白含量较低、木质纤维素含量较高。因此，改善青稞秸秆的营养品质、补足日粮的营养需求可以有效解决冬寒期牧草资源营养匮乏的问题，从而推进藏区畜牧业发展进程。微生物发酵是提高粗饲料品质较安全、较绿色、较高效的处理方法之一[3]。白腐真菌因其具有强大的木质素降解酶系统，可以有效提高秸秆的适口性和消化率，菌丝的生长繁殖可以增加秸秆发酵底物中氨基酸、维生素及抗氧化物质含量[4-6]。因此，白腐真菌可能成为推进秸秆饲料化首选微生物之一。目前，可食用无毒害的白腐菌种繁多，不同菌种对秸秆等粗饲料品质的改善能力不同。本研究选用3种常见的无毒害的白腐真菌发酵青稞秸秆，采用CNCPS体系对发酵底物进行评价，以期推进西藏地区青稞秸秆饲料化进程。1材料与方法1.1试验材料1.1.1菌种试验选用3种常见的侧耳属白腐菌：粉褶侧耳（Pleurotus rhodophyllus Bres，保藏号ACCC51513）、糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus，保藏号ACCC50149）和漏斗状侧耳（Pleurotus sajor-caju，保藏号ACCC51852），均购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。1.1.2培养基马铃薯固体培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g、蒸馏水1 000 mL，pH值自然，121 ℃高压灭菌20 min。1.1.3发酵底物发酵底物选用西藏自治区拉萨地区的青稞。青稞秸秆为蜡熟期去籽粒后的茎秆，于2020年10月份收割。1.2试验设计1.2.1菌种的活化和制备使用接种环将白腐菌接种到高压灭菌的马铃薯固体培养基中，25 ℃避光培养7 d后，取直径5 mm的白腐菌块，接种到新的固体马铃薯培养基中，扩繁备用。1.2.2固态发酵取100 g发酵底物（含水量为65.0%）装入到耐高温的聚丙烯袋中，压实，封口。121 ℃蒸汽高压处理30 min，过夜，再次121 ℃高压灭菌30 min，室温下冷却后接种。对照组（CK组）青稞秸秆不接种菌株，试验组青稞秸秆分别接种3种侧耳属白腐菌，每组6个重复。接种量为底料干物质含量的1%，接种后在25 ℃无光恒温培养箱内培养21 d。发酵结束后，在65 ℃烘箱内烘干至恒重，粉碎后保存待测。1.3测定指标及方法1.3.1营养成分粗蛋白质（CP）、粗灰分（Ash）、粗脂肪（EE）参照张丽英[7]的方法测定；酸性洗涤木质素（ADL）、中性洗涤不溶蛋白质（NDFIP）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）和酸性洗涤不溶蛋白质（ADFIP）参照Soest等[8]的方法测定；可溶性蛋白质（SP）参照Krishnamoorthy等[9]的硼酸-磷酸盐缓冲液法测定；非蛋白氮（NPN）、淀粉（starch）参照AACC方法测定[10]。1.3.2CNPCS组分蛋白质组分的计算公式为：PA(%CP)=NPN(%SP)×0.01×SP(%CP)(1)PB1(%CP)=SP(%CP)-PA(%CP)(2)PB2(%CP)=100-PA(% CP)-PB1(% CP)-PB3(%CP)-PC(%CP)(3)PB3(%CP)=NDFIP(%CP)-ADFIP(%CP)(4)PC(%CP)=ADFIP(%CP)(5)式中：PA为非蛋白氮；PB1为快速降解蛋白；PB2为中速降解蛋白；PB3为慢速降解蛋白；PC为不可降解蛋白；SP为可溶性蛋白；NPN为非蛋白氮。NDFIP为中性洗涤不溶蛋白质；ADFIP为酸性洗涤不溶蛋白质。碳水化合物组分的计算公式为：CA(%CHO)=[100-starch(%CNSC)]×[100-CB2(%CHO)-CC(%CHO)]/100%(6)CB1(%CHO)=starch(%CNSC)×[100-CB2(%CHO-CC(%CHO)]/100%(7)CB2(%CHO)=100×[NDF(%DM)-NDFIP(%CP)×0.01×CP(%DM)-NDF(%DM)×0.01×ADL(%NDF)×2.4]/CHO(%DM)(8)CC（%CHO）=100×[NDF（%0DM）×0.01×ADL（%NDF）×2.4]/CHO（%DM）（9）CHO(%DM)=100-CP(%DM)-EE(%DM)-Ash(%DM)(10)CNSC(%CHO)=100-CB2(%CHO)-CC(%CHO)(11)式中：CA为糖类；CB1为碳水化合物和果胶；CB2为可利用纤维素；CC为不可利用纤维素；CHO为不可利用纤维素；CNSC为非结构性碳水化合物；starch（%CNSC）为淀粉在非结构碳水化合物中的百分比。1.4数据统计与分析采用SPSS 16.0软件进行数据分析，采用单因素方差分析（One-way ANOVA）和LSD法分析组间差异显著性，结果以“平均值±标准差”表示。P0.05表示差异显著，P0.01表示差异极显著。2结果与分析2.1白腐真菌发酵对青稞秸秆常规营养成分的影响（见表1）由表1可知，3种白腐真菌均有效改善青稞秸秆的营养价值。3种白腐真菌组青稞秸秆的CP、EE、SP和NPN含量均高于CK组。P. sajor-caju组青稞秸秆CP、EE、SP和NPN极显著高于其他各组（P0.01），P. rhodophyllus Bres组青稞秸秆CP含量显著高于CK组（P0.05）。与CK组相比，3种白腐真菌组青稞秸秆Ash、NDF、ADF、ADL、starch、NDFIP和ADFIP含量极显著降低（P0.01），其中P. sajor-caju组降低幅度最大。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.018.T001表1白腐真菌发酵对青稞秸秆常规营养成分的影响组别CPEEAshNDFADFADLstarchSPNPNNDFIPADFIPCK组（对照组）4.52±0.13Cd1.36±0.04D6.79±0.14A64.97±1.62A39.83±0.66A19.02±0.35A0.99±0.07A1.57±0.04D0.67±0.04D1.45±0.05A1.26±0.03AP. sajor-caju组6.52±0.26Aa2.27±0.04A4.59±0.31C47.94±0.23D31.55±0.67C10.21±0.69D0.79±0.31C2.84±0.08A1.36±0.02A0.93±0.04D0.47±0.08DP. ostreatus组5.46±0.11Bb1.83±0.05B5.49±0.23B50.71±0.97C35.29±1.20B12.92±0.41C0.85±0.19BC2.16±0.06B0.99±0.03B1.05±0.78C0.72±0.56CP. rhodophyllus Bres组4.77±0.14Cc1.67±0.03C5.49±0.17B55.98±0.59B35.21±2.10B15.96±0.54B0.89±0.02B1.95±0.02C0.78±0.15C1.22±0.04B0.97±0.03B注：同列数据肩标不同大写字母表示差异极显著（P0.01），不同小写字母表示差异显著（P0.05），相同字母或无字母表示差异不显著（P0.05）；下表同。%DM2.2白腐真菌发酵对青稞秸秆CNCPS蛋白质组分的影响（见表2）由表2可知，白腐真菌能够改善青稞秸秆的蛋白质组分。3种白腐真菌组青稞秸秆的PA、PB1、PB2和PB3含量均高于CK组，PC含量均低于CK组。与CK组相比，P. sajor-caju组和P. ostreatus组青稞秸秆中PA、PB2和PB3含量极显著增加（P0.01）；P. rhodophyllus Bres组青稞秸秆PB1含量极显著增加（P0.01），PA和PB3含量显著增加（P0.05），PB2含量无显著差异（P0.05）。P. sajor-caju组青稞秸秆PC含量极显著低于其他处理组（P0.01）。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.018.T002表2白腐真菌发酵对青稞秸秆CNCPS蛋白质组分的影响组别PAPB1PB2PB3PCCK组（对照组）14.91±0.93Bc19.77±1.16Cc33.19±0.43B4.19±0.79Cc27.94±0.92AP. sajor-caju组22.65±0.47Aa22.65±0.47ABb42.25±1.71A6.95±1.39Aa7.29±1.38DP. ostreatus组21.43±0.47Aa21.43±1.34BCb41.17±1.61A6.11±0.67ABab13.17±0.99CP. rhodophyllus Bres组16.40±0.74Bb24.44±1.59Aa33.52±1.49B5.32±0.58BCb20.32±0.55B%CP2.3白腐真菌发酵对青稞秸秆CNCPS碳水化合物组分的影响（见表3）由表3可知，与CK组相比，P. sajor-caju组青稞秸秆CHO含量极显著降低（P0.01），P. rhodophyllus Bres组青稞秸秆CHO含量极显著增加（P0.01）。与CK组相比，3种白腐真菌组青稞秸秆CA、CNSC含量极显著增加（P0.01），其中P. sajor-caju组含量最高。与CK组相比，P. rhodophyllus Bres组青稞秸秆CB1含量显著增加（P0.05），P. sajor-caju组和P. ostreatus组青稞秸秆CB1含量极显著增加（P0.01）。3种白腐真菌组青稞秸秆CC含量极显著降低（P0.01），其中P. sajor-caju组含量最低。10.13557/j.cnki.issn1002-2813.2021.22.018.T003表3白腐真菌发酵对青稞秸秆CNCPS碳水化合物组分的影响组别CHO/(%DM)CA/(%CHO)CB1/(%CHO)CB2/(%CHO)CC/(%CHO)CNSC/(%CHO)CK组（对照组）87.33±0.24B26.71±0.59D1.13±0.09Cd19.91±1.50B52.27±1.03A27.84±0.71DP. sajor-caju组86.62±0.54C45.63±0.37A2.09±0.13Aa24.02±1.95A28.28±1.77D47.72±0.29AP. ostreatus组87.23±0.27B42.62±1.18B1.55±0.09Bb20.28±2.16B35.54±1.10C44.18±1.17BP. rhodophyllus Bres组88.07±0.20A37.07±0.62C1.27±0.08Cc18.18±1.15B43.48±1.42B38.34±0.66C3讨论3.1白腐真菌发酵对青稞秸秆常规营养成分的影响本研究中，白腐真菌可有效改善青稞秸秆的营养成分，白腐真菌发酵的青稞秸秆中CP、EE和SP含量分别增加5.50%~44.25%、13.66%~40.09%、24.20%~80.89%，ADL含量降低16.09%~46.32%。其中，P. sajor-caj发酵效果最佳，与以玉米秸秆作为发酵底物时的研究结果相一致[11]。El-Fall等[12]选用3种侧耳属白腐真菌（P. sajor-caju、P. columbinus 和P. floridanus）30 ℃发酵小麦秸秆30 d，结果表明，P. sajor-caju改善小麦秸秆营养价值效果最优，CP含量是对照组的3倍。Shrivastava等[13]研究发现，Crinipellis sp. RCK-1发酵小麦秸秆，随着发酵时间的延长，CP含量增加，木质纤维素成分含量下降；发酵9 d，CP增加40.81%，酸性木质素降低16.06%。Shamim等[14]采用P. sajor-caju在30 ℃条件下发酵椰子壳56 d，CP和还原糖含量分别提高744.44%和113.80%，粗纤维、碳水化合物、木质素、纤维素和半纤维素含量分别降低33.04%、20.94%、25.75%、18.57%和24.42%。上述研究表明，秸秆发酵效果与微生物种属、作用底物、发酵温度及时间等因素密切相关。本研究中，白腐真菌发酵后的青稞秸秆中NDIP和ADIP含量降低，可能是由于发酵过程中微生物将不可溶性蛋白转化成菌体蛋白。白腐真菌利用淀粉满足自身的生长，发酵过程中淀粉含量下降。P. sajor-caju可以高效地将木质纤维素废物转化为营养更好的动物饲料。3.2白腐真菌发酵对青稞秸秆CNCPS蛋白质组分的影响康奈尔净碳水化合物-蛋白质体系能够精细地划分粗饲料的营养成分，反映反刍动物对饲料营养物质的利用度[15]。日粮中的PA和PB1主要用于合成微生物蛋白，PB2和PB3含量与过瘤胃蛋白量密切相关[16]。本研究中，P. sajor-caju组青稞秸秆的PA、PB1、PB2和PB3含量较高，说明P. sajor-caju发酵的青稞秸秆在瘤胃的发酵速率较快，增加过瘤胃蛋白含量，提高蛋白质的消化利用效率。白腐真菌发酵的青稞秸秆PC含量下降，可能是微生物发酵过程中利用部分PC转化成菌体蛋白。其中，P. sajor-caju组青稞秸秆PC含量最低，表明P. sajor-caju发酵的青稞秸秆蛋白品质最优，蛋白质的生物学效价最高[17]，可以作为一种优质的蛋白质饲料。3.3白腐真菌发酵对青稞秸秆CNCPS碳水化合物组分的影响CHO是反刍动物从粗饲料中获取的主要能源物质。本研究中，各试验组CHO的含量为84%~88%，P. sajor-caju组青稞秸秆CA含量最高，表明P. sajor-caju发酵青稞秸秆在瘤胃内消化速率和利用效率均高于其他试验组，营养价值较好。CB2是结构性碳水化合物的主要成分，P. sajor-caju组青稞秸秆CB2最高，约为24%，说明P. sajor-caju发酵青稞秸秆的营养价值相对较高。P. sajor-caju组CC含量最低，CNSC含量最高，表明P. sajor-caju发酵的青稞秸秆可被反刍动物利用的碳水化合物较多。CC为不可利用纤维素，其含量与ADL含量呈正相关[18]，直接影响饲料的消化率。P. sajor-caju对ADL具有较强的降解能力，能够提高饲料在瘤胃内的滞留时间，增加粗饲料的消化率[19]，可能是P. sajor-caju组CC含量最低的主要原因。4结论白腐真菌能够有效改善发酵青稞秸秆的营养品质，提高秸秆的利用效率。其中，P. sajor-caju发酵的青稞秸秆中含有较多可利用的蛋白质和碳水化合物，发酵效果最优。